Bmi－1与MMP－2在肺腺癌组织中的表达及其临床意义

孟秀香，刘丹丹，聂慧玲，刘纯青，刘 奔，赵宝霞，赵心宇，杨 红

（1.辽宁师范大学 生命科学院，辽宁 大连116081；2.大连医科大学 检验医学院，辽宁 大连116044；3.大连市第五人民医院 病理科，辽宁 大连116021）

非小细胞肺癌（NSCLC）约占全部肺癌的85%，一般将其分为三个主要组织亚型：即鳞癌、腺癌（lung adenocarcinoma）和大细胞癌。肺腺癌与吸烟关系不大，其局部浸润和血行转移较鳞癌早。肺腺癌极易侵袭、转移及复发是临床治疗的难点。尽管关于肺腺癌发生发展的分子机制的知识积累在快速增加，但我们对肺腺癌发生发展确切机制的了解仍较为 贫乏。Bmi－1 （B cell－specific Moloney murine leukemia virus insertion site 1）基因最初作为原癌基因由荷兰癌症中心于1991发现的［1］，Bmi－1与cmyc基因协同使得B细胞发生改变从而导致鼠淋巴瘤［2］。Bmi－1基因在人类很多常见的恶性肿瘤中都存在高表达［3－6］，并与肿瘤的转移密切相关。有关Bmi－1在肺癌中的表达已有报道，非小细胞肺癌中Bmi－1表达较正常肺组织明显增高［7］。Bmi－1在肺癌晚期（Ⅲ＋Ⅳ期）较肺癌早期（Ⅰ＋Ⅱ期）表达明显增加［8］，这说明Bmi－1参与了肺癌的发生发展的机制。本实验应用免疫组织化学法（S－P法）检测肺腺癌患者中癌组织及癌旁组织中Bmi－1和MMP－2蛋白的表达水平，分析两者与临床病理特征的关系及两者之间的相关性。

1 材料和方法

1.1 临床资料 肺癌组织标本来自大连市第五人民医院，选取大连市2009－2010年诊断明确、资料完整的手术切除肺部癌组织标本38例，同时选取相应的癌旁组织标本35例作为对照。所有病例资料完整。上述38例肺癌组织临床病理特征如下：性别：男18例、女20例；年龄41－79岁，平均64岁；TNM分期：Ⅰ期17例，Ⅱ期8例，Ⅲ期12例，Ⅳ期1例；有淋巴结转移18例，无淋巴结转移20例。所有病例术前均未接受放、化疗，术后均经组织病理学检查确诊。

1.2 试剂及仪器 Bmi－1一抗购自Abcam公司；MMP－2一抗购自CST公司；二抗试剂盒及DAB显色试剂盒购自福州迈新生物技术开发有限公司。

1.3 方法 标本经10%的中性福尔马林固定后石蜡包埋，常规制片，采用免疫组织化学S－P法进行染色。具体操作步骤按试剂盒说明书进行。

1.4 结果判定 Bmi－1表达在癌细胞核中，MMP－2蛋白表达于细胞浆中，细胞核或浆中出现棕黄色颗粒者为阳性细胞。高倍显微镜下（×400）观察，按阳性细胞占细胞总数的百分比计分：≤10%为1分，＞10%且≤50%为2分，＞50%且≤75%为3分，＞75%为4分；同时根据染色的强弱来计分：阴性或弱染色者1分，中等强度染色2分，强染色3分，根据二者的乘积来判断结果：≤8分为低表达，＞8分为高表达。

1.5 统计学处理 采用SPSS13.0软件分析数据。所有统计均选取χ2检验，P＜0.05为具有显著性差异。

2 结果

2.1 Bmi－1在肺腺癌及癌旁组织中的表达 Bmi－1呈胞核表达，细胞核中出现棕黄色颗粒者为阳性细胞。结果显示，在38例肺腺癌组织中Bmi－1阳性高表达明显高于癌旁组织，两者差异有统计学意义（P＜0.01，表1）。

表1 肺腺癌组织及癌旁组织中Bmi－1的表达情况

2.2 MMP－2在肺腺癌及癌旁组织中的表达MMP－2呈胞浆表达，细胞浆中出现棕黄色颗粒者为阳性细胞。结果显示，在38例肺腺癌组织中MMP－2在癌组织中的阳性高表达明显高于癌旁组织，两者差异有统计学意义（P＜0.01，表2）。

表2 肺腺癌组织及癌旁组织中MMP－2的表达情况

2.3 Bmi－1／MMP－2蛋白的表达与肺腺癌分期和转移的关系χ2检验结果显示，肺腺癌组织中Bmi－1的表达与淋巴结转移、TNM分期密切相关，而与患者的性别、年龄、病理类型、肿瘤体积大小无关。TNM分期高的组织（Ⅲ－Ⅳ期）中Bmi－1高表达率为92%（12／13），较分期低的组织（Ⅰ－Ⅱ期）明显增加（60%，15／25），统计学差异显著（P＜0.05）。在有淋巴结转移的组织中Bmi－1高表达率为94%（17／18）较无淋巴结转移者明显增加（50%，10／20），统计学差异显著（P＜0.01）。38例癌组织中 MMP－2的表达和淋巴结的转移呈正相关，而与年龄、性别、瘤块大小、TNM分期均无相关性。在有淋巴结转移的组织中，MMP－2高表达率为38.9%（7／18），明显高于没有淋巴结转移者10%（2／20），统计学差异显著（P＜0.05）。同时Spearman相关性分析显示，Bmi－1与 MMP－2表达呈正相关（P＜0.05）。

3 讨论

在本研究中Bmi－1在肺腺癌中表达明显增加，38例肺腺癌癌组织中Bmi－1表达水平明显高于癌旁组织，这与其他文献报道一致：Vonlanthen等［9］对48例NSCLC组织进行了Bmi－1蛋白检测，和癌旁组织相比明显增高。近几年的研究发现，Bmi－1和许多肿瘤的侵袭转移、预后也密切相关。Huang等［10］对胃癌患者进行了研究，发现癌组织Bmi－1表达水平显著高于癌旁组织，并且Bmi－1的表达水平和胃癌瘤块的大小及淋巴结的转移均呈现正相关，并且发现Bmi－1阳性表达者的生存时间明显低于阴性表达者胃癌病例；冯艳等［11］的研究表明：有淋巴结转移的乳腺癌中Bmi－1的表达高于无转移的病例，与乳腺癌的病程具有正相关性。Zhang等［12］对134例肺癌标本进行了Bmi－1分析，74例病人Bmi－1表达呈阳性，并且Ⅲ期肺癌患者Bmi－1表达高于Ⅰ和Ⅱ期者。为了证实Bmi－1是否介入了肺腺癌的发生发展进程，我们进一步分析了Bmi－1与肺腺癌患者各临床病理特征的相关性，结果表明：Bmi－1的表达与TNM分期、淋巴结转移呈正相关，而与其他特征不相关。推测原癌基因Bmi－1可能介入了肺腺癌的病理过程。类似的结果在其他肿瘤研究中也得到了体现：黄开红等［13］的研究结果表明：Bmi－1在胃癌组织中的表达水平显著高于相应的癌旁组织，并且Bmi－1的表达水平与胃癌患者瘤块的大小及淋巴结的转移均呈正相关，同时Bmi－1阳性表达者的生存时间明显低于阴性表达者；Song等［14］研究结果显示：Bmi－1基因呈阳性表达的鼻咽癌患者，5年期生存率要明显低于Bmi－1表达阴性的鼻咽癌病人。

导致恶性肿瘤治疗失败和致死的主要原因之一是肿瘤的侵袭转移。近年来对恶性肿瘤的侵袭转移机制的研究正日趋深入。Liotta［15］提出侵袭转移三步学说：即黏附、降解和移动。其基本过程是肿瘤细胞对细胞外基质（Extracellular matrix，ECM）和血管基底膜的降解和破坏。因此ECM和血管基底膜的降解、破坏是肿瘤侵袭及转移的重要步骤，而组成ECM和基底膜的主要结构蛋白为Ⅳ型胶原，基质金属蛋白酶（matrix metallo proteinases，MMPs）能够降解细胞外几乎全部的基质成分，破坏基底膜，是肿瘤细胞浸润周围正常组织中的物质基础［16］。MMPs中的MMP－9和MMP－2是降解Ⅳ型胶原的主要酶，因此，MMP－9和MMP－2在肿瘤细胞的侵袭和转移过程中占有非常重要的地位［17］。已有多篇文章报道MMP－2与非小细胞肺癌的转移关系密切［18］。说明 MMP－2参与了肿瘤的转移过程。Suzuki等［19］发现在 NSCLC中的 MMP－2和 MMP－9均有高表达，且 MMP－2的表达明显强于 MMP－9，故认为 MMP－2在肺癌发生发展中发挥比 MMP－9更加重要的作用。因此本实验检测了MMP－2的表达情况，结果发现MMP－2的高表达与淋巴结转移密切相关，同时发现Bmi－1与MMP－2呈正相关性。进一步证实了Bmi－1参与了肺腺癌的侵袭与转移。

总之，本研究结果表明Bmi－1和 MMP－2在肺腺癌组织中高表达并具有相关性，同时二者在有淋巴结转移组的表达高于无淋巴结转移组，说明Bmi－1与肺腺癌的侵袭密切相关。为人们探讨肺腺癌的侵袭转移机制提供了重要的参考价值。

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