中药添加剂对热应激家兔免疫球蛋白浓度的影响

■于小杰 王 净 崔 平 田 勇 方素芳

（河北北方学院动物科技学院，河北张家口 075131）

夏季持续高温使家兔机体产生明显的热应激反应。近年来，随着大规模集约化兔业养殖的发展，热应激对家兔生产性能、繁殖机能、免疫功能的影响越来越大，并造成一定的经济损失。有研究表明，热应激能够导致家兔采食量减少、体重降低、生产性能下降，由于营养物质缺乏而使兔毛生长缓慢，剪毛量下降，毛质较差。已有研究发现，随着环境温度升高，家兔采食量逐渐降低。在繁殖能力方面，由于高温能抑制下丘脑促性腺激素释放激素的合成与分泌，对睾丸机能产生不利影响，会降低雄性个体繁殖能力。高温条件下，会使雌性个体雌激素分泌减少，发情不规律，影响正常的性机能活动。研究发现，较高的气温使家兔受胎率降低，胚囊、胚胎变小，胚胎早期死亡率升高，且造成哺乳期幼仔营养不良，成活率下降。在免疫功能方面，热应激使促肾上腺皮质激素的合成与分泌增强，从而使肾上腺合成和分泌糖皮质激素增加。糖皮质激素具有抗免疫反应的作用，使体液免疫和细胞免疫功能降低，导致机体免疫机能下降。在养殖过程中，针对家兔热应激表现的临床症状主要是采用化学药物进行治疗，但是化学药物会产生药物残留，造成耐药性等缺点。近年来，中草药添加剂的免疫增强作用逐渐受到重视，由于其毒副作用小、来源广、使用方便且残留小，不易产生耐药性等优点被广泛应用。据文献报道，在日粮中添加中药添加剂不仅可提高幼兔的身体增重、公兔的精子活力，降低精子的畸形率，还可提高母兔的受胎率。针对热应激反应的研究表明，中药添加剂能够有效缓解家兔的热应激反应。也有研究表明，通过饲喂中药添加剂能够增强动物机体的免疫力。本研究通过饲喂中药添加剂，研究在热应激状态下家兔免疫球蛋白水平的变化，旨在确定中药添加剂对热应激家兔免疫功能的调节作用，以期为实际生产中饲喂中药添加剂的应用提供一定的科学依据。

1 材料和方法

1.1 中药添加剂配方

根据中医学的基础理论，针对家兔热应激反应的临床症状，以清热解毒、解表去湿、补胃健脾、消炎镇静等缓解热应激反应和提高机体免疫能力的中药成分配置，配方如下：黄芪、党参、当归、白芍、女贞子、淫羊藿、艾叶、黄芩、连翘、薄荷、藿香、苍术、五加皮、山楂等按一定比例配伍，粉碎后按一定比例加入试验组家兔基础饲料中。

1.2 试验动物及试验设计

20只成年健康家兔，体重相当，雌雄各半，随机分为2组，试验组和对照组，每组10只，并分别按个体编号。试验期间每只家兔用饲养代谢笼养殖，可自由采食和饮水，试验前观察两组家兔均处于健康状态，试验分两个阶段进行，分别是常温饲喂期和高温饲喂期。常温饲喂期30 d，两组动物均处于正常室温条件下，试验组动物在基础饲料中添加1%的中药添加剂，对照组动物饲喂基础饲料。高温饲喂期5 d，两组动物圈舍温度设置为高温40℃，并在试验组动物饲料中继续添加1%的中药添加剂，对照组动物仍然饲喂基础饲料，试验期间各组湿度和光照时间一致。

1.3 样本收集及测定

常温饲喂期第1 d早上8:00的血液测定数值为基准值，从高温饲喂期第1 d早上8：00开始，对试验组和对照组动物耳缘静脉采血，第1次采集血液样本记为0 h的样本，以后分别于6、12、18、24、30、36、48、60、72、84、96、108、120 h采集，采集血液样本于37 ℃恒温箱1 h，4℃恒温箱中40 min，经2 500 r/min离心15 min取上清液分装于1.5 ml Eppendorf管中，置于-20℃冰箱中保存待测。采用酶联免疫吸附法测定两组动物血液IgG、IgM、IgA的浓度。酶联免疫吸附诊断试剂盒购自北京梦怡美生物科技有限公司，测定步骤按照试剂盒说明书操作。

1.4 数据处理

运用SPSS16.0分析软件。所有测定结果通过单一样本K-S检验（One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test）进行正态分布检验，数据均符合正态分布。组间使用独立样本T检验（Independent-Samples T test）和配对T检验（Paired-Samples T test），采用Pearson’s correlation test进行变量间的相关性分析。在进行数据分析之前对数据进行方差齐性检验。P≤0.05被认为差异显著。测定结果均表示为Mean±SE。

2 结果与分析

2.1 中药添加剂对热应激家兔血液IgG的影响

表1 对照组和试验组高温刺激前血液IgG浓度（μg/ml）

如表1所示，在对试验组没有饲喂中药添加剂前，试验组和对照组家兔IgG浓度基准值均值分别为(278.23±8.02)μg/ml和(285.71±4.92)μg/ml，通过T检验得出二者没有显著差异（P＞0.05）。经过对试验组家兔饲喂中药添加剂30 d后，开始给予对照组和试验组动物高温热刺激0 h的样本测定结果得出，在0 h试验组和对照组家兔血液样本IgG浓度分别为(298.35±9.03)μg/ml和(274.07±6.10)μg/ml，通过T检验得出二者差异显著（P＜0.05）。

如图1所示，随着温度升高，两组动物IgG浓度在30 h内均呈逐渐升高趋势，试验组在第18 h、对照组在第24 h达到峰值，分别是0 h的1.23倍和1.24倍，与0 h浓度差异显著(P＜0.05)。之后，随着温度的升高，两组动物IgG均表现明显下降趋势，试验组在72 h后，对照组在60 h后，两组动物IgG均与0 h浓度差异显著(P＜0.05)。对试验组和对照组动物6 h后的所有IgG浓度进行配对T检验，得出试验组家兔IgG浓度显著高于对照组(P＜0.05)。

图1 试验组和对照组免疫球蛋白G浓度比较

2.2 中药添加剂对热应激家兔血液IgM的影响

表2 对照组和试验组高温刺激前血液IgM浓度（μg/ml）

如表2所示，在对试验组没有饲喂中药添加剂前，试验组和对照组家兔IgM浓度基准值均值分别为(43.14±2.12)μg/ml和(42.09±1.97)μg/ml，通过T检验得出二者没有显著差异(P＞0.05)。经过对试验组家兔饲喂中药添加剂30 h后，开始给予对照组和试验组动物高温热刺激时的0 h血液测定结果得出，在0 h试验组和对照组家兔IgM浓度分别为(48.62±1.79)μg/ml和(41.17±2.07)μg/ml，通过T检验得出二者差异显著(P＜0.05)。

图2 试验组和对照组免疫球蛋白M浓度比较

如图2所示，随着温度升高，两组动物IgM浓度均呈先升高后降低的趋势，试验组在第18 h、对照组在第24 h达到峰值，分别是0 h的1.40倍和1.60倍，与0 h浓度差异显著（P＜0.05）。对试验组和对照组动物6 h后的所有IgM浓度进行配对T检验，得出两组动物IgM浓度差异显著（P＜0.05）。

2.3 中药添加剂对热应激家兔血液IgA的影响

表3 对照组和试验组高温刺激前血液IgA浓度（μg/ml）

如表3所示，在对试验组没有饲喂中药添加剂前，试验组和对照组家兔IgA浓度基准值均值分别为(43.56±1.72)μg/ml和(41.38±1.89)μg/ml，通过T检验得出二者无差异(P＞0.05)。经过对试验组动物饲喂中药添加剂30 d后，开始给予两组家兔高温热刺激时的0 h血液测定结果得出，在0 h试验组和对照组家兔IgA浓度分别为(42.97±2.05)μg/ml和4(2.23±1.91)μg/ml，通过T检验得出二者在统计学上差异不显著(P＞0.05)。

图3 试验组和对照组免疫球蛋白A浓度比较

如图3所示，随着温度升高，两组动物IgA浓度呈先升高后降低的趋势，虽然两组动物IgA浓度在高温热刺激后略有升高，但和0 h IgA浓度均无显著差异（P＞0.05）。随高温持续时间延长，两组动物IgA浓度均明显下降。试验组在第48 h后显著低于0 h水平（P＜0.05），对照组在第36 h显著低于0 h水平（P＜0.05），对试验组和对照组动物6 h后的所有IgA浓度进行配对T检验，得出两组动物IgA浓度无统计学差异（P＞0.05）。

2.4 家兔血液IgG、IgM、IgA的相关性

如表4所示，对所有研究对象血液IgG、IgM、IgA进行相关性分析得出，家兔IgG与IgM呈极显著正相关（r=0.916，P=0.000），家兔IgG与IgA呈极显著正相关（r=0.832，P=0.000），家兔IgM与IgA也呈极显著正相关（r=0.692，P=0.000）。

表4 家兔IgG、IgM、IgA的相关关系

3 讨论

3.1 中药添加剂对热应激家兔IgG的影响分析

动物机体在受到外界刺激以后，机体会调动免疫机制，有一个快速有效的免疫应答反应。当动物机体受到外界刺激，处于一定水平的应激反应状态时，应答机制会促进免疫球蛋白的产生，而过强或长时间持续的外界刺激会抑制免疫球蛋白的产生。人和脊椎动物的免疫球蛋白根据其理化性质尤其是免疫学性质可分为五类：IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。其中IgG是血液、组织液、淋巴液中含量最高的免疫球蛋白，约占动物血清免疫球蛋白总量的75%～80%。在五类免疫球蛋白中，IgG含量最高，分布最广，半衰期最长，是机体再次免疫应答的主要抗体。可对抗各种细菌，病毒，中和毒性物质和调节过敏反应，大多数抗细菌、抗病毒和抗毒素抗体都属于IgG类抗体。本研究通过对中药添加剂组和对照组血清IgG浓度的测定得出，在没有对试验组饲喂中药添加剂前，两组动物的IgG基准值水平无差异（P＞0.05），在对试验组动物基础日粮中添加自治中药添加剂，经过30 d的饲喂后，试验组IgG水平显著高于对照组（P＜0.05），这与黄伟煌对福建黄兔的研究结果相同。另迟玉杨等在吉戎兔饲料中添加维生素E也使得血清中IgG质量浓度显著提高。本研究中给予高温热刺激后，两组动物的IgG水平均呈先升高后降低的趋势，但中药添加剂组的IgG水平仍显著高于对照组（P＜0.05）。由此得出，在热应激反应条件下，在基础日粮中饲喂中药添加剂能够提高机体IgG水平。IgG是动物血液中的主要免疫球蛋白，在一定程度上代表机体的免疫水平，也是机体发生再次免疫应答产生的免疫球蛋白，是机体抵抗感染的主要免疫球蛋白。该研究结果表明，在基础日粮中添加自治中药制剂使IgG的水平提高，在一定程度上说明自治中药制剂有利于增强机体的免疫力水平，有利于抵抗热应激反应。

3.2 中药添加剂对热应激家兔IgM的影响分析

在五类免疫球蛋白中，IgM在早期感染中发挥重要免疫防御作用，是机体初次应答的主要抗体。本研究通过对中药添加剂组和对照组血清IgM浓度的测定得出，在没对试验组家兔饲喂中药添加剂前，两组动物的IgM基准值水平无差异（P＞0.05），在对试验组家兔基础日粮中添加自治中药添加剂，经过30 d的饲喂后，试验组IgM水平显著高于对照组（P＜0.05），这一研究结果与黄伟煌对福建黄兔的研究结果相同。给予高温热刺激后，两组家兔IgM水平均呈先升高后降低的趋势，但中药添加剂组IgM仍显著高于对照组（P＜0.05）。IgM是动物机体发生初次免疫应答产生的免疫球蛋白，激活补体和免疫调理作用更强。该研究结果表明，在基础日粮中添加自治中药制剂使IgM的水平呈上升趋势，说明在基础日粮中添加自治中药制剂有利于增强家兔机体的免疫力水平。

3.3 中药添加剂对热应激家兔IgA的影响分析

IgA同时具备IgG和IgM的免疫活性，而且在黏膜免疫中起重要作用。本研究通过对中药添加剂组和对照组IgA浓度的测定得出，在没有对试验组家兔饲喂中药添加剂前，两组动物的IgA基准值水平没有显著差异（P＞0.05），在对试验组家兔基础日粮中添加自治中药添加剂，经过30 d的饲喂后，试验组IgA浓度水平与对照组仍没有显著差异（P＞0.05）。这一研究结果与黄伟煌对福建黄兔的研究结果不同。在高温刺激后，虽然两组动物IgA都呈下降趋势，但是两组动物IgA水平仍不存在统计学差异。本研究中的研究结果猜测可能是与IgA并不参与初期免疫应答反应有关，具体理论机制还有待进一步研究。在高温热刺激48 h后，两组动物IgA水平均显著低于0 h的浓度值，可能是由于高温热刺激，家兔机体免疫调节能力受限所致。

3.4 家兔血液IgG、IgM、IgA相关性分析

对所有家兔IgG、IgM和IgA进行相关性分析得出，三者均显著相关（P＜0.01）。IgG和IgM变化趋势一致，说明机体在遇到外界环境刺激时，免疫系统发生快速有效的免疫应答反应，免疫系统所发生的免疫应答是协调一致的。

4 结论

该研究结果得出，自制中药添加剂有效提高家兔免疫球蛋白水平，在高温热应激条件下仍显著提高机体IgG、IgM水平，说明中药添加剂可以增强热应激家兔机体的免疫力。

（参考文献10篇，刊略，需者可函索）