杜仲叶的化学成分研究

董 芬，范田运，张建新，黄 滔，黄烈军*，郝小江*

1贵州大学生命科学学院，贵阳 550025;2 贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室，贵阳 550002

杜仲(Eucommia ulmoides Oilv.)为杜仲科杜仲属植物，又名木棉、丝连皮、思仲、思仙等，是我国特有的落叶乔木植物，其干燥树皮为我国名贵滋补药材［1］。杜仲入药已有2000 多年的历史，《神农本草经》和《本草纲目》均将其列为药之上品，具补中益气、坚筋骨、强志、安胎、久服轻身耐劳之功效。《本草汇言》中记载:“凡下焦之虑，非杜仲不补;下焦之湿，非杜仲不利。”多年来，国内外许多学者对杜仲的化学成分和药理作用进行了大量研究，发现杜仲具有调节血压、降低血糖、调节血脂、抗菌、抗病毒、抑制肿瘤细胞生长等药理作用，具有延缓衰老、美白养颜、滋阴补肾、强壮筋骨等功效［2-4］。其主要活性成分包括木脂素类、环烯醚萜类、苯丙素类、多糖类、黄酮类和萜类等［5］。传统入药部位是树皮，但近年来的研究表明，杜仲传统非药用部位如杜仲叶、杜仲雄花和翅果等，含有药用部位结构相同或相似的生物活性成分，如杜仲叶浸膏对麻醉猫具有非常明显的降压作用［6］，杜仲叶的氯仿提取物对免疫的抑制活性［7］，以及杜仲叶提取物因其补肾、强筋骨、抗衰老、安胎、调血脂、抗氧化等方面研究具有较好活性而受到关注，已在医药和保健品方面都有应用［1］。本课题组对杜仲叶化学成分进行了系统的研究，分离得到14 个化合物，其中化合物6、8、10、12 和13为首次从该属植物中分离得到。

1 仪器与材料

1H，13C NMR 和2D NMR 图谱用INOVA-400 核磁共振仪测定，以TMS 为内标。EI-MS 质谱用安捷伦-5973 型质谱仪测定，ESI-MS 以美国Thermo Finnigan 公司的Waters 2695 LCQ-MS 联用仪测定。柱层析硅胶(40～80 目、200～300 目、300～400目)、薄层层析硅胶H(60 型)、薄层层析使用硅胶GF254均为青岛海洋化工有限公司产品;柱色谱用反相硅胶RP-18 和薄层层析反相硅胶RP-18，RP-8 为Merck 公司产品;MCI(75～150 μm)柱层析材料为Mitsubishi Chemical 公司(日本东京)产品;大孔吸附树脂D101 为南开大学树脂厂产品;葡聚糖凝胶Sephadex LH-20 为Amersham Biosciences 公司(瑞典)产品;所用的有机溶剂(石油醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮和甲醇等)均为工业级，使用前重蒸处理;核磁共振用氘代试剂均为中科院武汉波谱公司产品;HPLC 所用试剂均为色谱纯;其它试剂均为分析纯。显色方法为254 和365 nm 荧光、10%浓硫酸的乙醇溶液，5%磷钼酸乙醇溶液以及碘蒸气显色。

实验用药材于2012 年7 月采自贵州省贵阳市三江农场，并由贵阳中医学院付志明教授鉴定为杜仲科杜仲属植物杜仲Eucommia ulmoides Oilv.的干燥叶。

2 提取与分离

取干燥的杜仲叶样品10 kg，粉碎后用10 倍量65%的乙醇溶液加热回流提取3 次(提取时间依次为5、4、3 h)后过滤，合并滤液，减压回收乙醇，加入适量蒸馏水混悬，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇各萃取3 次，减压回收溶剂，得石油醚萃取物650 g，乙酸乙酯萃取物1043 g，正丁醇萃取物220 g。

乙酸乙酯萃取物用硅胶(40～80 目)拌样。将拌好的样品采用硅胶(200～300 目)柱层析分离，先用石油醚:乙酸乙酯(1∶0～0∶1)，然后用乙酸乙酯:甲醇(1∶0～0∶1)进行梯度洗脱。合并相似部分，共分为6 段，标记为Fr.1 (13.2 g)、Fr.2 (20.5 g)、Fr.3 (62.3 g)、Fr.4 (53.3 g)、Fr.5 (502.5 g)和Fr.6 (273.4 g)。Fr.3 经多次正相硅胶柱色谱、凝胶柱色谱以及制备液相分离制备得到化合物10(23 mg)、11 (426 mg)、14 (42 mg);Fr.4 经MCI、正相、反相硅胶、Sephadex LH-20 等柱色谱分离制备得到化合物1(67 mg)、2 (56 mg)、8 (6 mg)、12 (7 mg)、13 (23 mg);Fr.5 经大孔树脂、正相、反相硅胶、凝胶等柱色谱以及HPLC 法等手段分离制备得化合物3 (1.6 g)、4 (11 mg)、5 (27 mg)、6 (25 mg);正丁醇部位经D101 大孔树脂及ODS 柱色谱分离得到化合物7 (8 mg)、9 (6 mg)。

3 结构鉴定

化合物1 黄色粉末，C15H10O6，易溶于丙酮;ESI-MS (positive)m/z 309 ［M+Na］+;1H NMR(CD3COCD3，400 MHz)δ:8.15 (2H，dd，J=6.8，2.0 Hz，H-2'，6')，7.01 (2H，dd，J=7.2，2.0 Hz，H-3'，5')，6.54 (1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，6.28(1H，d，J=2.0 Hz，H-6);13C NMR (CD3COCD3，100 MHz)δ:146.9 (C-2)，136.6 (C-3)，176.5 (C-4)，160.1 (C-5)，99.1 (C-6)，164.9 (C-7)，94.4(C-8)，157.7 (C-9)，104.1 (C-10)，123.2 (C-1')，130.4 (C-2')，116.3 (C-3')，160.1 (C-4')，116.3(C-5')，130.4 (C-6')。以上波谱数据与文献［8］报道基本一致，鉴定化合物1 为kaempferol。

化合物2 黄色粉末，C15H10O7，易溶于丙酮;ESI-MS (positive)m/z 303［M+H］+，325［M +Na］+;1H NMR (CD3COCD3，400 MHz)δ:7.66(1H，d，J=1.6 Hz，H-2')，7.54 (1H，dd，J=6.7，1.8 Hz，H-6')，6.88 (1H，d，J=6.7 Hz，H-5')，6.39 (1H，d，J=1.4 Hz，H-8)，6.18 (1H，d，J=1.4 Hz，H-6);13C NMR (CD3COCD3，100 MHz)δ:146.8 (C-2)，135.8 (C-3)，175.8 (C-4)，156.1 (C-5)，98.2 (C-6)，163.9 (C-7)，93.3 (C-8)，160.7(C-9)，103.0 (C-10)，121.9 (C-1')，115.0 (C-2')，145.0 (C-3')，147.7 (C-4')，115.6 (C-5')，119.9(C-6')。以上波谱数据与文献［8］报道基本一致，鉴定化合物2 为quercetin。

化合物3 黄色粉末，C21H20O12，易溶于丙酮;ESI-MS (positive)m/z 465［M+H］+，487［M +Na］+;1H NMR (CD3COCD3，400 MHz)δ:7.97(1H，s，H-2')，7.58 (1H，d，J=8.4 Hz，H-5')，6.95 (1H，d，J=8.4 Hz，H-6')，6.51 (1H，s，H-8)，6.28 (1H，s，H-6)，5.28 (1H，d，J=7.2 Hz，H-1'，β-构 型);13C NMR (CD3COCD3，100 MHz)δ:156.4 (C-2)，133.3 (C-3)，177.5 (C-4)，161.3 (C-5)，99.0 (C-6)，164.4 (C-7)，93.6 (C-8)，156.2(C-9)，103.9 (C-10)，121.7 (C-1')，115.3 (C-2')，144.9 (C-3')，148.6 (C-4')，116.2 (C-5')，121.2(C-6')，Glu 100.8 (C-1″)，74.1 (C-2″)，77.7 (C-3″)，69.9 (C-4″)，76.5 (C-5″)，60.9 (C-6″)。以上波谱数据与文献［9］报道基本一致，鉴定化合物3 为hirsutin。

化合物4 黄色粉末，C21H20O11，易溶于二甲亚砜;ESI-MS (positive)m/z 449［M+H］+，471［M+Na］+;1H NMR (DMSO-d6，400 MHz)δ:8.00(2H，d，J=8.8 Hz，H-2'，6')，6.87 (2H，d，J=8.8 Hz，H-3'，5')，6.41 (1H，s，H-8)，6.17 (1H，s，H-6)，5.44 (1H，d，J=7.2 Hz，H-1″，β-构型);13C NMR (DMSO-d6，100 MHz)δ:156.5 (C-2)，133.1(C-3)，177.3 (C-4)，161.1 (C-5)，99.0 (C-6)，165.5 (C-7)，93.8 (C-8)，156.1 (C-9)，103.5 (C-10)，120.7 (C-1')，130.8 (C-2')，115.2 (C-3')，160.3 (C-4')，115.2 (C-5')，130.8 (C-6')，Glu 100.9 (C-1″)，74.2 (C-2″)，77.5 (C-3″)，69.9 (C-4″)，76.4 (C-5″)，60.8 (C-6″)。以上波谱数据与文献［9］报道基本一致，鉴定化合物4 为astragalin。

化合物5 无定型粉末，C20H22O7，易溶于丙酮;ESI-MS (positive)m/z 397 ［M+Na］+;1H NMR(CD3COCD3，400 MHz) δ:6.74-7.10 (6H，m，arom.H)，4.81 (1H，d，J=4.8 Hz，H-6)，4.65(1H，s，H-2)，4.40-4.48 (1H，m，H-4b)，3.84-4.06(3H，m，H-4a，8)，3.82 (6H，s，2 × OCH3)，2.87-3.06 (1H，m，H-5);13C NMR (DMSO-d6，125 MHz)δ:91.1 (C-1)，87.1 (C-2)，70.3 (C-4)，60.8 (C-5)，85.4 (C-6)，74.7 (C-8)，128.0 (C-1')，112.3(C-2')，146.9 (C-3')，145.9 (C-4')，114.6 (C-5')，120.2 (C-6')，132.4 (C-1″)，110.7 (C-2″)，147.5 (C-3″)，145.9 (C-4″)，115.2 (C-5″)，118.9(C-6″)，56.1 (2 × OCH3)。以上波谱数据与文献［10］报道基本一致，鉴定化合物5 为(+)-1-hydroxypinoresinol。

化合物6 无定型粉末，C20H22O7，易溶于丙酮;ESI-MS (positive)m/z 397 ［M+Na］+;1H NMR(CD3COCD3，400 MHz) δ:6.74-7.08 (6H，m，arom.H)，5.13 (1H，d，J=6.0 Hz，H-6)，4.38(1H，s，H-2)，4.21 (1H，d，J=9.2 Hz，H-4b)，3.86(1H，s，H-8b)，3.84 (6H，s，2 ×OCH3)，3.75 (1H，s，H-8a)，3.60 (1H，d，J=9.2 Hz，H-4a)，2.85-2.95 (1H，m，H-5);13C NMR (CD3COCD3，100 MHz)δ:91.6 (C-1)，81.9 (C-2)，68.6 (C-4)，58.5(C-5)，90.1 (C-6)，76.8 (C-8)，129.2 (C-1')，112.2 (C-2')，147.8 (C-3')，147.0 (C-4')，115.1(C-5')，121.1 (C-6')，131.0 (C-1″)，110.0 (C-2″)，148.1 (C-3″)，146.3 (C-4″)，115.5 (C-5″)，118.9 (C-6″)，56.1 (2 ×OCH3)。以上波谱数据与文献［11］报道基本一致，鉴定化合物6 为(+)-1-hydroxy-6-epipinoresinol。

化合物7 无定型粉末，C26H32O11，易溶于甲醇;ESI-MS (positive)m/z 543 ［M+Na］+;1H NMR (CD3OD，400 MHz)δ:7.14 (1H，d，J=8.4 Hz，H-5)，7.02 (1H，s，H-2)，6.94 (1H，s，H-2')，6.91 (1H，d，J=8.4 Hz，H-6)，6.80 (1H，d，J=9.2 Hz，H-6')，6.76 (1H，d，J=8.0 Hz，H-5')，4.87 (1H，s，H-1″)，4.76 (1H，s，H-7)，4.65 (1H，d，J=3.6 Hz，H-7')，4.23 (2H，m，H-9β，H-9'β)，3.86 (3H，s，OCH3)，3.85 (3H，s，OCH3)，3.82(2H，m，H-9α，H-9'α)，3.71-3.22 (Sugar H)，3.12(2H，m，H-8，8');13C NMR (CD3OD，100 MHz)δ:137.5 (C-1)，111.6 (C-2)，147.3 (C-3)，150.9 (C-4)，117.9 (C-5)，119.8 (C-6)，87.1 (C-7)，55.3(C-8)，72.7 (C-9)，133.7 (C-1')，110.9 (C-2')，147.5 (C-3')，149.1 (C-4')，116.1 (C-5')，120.0(C-6')，87.5 (C-7')，55.5 (C-8')，72.7 (C-9')，102.8 (C-1″)，74.9 (C-2″)，77.8 (C-3″)，71.3 (C-4″)，78.2 (C-5″)，62.5 (C-6″)，56.7 (OCH3)，56.4(OCH3)。以上波谱数据与文献［12］报道基本一致，鉴定化合物7 为pinoresinol-4-O-glucoside。

化合物8 无色针状，C15H12O5，易溶于丙酮;ESI-MS (positive)m/z 273［M+H］+，295［M +Na］+;1H NMR (CD3COCD3，400 MHz)δ:7.37(2H，d，J=8.8 Hz，H-2'，6')，6.80 (2H，d，J=8.8 Hz，H-3'，5')，6.30 (1H，s，H-5)，6.28 (1H，d，J=2.0 Hz，H-7)，5.55 (1H，dd，J=12.0，3.2 Hz，H-3)，3.28 (1H，dd，J=16.4，12.0 Hz，H-4a)，3.05(1H，dd，J=12.0，3.2 Hz，H-4b);13C NMR(CD3COCD3，100 MHz)δ:170.7 (C-1)，81.1 (C-3)，35.3 (C-4)，143.3 (C-4a)，107.4 (C-5)，165.3(C-6)，101.9 (C-7)，165.3 (C-8)，101.8 (C-8a)，130.5 (C-1')，128.8 (C-2')，116.1 (C-3')，158.6(C-4')，116.1 (C-5')，128.8 (C-6')。以上波谱数据与文献［13］报道基本一致，鉴定化合物8 为thunberginol C。

化合物9 白色粉末，C27H34O12，易溶于甲醇;ESI-MS (positive)m/z 551［M+H］+，573［M +Na］+;1H NMR (CD3OD，400 MHz)δ:6.61-6.82(5H，m，arom.H)，3.85 (9H，s，3 ×OCH3)，3.55～3.81 (4H，m，H-4，8);13C NMR (CD3OD，100 MHz)δ:55.3 (C-1)，87.6 (C-2)，72.7 (C-4)，55.5 (C-5)，87.4 (C-6)，72.9 (C-8)，135.5 (C-1')，105.3(C-2')，154.4 (C-3')，139.6 (C-4')，154.4 (C-5')，104.8 (C-6')，133.7 (C-1″)，110.9 (C-2″)，149.3 (C-3″)，149.1 (C-4″)，116.1 (C-5″)，120.0(C-6″)，Glu 104.4 (C-1')，75.7 (C-2')，77.8 (C-3')，71.3 (C-4')，78.3 (C-5')，62.5 (C-6')，56.8(OCH3)，56.4 (OCH3)，55.8 (OCH3)。以上波谱数据与文献［14］报道基本一致，鉴定化合物9 为(+)-medioresinol 4'-O-β-D-glucopyranoside。

化合物10 白色粉末，C9H6O3，易溶于丙酮;ESI-MS (positive)m/z 185 ［M+Na］+;1H NMR(CD3COCD3，400 MHz)δ:7.87 (1H，d，J=9.6 Hz，H-4)，7.52 (1H，d，J=8.4 Hz，H-5)，6.85(1H，dd，J=8.4，2.4 Hz，H-6)，6.17 (1H，d，J=9.2 Hz，H-3);13C NMR (CD3COCD3，100 MHz)δ:161.0 (C-2)，112.8 (C-3)，144.7 (C-4)，130.4 (C-5)，113.7 (C-6)，161.9 (C-7)，103.2 (C-8)，156.9(C-9)，112.8 (C-10)。以上波谱数据与文献［15］报道基本一致，鉴定化合物10 为7-hydroxycoumarin。

化合物11 白色粉末，C17H20O9，易溶于丙酮;ESI-MS (positive)m/z 369［M+H］+，391［M +Na］+;1H NMR (CD3COCD3，400 MHz)δ:7.54(1H，d，J=16.0 Hz，H-3')，7.16 (1H，d，J=1.6 Hz，H-5')，7.04 (1H，dd，J=8.0，1.6 Hz，H-9')，6.87 (1H，d，J=8.0 Hz，H-8')，6.25 (1H，d，J=16.0 Hz，H-2')，5.33 (1H，m，H-3)，4.17 (1H，m，H-5)，3.75 (1H，t，J=8.4，2.8 Hz，H-4)，3.73(3H，s，OCH3)，2.05-2.30 (2H，m，H-2)，5.33 (1H，m，H-3);13C NMR (CD3COCD3，100 MHz)δ:75.9(C-1)，37.9 (C-2)，72.9 (C-3)，71.5 (C-4)，71.5(C-5)，37.9 (C-6)，174.5 (C-7)，52.6 (OCH3)，166.9 (C-1')，115.1 (C-2')，145.9 (C-3')，127.5(C-4')，115.7 (C-5')，146.4 (C-6')，148.9 (C-7')，116.4 (C-8')，122.6 (C-9')。以上波谱数据与文献［16］报道基本一致，鉴定化合物11 为methylchlorogenate。

化合物12 无色油状，C18H32O2，易溶于氯仿;ESI-MS (positive)m/z 303 ［M+Na］+;1H NMR(CDCl3，400 MHz)δ:5.36-5.33 (4H，m，-CH=CH-)，2.77 (2H，m，J=6.4 Hz，H-11)，2.35 (2H，t，J=7.6 Hz，H-2)，2.05 (2H，m，J=6.4 Hz，H-14)，2.04 (2H，m，J=7.2 Hz，H-8)，1.64 (2H，m，J=7.2 Hz，H-3)，1.38-1.30 (6H，m，3 × CH2，H-15-17)，1.30-1.22 (8H，m，4 × CH2，H-4-7)，0.89(3H，m，J=6.8 Hz，H-18);13C NMR (CDCl3，100 MHz)δ:180.1 (C-1)，34.0 (C-2)，24.6 (C-3)，29.2(C-4，5)，29.5 (C-6)29.3(C-7)，27.1(C-8)，129.7 (C-9)，129.9 (C-10)，25.6 (C-11)，130.2(C-12)，127.8 (C-13)，27.2 (C-14)，31.9 (C-15)，31.9 (C-16)，31.9 (C-17)，14.0 (C-18)。以上波谱数据与文献［17］报道基本一致，鉴定化合物12 为leinoleic acid。

化合物13 白色粉末，C4H6O4，易溶于甲醇;ESI-MS (positive)m/z 141 ［M+Na］+;1H NMR(CD3OD，400 MHz)δ:2.50 (4H，s，H-2，3);13C NMR (CD3OD，100 MHz)δ:176.3 (C-1，4)，29.7(C-2，3)。以上波谱数据与文献［18］报道基本一致，鉴定化合物13 为butanedioic acid。

化合物14 白色针状结晶(氯仿)，C29H50O，易溶于氯仿;ESI-MS (positive)m/z 437［M +Na］+;10%硫酸乙醇溶液显紫色，5%磷钼酸乙醇溶液显蓝色。将化合物与β-谷甾醇标准品在三个溶剂系统下进行共薄层检查，结果显示两者具有相同的显色行为及Rf值一致，可以确定化合物14 为β-sitosterol。

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