桑叶中芦丁含量的动态变化研究

王 正，沈 华，李 蕾，郦红岩

（江苏吉贝尔药业有限公司，江苏镇江212009）

桑叶中芦丁含量的动态变化研究

王 正，沈 华，李 蕾，郦红岩

（江苏吉贝尔药业有限公司，江苏镇江212009）

目的研究不同时期桑叶中芦丁的含量。方法Kromasil C18柱（4.6 mm×250 mm，5μm）；流动相：甲醇－0.5%磷酸水溶液（梯度洗脱），检测波长：358 nm；柱温：30℃；结果芦丁在0.126 2～2.02μg范围内有良好的线性关系，r＝0.999 9，平均回收率为97.88%，桑叶中芦丁含量最高在霜降前后。结论初步表明了桑叶中芦丁含量随季节变化的规律。

桑叶；芦丁；高效液相色谱法；含量测定

桑叶为桑科植物桑Morus alba L.的干燥叶，具有疏散风热、清肺润燥、清肝明目的功能。桑叶是重要的传统中药，桑叶入药首见于《神农本草经》，被列为中品。卫生部2002年发布的《关于进一步规范保健食品原料管理的通知》中将桑叶列入既是食品又是药品的名单。《神农本草经》中称桑叶为“神仙叶”，性寒、味甘苦，具有疏散风热、清肺润燥、清肝明目之功效，是常用中药之一。明代李时珍所著的《本草纲目》中记载：“桑叶乃手足阳明之药，汁煎代茗，能止消渴，明目长发。《中国药典》2010年版中桑叶主治风热感冒，肺热燥咳，头晕头痛，目赤昏花。现代药理研究表明桑叶具有降血糖、降血脂、抗氧化、抗肿瘤等多种活性［1，2］。对桑叶的药理作用研究发现，桑叶黄酮类、生物碱类、多糖为降血糖有效组分［3～5］。本文建立了桑叶中芦丁的含量分析方法，并对不同时期的桑叶芦丁含量的动态变化进行研究［6～9］，为桑叶资源的合理利用提供一定的依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器 JASCO LC1500高效液相色谱系统（日本分光公司），PU－1580色谱泵；LG－1580－04四通道梯度单元；DG－1580－54四通道在线脱气器；CO－1560柱温箱；UV－1575紫外／可见光检测器；Rheodyne Model 7125进样阀；高纯水机RO－MB－10D（杭州永洁达膜分离设备厂）；N2000色谱工作站（浙江大学信息智能研究所）；Mettler AE240分析天平（上海梅特勒－托利多仪器有限公司）；BP211D电子天平（北京赛多利斯天平有限公司）；SK250LH超声波清洗仪（上海科导超声仪器有限公司）；HHS－1恒温水浴锅（上海浦东跃新科学仪器厂）。

1.2 试药 芦丁对照品（中国药品生物制品检定所，批号：100080－200707）；甲醇为色谱纯，水为注射用水，其余试剂均为分析纯桑叶采自镇江市蚕研所，经江苏大学药学院欧阳臻教授鉴定为桑科植物桑Morus alba L.的叶，低温干燥后备用。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 Kromasil C18柱（4.6 mm×250 mm，5μm）；流动相：甲醇（A）－0.5%磷酸水溶液（B）梯度洗脱（A∶B在0、5、10、15、18、40 min的比例为：30∶70、30∶70、35∶65、40∶60、50∶50、50∶50）；流速： 1.0 mL·min－1；检测波长：358 nm；柱温：30℃；进样量：20μL。理论板数按芦丁峰计算应不低于2 800，见图1。

2.2 对照品溶液与供试品溶液的制备 精密称取干燥至恒重的芦丁对照品适量，加甲醇制成每mL含20μg的对照品溶液，即得。

取桑叶粉碎成细粉，称取本品粉末约1.0 g，精密称定，加甲醇50 mL，加热回流30 min，滤过，药渣再同法提取2次，合并滤液，减压回收溶剂，残渣用甲醇溶解并转移至50 mL容量瓶，甲醇定容即得。

2.3 线性关系的考察 标准曲线的绘制：精密称取芦丁对照品0.050 50 g于50 mL量瓶中，加甲醇制成每1 mL含1.01 mg的对照品溶液，精密量取一定体积的该对照品溶液，用甲醇分别稀释成6.31、12.62、25.25、50.5、101μg·mL－1，作为对照品溶液。精密吸取不同浓度的对照品溶液注入液相色谱仪，以进样量（μg）为横坐标（X），以峰面积值为纵坐标（Y），进行线性回归绘制标准曲线，计算得回归方程Y＝17 854X＋3 111.2，r＝0.999 9，结果表明芦丁在0.126 2～2.02μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

图1 HPLC色谱图

2.4 进样精密度试验 精密吸取同一浓度对照品溶液，依法测定，连续进样6次，测定峰面积，其精密度良好，芦丁的RSD为1.63%。

2.5 供试液稳定性试验 取同一样品供试液，分别在0、2、4、8、12、24 h测定芦丁峰面积，其RSD为1.78%，表明样品在24 h内具有良好的稳定性。

2.6 重复性试验 取同一批样品分别精密称取6份，依法处理，测定，结果样品中芦丁的平均含量为1.710 2 mg·g－1，RSD为2.24%。

2.7 回收率测定 精密称取已知含量的样品6份约1.0 g，加入芦丁对照品溶液，依法处理，得供试品溶液，依法测定，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果（n＝6）

2.8 样品测定 分别精密称取不同批次的桑叶样品，按供试品溶液制备方法制备，如法测定，结果见表2。

表2 桑叶中芦丁含量动态变化

图2 桑叶中芦丁含量变化

3 总结

桑叶收载于《中国药典》2010年版，其中对桑叶中芦丁的含量测定方法是采用高效液相色谱法（梯度洗脱）进行的，本文对不同时期的桑叶中芦丁的含量进行了含量测定。经过研究，不同时期的桑叶中芦丁的含量是呈动态分布的，在霜降节气前后含量达到最高，经霜后含量逐渐下降，这有助于更好控制桑叶的质量，为桑叶的采摘提供依据。

本文研究了经霜前后野桑和园桑中芦丁的含量动态变化，结果表明经霜前后的野桑和园桑中芦丁的含量均有一定差异。园桑中芦丁含量比同期的野桑高。两者含量从9月份开始持续上升，10月23日霜降节气前后含量达到最高，经霜后含量逐渐下降。因此，桑叶经霜药用可能与黄酮类成分有关，其具体机制有待进一步研究。

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表2 4批样品中丹酚酸B的含量测定结果

3.2 供试品溶液制备中对提取溶剂进行了考察，分别采用甲醇和75%甲醇提取，结果两者含量接近，但75%甲醇提取的杂质稍多，因此确定采用甲醇提取。

3.3 本文建立的含量测定方法，具有灵敏度高，重现性好，专属性强，无明显干扰等优点，是有效控制本品内在质量的较理想方法。

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Study on the dynam ic change of rutin content in mulberry leaves

WANG Zheng，SHEN Hua，LILei，LIHong-yan
（Jiangsu Jibrier Pharmaceutial Co.，Ltd.，Zhenjiang 212009，China）

ObjectiveTo study the content of rutin in different period ofmulberry leaf.Methods The Kromasil C18column（4.6 mm×250 mm，5μm）was used，andmobile phasewas composed ofmethanol－0.5%phosphoric acid solution（gradient elution），Detection wavelength was at358 nm，the column temperaturewas at30℃.ResultsThe linear range of rutin was0.126 2～2.02μg（r＝0.999 9）.The average recovery of rutin was97.88%，the highest contentof rutin inmulberry leaves before and after the frost.ConclusionPreliminary results suggested that rules of rutin inmulberry leaves seasonal changes.

Mulberry leaves；Rutin；HPLC；Determination

R284.2

A

2095－5375（2014）12－0693－003

王正，男，研究方向：药品生产、生产工艺以及产品质量，E－mail：haolewangzheng＠126.com