泽漆不同部位总黄酮的含量测定

李玉贤 董媛媛 王天杰 张俊利 王 磊

（河南中医学院药学院，河南 郑州 450046）

泽漆不同部位总黄酮的含量测定

李玉贤 董媛媛 王天杰 张俊利 王 磊

（河南中医学院药学院，河南 郑州 450046）

目的 测定泽漆不同部位总黄酮的含量。方法 以芦丁含量为考察指标，通过分光光度法对泽漆不同部位总黄酮含量进行精密测定。结果 泽漆叶中总黄酮含量最高（29.6671 mg/g），根次之（13.1930 mg/g），茎最低（12.8009 mg/g）。结论 泽漆叶的总黄酮含量最高，利用价值最大。

泽漆；总黄酮；含量；不同部位；分光光度法

泽漆（Euphorbia helioscopia L），别名猫眼儿草，五灯头，五朵云，五风草，五凤灵枝，一把伞，九头狮子草，灯台草，廯草，奶浆草等。主要生于山坡，荒野，田边及河岸边，分布于除新疆，西藏以外的全国各地，药物资源较为丰富。泽漆主要化学成分含有二萜酯类，黄酮类，酚酸类，三萜类[1-4]，甾醇类，多酚类，氨基酸及天然油脂等物质，并含有多种以槲皮素为苷元的黄酮苷。黄酮类化合物是一类生理活性较强的化合物[6-9]，且无毒无害，具有清除自由基、抗氧化、抗癌、抗菌、抗过敏、抗病毒等作用，近年来在医疗，食品等方面有着越来越重要的地位。本实验通过对泽漆中总黄酮含量测定，发现泽漆植物中黄酮类化合物含量较高。

1 实验仪器与试剂

1.1 实验仪器：KQ-100E型超声波清洗器，721型可见分光光度计，FW80型高速万能粉碎机，DZKW-D型 星宇电热恒温水浴锅，101-1型电热恒温干燥箱，微量分析天平（北京赛多利斯科学仪器有限公司），HZ-D循环水式真空泵，标准配套磨口玻璃仪器。

1.2 实验试剂：泽漆样品于2012年5月采自河南（样品经风干，粉碎，保存在塑料袋中备用），芦丁对照品（中国药品生物制品鉴定所），氢氧化钠，亚硝酸钠，硝酸铝，乙醇等实验所用试剂均为分析纯。

2 实验方法

2.1 黄酮的定性鉴别：依次做了紫外光下显色反应，浓氨水反应，三氯化铝反应，乙酸镁反应，盐酸-镁粉反应均显阳性反应，可得出泽漆提取物中含有黄酮。

2.2 芦丁对照品标准曲线的绘制

2.2.1 对照品标准溶液的配制：精密称量120 ℃干燥至恒重的芦丁对照品12.8 mg，置于50 mL干燥烧杯中，用60%乙醇溶液溶解，冷却至室温，并定容至100 mL的容量瓶中，振荡均匀，则配制得到浓度为0.0128 mg/mL的芦丁对照品标准溶液，备用。

2.2.2 吸收波长的确定：准确量取芦丁对照品标准溶液1.00 mL置于10 mL容量瓶中，加入60%乙醇溶液4 mL，加入5%亚硝酸钠溶液0.3 mL，放置5 min后，加入10%硝酸铝溶液0.3 mL，放置5 min后，加入1 mol/L氢氧化钠溶液4 mL，再用60%乙醇溶液定容。放置10 min后在400～600 nm波长之间测定吸光度，确定最大吸收波长为510 nm。2.2.3 芦丁对照品溶液标准曲线的绘制：精密量取芦丁对照品标准溶液0、1、2、3、4、5 mL分别置于6支10 mL容量瓶中，依次加入60%乙醇溶液 5、4、3、2、1、0 mL，各加入5%亚硝酸钠溶液0.3 mL，摇荡均匀，放置5 min后，各分别加入10%硝酸铝溶液0.3 mL，摇荡均匀，放置5 min后，各分别加入1 mol/L氢氧化钠溶液4 mL，摇荡均匀，最后用60%乙醇溶液定容。静置10 min后于510 nm处测量吸光度，试剂1为空白参照液，以芦丁对照品标准溶液的质量浓度为横坐标（mg/mL），吸光度为纵坐标，进行线性回归分析，绘制芦丁对照品溶液浓度与吸光度标准曲线，得到线性回归方程：A=9.1406C-0.0007，R2=0.9999，说明芦丁对照品标准溶液浓度与吸光度之间有良好的线性关系。

2.3 泽漆不同部位总黄酮的含量测定[10]

2.3.1 泽漆总黄酮的提取：以乙醇溶液浓度为60%，物料比为1∶25，提取时间20 min，提取温度60 ℃为提取条件。精密称量泽漆根，茎，叶各3份，每份2.4 g，分别置于9个具塞锥形瓶中，分别加入60%乙醇溶液60 mL，称重，调节超声清洗器温度为60 ℃，提取20 min，补加60%乙醇至相同质量，抽滤，分别得到根，茎，叶的提取液。

2.3.2 泽漆不同部位总黄酮含量的测定：精密吸取上述各提取溶液1 mL，置于10 mL容量瓶中，按照“2.2.3”实验步骤测定吸光度，每种提取液平行测定3次，计算不同部位总黄酮含量（%）。

2.4 实验方法考察

2.4.1 稳定性试验：精密吸取1 mL超声提取溶液，置于10 mL容量瓶中，按照“2.2.3”实验步骤测定吸光度，再在30、60、90、120、150 min之后测定吸光度。由一系列实验数据得：吸光度的RSD值为1.04%，表明供试溶液在显色后150 min之内稳定。

2.4.2 重复性试验：取同一批泽漆样品细粉6份，每份2.4 g，分别按照“2.3.1”实验步骤得供试品溶液，分别精密吸取1 mL，置于10 mL容量瓶中，按照“2.2.3”实验步骤测定吸光度。由一系列实验数据得：吸光度的RSD值为1.32%，表明实验重复性良好。

2.4.3 精密度试验：精密量取芦丁对照品标准溶液6份，各份1 mL，分别置于6支10 mL容量瓶中，按照“2.2.3”实验步骤测定吸光度。由一系列实验数据得：吸光度的RSD值为0.98%，表明仪器精密度良好。

2.4.4 加样回收试验：精密量取供试品溶液9份，每份1 mL，置于九支10 mL容量瓶中，再分别精密加入芦丁对照品标准溶液适量，混匀。分别按照“2.2.3”实验步骤测定吸光度，计算总黄酮含量。加样回收试验结果见表1。

结果表明：平均回收率分别为102.84%、101.04%、98.53%，加样回收率RSD分别为1.12%、0.98%、0.76%，加样回收率良好，符合质量分析要求。

3 实验结果

泽漆不同部位总黄酮含量测定结果，见表2。

4 讨 论

4.1 超声提取法提取泽漆总黄酮的实验方法简单、稳定，有助于提高总黄酮的提取率，缩短提取时间，节省提取溶剂，因此，超声提取法可作为泽漆中总黄酮开发研究和质量评价的方法。

表1 加样回收试验

表2 泽漆不同部位总黄酮含量测定结果

4.2 采用分光光度法（比色法）测定泽漆中总黄酮含量具有科学，高效，准确，快速，重现性较好，仪器便宜易得的特点。

4.3 泽漆中不同部位所含的天然黄酮类化合物含量由大到小为叶、根、茎。为临床用药提供科学依据。

[1] 蔡鹰,王晶.泽漆根体外抗肿瘤实验研究[J].中药,1999,22(2):85-87.

[2] 蔡鹰,陆瑜.泽漆根体内抗肿瘤作用研究[J].中药材,1999,22(11): 579-582.

[3] 高志良.大剂量泽漆为主治疗早期肝瘤[J].江苏中医,1997,18 (2):28.

[4] 胡小华,李国强.泽漆研究进展[J].新疆中医药,2008,26(2):80-81.

[5] 何江波,刘月明.泽漆的化学成分研究[J].天然产物研究与开发, 2010,22(5):731-735.

[6] 庞维荣,杜晨晖.泽漆化学成分[J].中国实验方剂学杂志,2011,17 (20):118-121.

[7] 杨莉,陈海霞.泽漆化学成分及药理作用研究进展[J].中草药,2007, 38(10):1586-1589.

[8] 曹纬国,刘志勤.黄酮类化合物药理作用的研究进展[J].西北植物学报,2003,23(12):2241-2247.

[9] 刘仲则.中草药黄酮类化合物心血管活性成分概述[J].中草药, 2005,18(3):37.

[10] 杨帆,张轩.柿叶中总黄酮的鉴别与含量测定[J].中国医药指南, 2013,11(8):435-436.

医学科技期刊中的代号与缩写

非各学科公认的缩写首次出现时应有全称（摘要及正文中首次出现的均应有全称与英文全称及缩写对照）。常用的名词术语统一如下：总蛋白TP，清蛋白Alb，白细胞WBC，红细胞RBC，血红蛋白Hb，肌酐Cr,三酰甘油TG，尿蛋白测定量UTP，尿糖US，等。

R282.710.2

：B

：1671-8194（2014）32-0061-02

河南中医学院大学生创新学习项目(项目编号: YXCX [2012]5；CXXM[2012]04)