键合纤维素衍生物手性固定相拆分酮洛芬对映体

邵 红

（郑州人民医院，河南 郑州 450000）

键合纤维素衍生物手性固定相拆分酮洛芬对映体

邵 红

（郑州人民医院，河南 郑州 450000）

目的建立用键合纤维素衍生物手性固定相拆分酮洛芬对映体的高效液相色谱法。方法采用Chiralpak IB色谱柱（250 mm×4.6 mm，5μm）在正相条件下拆分酮洛芬对映体，流动相为正己烷-异丙醇（95∶5），流速0.8 mL/min，检测波长254 nm，柱温25 ℃。结果酮洛芬对映体在键合纤维素衍生物手性固定相上能够基线分离，分离度为5.44。结论本法简便、快速、重复性好，适用于酮洛芬对映体的分离。

高效液相色谱；键合纤维素衍生物手性固定相；酮洛芬；对映体拆分

酮洛芬是非甾体抗炎药（NSAIDs），具有解热镇痛和抗炎作 用，用于治疗骨节炎和类风湿性关节炎。酮洛芬分子结构中含有1个手性中心，存在1对对映体。药理学研究发现，只有S-型对映体才具有抗炎抗风湿和镇痛作用，若以S-型对映体给药可减少给药剂量，降低毒副作用[1]。对酮洛芬对映体的拆分主要有手性柱法[2,3]，手性流动相添加剂法[4]，柱前衍生化法[5]和毛细管电泳法[6]。但未见采用键合纤维素-三（3，5-二甲苯基氨基甲酸酯）色谱柱，即Chiralpak IB色谱柱进行拆分的报道。因此，本文采用Chiralpak IB色谱柱对酮洛芬对映体进行拆分，并考察了流动相组成、流速和柱温对分离的影响。

1 仪器与试药

Agilent HΡ1100高效液相色谱仪（1100VWD紫外可见检测器，1100自动进样器，HΡ化学工作站）；Chiralpak IB色谱柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm；日本大赛璐公司）；BΡ211D1/10万天平（德国Sartorius公司）；酮洛芬（外消旋体，中国食品药品检定研究院）；正己烷、异丙醇、乙醇和三氯甲烷（色谱纯，天津市科密欧化学试剂有限公司）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Chiralpak IB柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：正己烷-异丙醇（95∶5）；流速：0.8 mL/min；检测波长：254 nm；柱温：25 ℃。

2.2 样品溶液的制备与测定

精密称取酮洛芬1.0 mg置10 mL容量瓶中用异丙醇溶解并定容至刻度，得浓度为0.1 mg/mL的样品溶液，经0.45 μm微孔滤膜过滤并超声脱气后取10 μL进样，按所选色谱条件操作，色谱结果见图1。

图1 酮洛芬对映体手性拆分色谱图

3 讨 论

3.1 流动相改性剂种类对分离的影响

在以正己烷为流动相的正相体系中，固定流速为0.8 mL/min，柱温为25 ℃，分别以乙醇和异丙醇为流动相改性剂考察了醇的种类对拆分的影响（表1），其中乙醇和异丙醇量均为5%。结果表明，与使用乙醇为流动相改性剂相比，异丙醇有更强的选择性，分离度高于乙醇。流动相中醇分子能够以氢键形式在固定相表面与酮洛芬对映体发生吸附性竞争，减弱酮洛芬对映体的过强吸附，使其得到分离。当由乙醇更换为异丙醇，醇碳链长度增加，流动相与固定相作用的能力降低，从而使酮洛芬对映体与固定相的作用增强，表现为保留增强，分离度增加，而出峰时间相差不大。因此，选择异丙醇为流动相改性剂。

表1 醇的种类对分离的影响

3.2 流动相改性剂比例对分离的影响

在流速为0.8 mL/min，柱温为25 ℃的条件下，通过改变流动相正己烷和异丙醇的比例，考察醇的比例对拆分的影响（表2）。结果表明，异丙醇量为5%时，分离度最好，随着异丙醇量的增加，出峰时间变短，分离度降低。随着异丙醇量的增加，流动相和固定相的分子作用增强，从而使酮洛芬对映体的柱保留作用减弱，洗脱速度加快，同时分离度和分离因子随之降低，分离能力下降。故选择流动相正己烷-异丙醇（95∶5）。

表2 醇的比例对分离的影响

3.3 流速对分离的影响

在流动相为正己烷-异丙醇（95∶5），柱温为25 ℃的条件下，考察流速对酮洛芬对映体分离的影响（表3）。结果表明，随着流速的增加，酮洛芬对映体的分离因子没有变化，这说明流速对手性空穴的空间构型没有影响。酮洛芬对映体的分离度在流速为0.6 mL/min时达到最大，流速＜0.6 mL/min，由于出峰时间延长，峰形扩展，导致分离度降低。流速＞0.6 mL/min，随着流速的增加，使药物对映体与固定相的作用时间减少，从而不利于分离，且流速越大，柱压越高。综合考虑分离度、出峰时间和柱压等因素，选择流速为0.8 mL/min。

表3 流速对分离的影响

3.4 柱温对分离的影响

在流动相为正己烷-异丙醇（95∶5），流速为0.8 mL/min的条件下，考察柱温（20～35 ℃）对对映体出峰时间和分离度的影响。结果表明，随着温度的升高，出峰时间加快，对映体分离度减小。这是由于温度降低，对映体与固定相之间有充分的时间形成非对映体结合物，使分离度增加。但温度过低，使出峰时间延长，峰形扩展，分离度下降。25 ℃接近室温，且低温有利于延长色谱柱的寿命，因此选择25 ℃作为柱温。

4 结 论

使用Chiralpak IB色谱柱对酮洛芬对映体进行拆分，考察了流动相组成、流速和柱温对拆分的影响，确立了最佳拆分条件：流动相为正己烷-异丙醇（95∶5），流速0.8 mL/min，检测波长254 nm，柱温25 ℃。

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1671-8194（2014）10-0057-03