宫颈癌患者外周血及组织中Th17细胞、Treg细胞表达及Th17/Treg失衡的研究

何芳　杨慧娟

[摘要] 目的 探讨宫颈癌患者外周血及组织中Th17细胞、Treg细胞表达及Th17/Treg失衡的意义。 方法 分别选取同期53例宫颈癌、25例CIN和25例子宫全切患者作为研究对象，采用流式细胞仪检测外周血和宫颈组织中Th17细胞、Treg细胞表达。 结果 宫颈癌组、CIN组外周血中Th17细胞、Treg细胞表达及Th17/Treg均显著高于对照组（P < 0.05）。外周血Th17细胞表达与FIGO分期呈正相关（P < 0.05），Treg细胞表达与分化程度呈负相关（P < 0.05）。组织中Th17/Treg与FIGO分期呈负相关（P < 0.05）。 结论 宫颈癌患者外周血和组织中Th17细胞和Treg细胞表达均显著升高，Th17/Treg失衡在宫颈癌发生发展过程中起重要促进作用。

[关键词] 宫颈癌；Th17细胞；Treg细胞；Th17/Treg平衡

[中图分类号] R737.33 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2014）10-0015-03

宫颈癌是导致女性死亡最主要的恶性肿瘤之一，免疫系统功能异常在肿瘤发生、发展过程中起重要的作用。Th17细胞、Treg细胞均属CD4+ T细胞亚群，介导细胞因子发挥不同的免疫效应，两者存在动态平衡关系，Th17/Treg失衡参与多种炎症、自身免疫性疾病及肿瘤的发生发展过程，均与肿瘤的免疫逃逸密切相关[1，2]。本研究旨在探讨Th17细胞、Treg细胞在宫颈癌进展中的作用，及Th17/Treg失衡对宫颈癌发生发展的影响。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选取2012年2月～2013年4月我院收治的53例宫颈癌患者作为宫颈癌组研究对象，均经病理学检查证实为宫颈癌并结合影像学检查明确分期，其中鳞癌35例，腺癌18例，年龄39～69岁，平均（53.23±6.99）岁，FIGO临床分期Ⅰ期10例，Ⅱ期12例，Ⅲ期20例，Ⅳ期11例；另选取同期与宫颈癌组年龄匹配的CIN患者25例为CIN组研究对象，标本来源于宫颈锥切手术标本、病理活检组织及外周血，均经病理学检查证实，CIN1级7例，CIN2级10例，CIN3级8例；再选取同期与宫颈癌组年龄匹配行子宫全切并排除恶性病变及癌前病变患者25例为对照组研究对象，标本来源于子宫全切手术标本及外周血。

1.2 主要试剂及仪器

荧光抗人CD4-FITC、抗人CD25-APC、抗人Foxp3-PE、抗人IL-17-PE、抗人ROR-γt-PE单克隆抗体及相应同型对照抗体，固定及破膜试剂盒、人Foxp3试剂盒、人IL-17试剂盒、人ROR-γt试剂盒、人T细胞检测试剂盒（美国eBiosciences公司）。美国BD公司FACS Caliber流式细胞检测仪。

1.3 实验方法及观察指标

外周血标本于术前或病理活检前采集空腹外周静脉血5 mL，常规分离外周血单个核细胞，采用流式细胞技术定量检测抗人CD4-FITC、抗人CD25-APC、抗人Foxp3-PE、抗人IL-17-PE、抗人ROR-γt-PE单克隆抗体分别标记的Th17细胞和Treg细胞。宫颈组织标本冲洗后取新鲜组织剪碎，经组织消化液消化形成组织细胞悬液，分离单个核细胞，采用流式细胞仪技术定量检测Th17细胞和Treg细胞。每份样本至少收集10 000个单个核细胞。

1.4 统计学处理

应用SPSS 18.0进行统计学处理，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用方差分析，两两比较采用q检验及t检验，相关性采用Pearson或Spearman秩相关分析，P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 宫颈癌组、CIN组和对照组外周血中Th17细胞、Treg细胞表达及Th17/Treg比较

宫颈癌组、CIN组外周血中Th17细胞、Treg细胞表达及Th17/Treg均显著高于对照组（P < 0.05），宫颈癌组又显著高于CIN组（P < 0.05）。见表1。

表1 宫颈癌组、CIN组和对照组外周血中Th17细胞、Treg细胞表达及Th17/Treg比较（x±s，%）

注：qa为宫颈癌组与CIN组比较，*P < 0.05

2.2 宫颈癌组、CIN组和对照组组织中Th17细胞、Treg细胞表达及Th17/Treg比较

宫颈癌组、CIN组组织中Th17细胞、Treg细胞表达均显著高于对照组，Th17/Treg均显著低于对照组（P < 0.05），宫颈癌组Th17细胞、Treg细胞高于CIN组（P < 0.05），Th17/Treg低于CIN组。见表2。

表2 宫颈癌组、CIN组和对照组组织中Th17细胞、Treg细胞表达

及Th17/Treg比较（x±s，%）

注：qa为宫颈癌组与CIN组比较，*P < 0.05

2.3 宫颈癌病理学特征与外周血中Th17细胞、Treg细胞表达及Th17/Treg的关系

外周血Th17细胞表达与FIGO分期、淋巴结转移、脉管浸润有关（P < 0.05）。外周血Th17细胞表达与FIGO分期呈正相关（r=0.54，P < 0.05）。外周血Treg细胞表达与分化程度有关（P < 0.05），并呈负相关（r=-0.49，P < 0.05）。外周血Th17/Treg与淋巴结转移、脉管浸润有关（P < 0.05）。见表3。

表3 宫颈癌病理学特征与外周血Th17细胞、Treg细胞表达

及Th17/Treg的关系（x±s，%）

注：*P < 0.05

2.4 宫颈癌病理学特征与组织中Th17细胞、Treg细胞表达及Th17/Treg的关系

组织中Th17细胞表达与FIGO分期、分化程度、淋巴结转移、脉管浸润有关（P<0.05）。组织中Th17细胞表达与FIGO分期呈正相关（r=0.50，P < 0.05），与分化程度呈负相关（r=-0.48，P < 0.05）。组织中细胞表达与FIGO分期、分化程度、淋巴结转移、脉管浸润有关（P < 0.05）。组织中Treg细胞表达与FIGO分期呈正相关（r=0.57，P < 0.05），与分化程度呈负相关（r=-0.55，P < 0.05）。组织中Th17/Treg与FIGO分期、淋巴结转移、脉管浸润有关（P < 0.05）。组织中Th17/Treg与FIGO分期呈负相关（r=-0.54，P < 0.05）。见表4。

表4 宫颈癌病理学特征与组织中Th17细胞、Treg细胞表达

及Th17/Treg的关系（x±s，%）

注：*P < 0.05

2.5 三组患者外周血及组织中Th17细胞、Treg细胞表达的相关性

外周血与组织中Th17细胞表达呈正相关（r=0.61，P < 0.05），外周血与组织中Treg细胞表达呈正相关（r=0.53，P < 0.05），组织中Th17细胞与Treg细胞表达呈负相关（r=-0.39，P < 0.05）。

3 讨论

初始CD4+ T细胞经由不同细胞因子诱导分别形成以细胞免疫为主的Th1细胞，以体液免疫为主的Th2细胞，表现为免疫抑制作用的Treg细胞及在不同免疫环境中通过促炎、抗肿瘤细胞因子呈现不同免疫功能的Th17细胞[1，2]。Th1/Th2平衡是免疫系统功能调控中主要的相关机制，可反映机体内免疫应答方式的特征，肿瘤组织中平衡向Th2呈渐进式漂移，而Th17的分化和功能受到前两者调控[5，6]。Treg分化主要受TGF-β诱导，而在TGF-β和IL-6同时作用下CD4+ T细胞则分化为Th17细胞，两者之间也存在竞争相关平衡关系，在Th17和Treg细胞间存在相互调控影响的微妙关系[7-9]。

在肿瘤发展过程中Th17则参与其中，并且IL-17具有促血管生成作用，有利于肿瘤生长、浸润、转移的发生[5-8]。另有动物研究发现，Th17注入黑色素瘤模型小鼠体内则发挥了清除肿瘤细胞、抑制黑色素瘤生长的作用，敲除IL-17基因后肿瘤生长、转移活性更旺盛[10，11]。本研究中CIN组和宫颈癌组的外周血和组织中Th17表达均显著高于对照组。外周血Th17细胞表达与宫颈癌FIGO分期、分化程度、淋巴结转移、脉管浸润有关，随临床分期加重、分化程度降低而表达升高，侵袭性和转移活性更强患者的外周血中表达更强。并且外周血中表达与肿瘤组织中表达呈正相关，在两种标本中两者均呈表达升高趋势，与临床病理学特征的相关性也相似。肿瘤组织中Th17细胞表达同样与宫颈癌FIGO分期、分化程度、淋巴结转移、脉管浸润有关。提示Th17细胞在宫颈癌发生初期即CIN期已呈现明显增加，表达随着肿瘤恶性化增加而升高，在宫颈癌发生发展过程中表现为促进肿瘤生长、侵袭、转移的作用；外周血和组织中的表现相似性较高，可以反映肿瘤组织中的Th17细胞分化、增殖特征。

Treg细胞对T细胞主导的肿瘤细胞杀伤作用具有强烈的抑制效果，减少对肿瘤细胞的攻击，诱导肿瘤细胞呈现免疫耐受而逃脱免疫系统杀伤，其免疫抑制作用同样表现在HIV、HPV感染的患者中，CIN、宫颈癌与高危型HPV感染具有密切联系[12]。本研究结果显示，CIN组和宫颈癌组外周血和组织中同样呈现Treg细胞表达显著升高并明显高于对照组的状态，宫颈癌组表达较CIN组高。但外周血和组织中的表达却呈现明显的差别，外周血中Treg细胞表达虽然呈现明显的升高但与FIGO分期、肿瘤大小、淋巴结转移、脉管浸润等肿瘤生长发展相关的病理学特征无明显相关性，仅与分化程度呈显著的负相关。而在组织中与其相关的病理学特征包括FIGO分期、分化程度、淋巴结转移、脉管浸润。提示Treg细胞与肿瘤恶性程度关系更为密切，其与肿瘤的生长、侵袭、转移也存在相关性，但外周血并未表现出这一特征。有研究认为Treg细胞或许为肿瘤细胞由外周血招募而来，外周血中Treg细胞表达与临床分期有关，与本研究结果不同。推断Treg的来源可能不止于外周血，随着组织周围CD4+ T细胞浸润，被肿瘤细胞诱导分化而来的Treg细胞也许是主要的Treg来源，而外周血招募可能作为一种整体的调节补给。

Th17/Treg反映的Th17细胞和Treg细胞的关系，对判断肿瘤患者免疫系统功能紊乱程度有指导作用。组织中Th17/Treg与FIGO分期、淋巴结转移、脉管浸润均有关。表现随着肿瘤进展、侵袭、转移活性增强，免疫逃逸现象越明显，此时Th17细胞则增长已远不及Treg细胞，两者平衡出现明显漂移，Treg细胞的作用可能对Th17细胞的抗肿瘤作用形成抑制，两者关系与Th1/Th2漂移促进Th17细胞分化的作用结合而形成Th17细胞高表达促进肿瘤新生血管生成，而肿瘤杀伤作用受抑制的有利于肿瘤进展的免疫环境。

综述所述，宫颈癌患者外周血和组织中Th17细胞和Treg细胞表达均显著升高，在宫颈癌发生发展过程中起重要促进作用。组织中Th17/Treg失衡反应肿瘤细胞促进形成有利于自身增殖、生长环境的免疫调节作用增强，Treg细胞的分化和功能在宫颈癌组织中表现更为强势。

[参考文献]

[1] 郑莉，陈紫君，刘纯. Th3、Th17及相关细胞因子在自身免疫性甲状腺疾病发病中的作用[J]. 中国免疫学杂志，2013，29（1）：43-47.

[2] Mao-Ping Chu，Dan Wang，Ying-Ying Zhang. Pachyman treatment improves CD4+CD25+ Treg counts and serum interleukin 4 and interferon γ levels in a mouse model of Kawasaki disease[J]. Molecular medicine reports，2012，5（5）：1237-1240.

[3] 王萍，胥冰，张丽君. 不同类型HBV感染者外周血Treg/Th17细胞的变化及意义[J]. 中国免疫学杂志，2013，29（6）：618-621，624.

[4] 唐笛娇，牛倩，曾婷婷. 慢性淋巴细胞白血病患者外周血Th17和Treg细胞比率的平衡关系研究[J]. 中国实验血液学杂志，2013，21（2）：329-333.

[5] 齐文慧，黄小娟，王俊艳. Th17细胞与肿瘤微环境关系的研究进展[J]. 中国肿瘤临床，2013，32（5）：297-300.

[6] 姜红菊，王蕾，李润智，等. Th1/Th2、Treg/Th17漂移在急性冠状动脉综合征中的研究进展[J]. 中华临床医师杂志，2013，7（7）：177-178.

[7] Everts B，Smits HH，Hokke CH. Helminths and dendritic cells： sensing and regulating via pattern recognition receptors， Th2 and Treg responses[J]. European Journal of Immunology，2010，40（6）：1525-1537.

[8] 戴娟，张光波，高楠，等. 炎症性肠病患者外周血辅助性T细胞1和辅助性T细胞17水平及其临床意义[J]. 中华内科杂志，2013，52（5）：375-378.

[9] Dorota Darmochwal-Kolarz，Magdalena Kludka-Sternik，Jacek Tabarkiewicz，et al. The predominance of Th17 lymphocytes and decreased number and function of Treg cells in preeclampsia[J]. Journal of Reproductive Immunology，2012，93（2）：75-81.

[10] 陈玉林，菅颖，刘民杰. 动脉粥样硬化小鼠辅助性T细胞17和调节性T细胞功能失衡的机制研究[J]. 中华心血管病杂志，2013，41（5）：416-421.

[11] 朱雪梅，刘素芳，刘小柳. 骨髓增生异常综合征患者调节性T细胞和Th17细胞水平[J]. 中华血液学杂志，2013， 34（6）548-549.

[12] 李洋，崔彦，毕宏生. 白细胞介素-2与白细胞介素-23对小鼠类结合蛋白特异性T细胞向Th1、Th17分化的诱导及致病性研究[J]. 中华眼科杂志，2013，49（3）：224-229.

（收稿日期：2013-09-25）