二妙丸中苍术素含量测定

陈骄华，汪祖光，江玲兴，黄传俊

(1.湖北省阳新县人民医院检验科、药剂科，阳新 435200;2.湖北省鄂州市中心医院药学部，鄂州 436000;3.湖北省中医院药学部，武汉 430070)

二妙丸中苍术素含量测定

陈骄华1，汪祖光1，江玲兴2，黄传俊3

(1.湖北省阳新县人民医院检验科、药剂科，阳新 435200;2.湖北省鄂州市中心医院药学部，鄂州 436000;3.湖北省中医院药学部，武汉 430070)

目的 建立测定二妙丸中苍术素含量的反相高效液相色谱法。方法Agilent HC-C18Analytical(250 mm× 4.6 mm,5 μm)色谱柱;以乙腈和水梯度洗脱,流速为1.0 mL·min-1;检测波长340 nm;柱温30℃;进样量10 μL。结果苍术素在6.08～30.40 μg·mL-1浓度范围内具有良好的线性关系,r=0.999 8,苍术素平均回收率为99.6%,RSD= 1.9%(n=9)。结论该方法简便,准确,重复性好,适用于二妙丸中苍术素含量测定。

二妙丸；苍术素；含量测定；色谱法,高效液相,反相

二妙丸收载于《中华人民共和国药典》2010年版一部[1],主要由苍术和黄柏两味药组成。是中医燥湿清热的基础名方,主要用于治疗湿热下注、足膝红肿热痛、下肢丹毒、白带、阴囊湿痒等病症。在其药品标准中仅采用薄层扫描色谱法测定黄柏中盐酸小檗碱含量,国内有文献报道用高效液相色谱法测定该药中盐酸小檗碱和黄柏碱含量[2-3],而对于该药中苍术的反相高效液相色谱法测定含量笔者未见文献报道。笔者在本实验中采用反相高效液相色谱梯度洗脱法测定二妙丸中苍术素含量,该方法简便、快速、准确,可用于二妙丸的质量控制。

1 仪器与试药

1.1 仪器 戴安P680高效液相色谱仪,UVD170U检测器(美国戴安公司),BS124S型电子天平(北京赛多利斯仪器有限公司,最小精度0.1 mg)。

1.2 试药 苍术素对照品(批号:17-2001,上海标准化研究中心提供,含量:99.86%),二妙丸(湖南天济草堂制药有限公司,批准文号:国药准字Z20053512,规格:6g×20袋,批号:10042213,10071205, 10080503)。乙腈(美国Fisher公司,色谱纯)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:Agilent HC-C18Analytical (250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相:以水-乙腈为流动相进行梯度洗脱(乙腈在0～5 min为30%→35%;在5～7 min由35%→55%;在7～30 min由55%→70%;在30～45 min由70%→75%,测定波长为340 nm),流速:1.0 mL·min-1;柱温30℃;进样量:10 μL。在该色谱条件下,苍术素和相邻峰的分离度均＞1.5,理论板数按苍术素峰计算为9 800。

2.2 溶液的制备

2.2.1 苍术素对照品储备溶液 取苍术素对照品精密称定15.2 mg,置100 mL量瓶,加甲醇稀释至刻度,摇匀。

2.2.2 供试品溶液 取本品研细,取二妙丸细粉2 g精密称定,加甲醇100 mL超声提取30 min,移至100 mL量瓶,定容至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。

2.2.3 阴性对照溶液 取缺苍术的样品,按本品制备工艺,制得阴性样品,精密称取阴性样品1 g,同供试品溶液制备方法制得阴性对照溶液。

2.3 线性关系考察 精密量取苍术素对照品储备溶液2,3,5,8,10 mL置50 mL量瓶,用甲醇稀释至刻度,摇匀,制得系列对照品溶液。精密吸取系列对照品储备溶液各20 μL注入液相色谱仪,以苍术素对照品浓度(μg·mL-1)为横坐标(X),其峰面积为纵坐标(Y),进行线性回归,苍术素标准品线性回归方程为:Y= 2 130.4X+105.3,r=0.999 8。结果表明,苍术素浓度在6.08～30.40 μg·mL-1内与峰面积有良好的线性关系。

2.4 精密度实验 取同一份苍术素对照品溶液,按含量测定方法精密吸取10 μL注入液相色谱仪,重复进样5次,测定峰面积值,苍术素峰面积的RSD为0.75%。结果表明该法精密度良好。

2.5 稳定性实验 依法取同一供试品溶液,分别于1,2,4,6,8 h测定苍术素峰面积,结果峰面积测定值基本不变,苍术素峰面积RSD分别为0.93%,说明供试品溶液在8 h内稳定性良好。

2.6 重复性实验 取同一样品(批号:10042213),按“2. 2.2”项制备方法平行制备5份供试品溶液,依法测定峰面积,结果每克样品中苍术素0.62 mg,RSD为1.0%。表明该方法具有较好的重复性。

2.7 回收率实验 取已测含量的二妙丸(批号: 10042213)约1 g,分别精密加入苍术素对照品储备溶液4,5,6 mL,按供试品溶液制备方法操作,在上述色谱条件下测定含量,计算回收率,结果见表1。苍术素平均回收率99.6%,RSD=1.9%。

表1 苍术素回收率实验结果 mg

2.8 样品的含量测定 取3批样品(批号:10042213, 10071205,10080503)按“2.2.2”项制备方法制备供试品溶液,精密吸取20 μL注入液相色谱仪,记录峰面积。另取苍术素对照品溶液,同法测定,按外标法以峰面积计算二妙丸样品中苍术素含量。结果3批样品中苍术素平均含量分别为0.62,0.58,0.68 mg·g-1, RSD分别为1.0%,1.4%,0.9%。

3 讨论

在选择流动相过程中,笔者曾采取甲醇-水、乙腈-水等度系统,但分离效果均不理想。经反复实验后,发现以乙腈和水梯度洗脱时,能使苍术素和相邻物质得到满意分离,保留时间合适,故择选乙腈和水梯度洗脱。

通过对样品提取方法进行考察,分别考查了超声处理与加热回流两种提取方式。结果显示,分别采用沸水浴上加热回流1 h、超声处理1 h、超声处理30 min,3种提取方法结果相差不大(RSD=1.2%),故选择超声处理30 min。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社,2010:414.

[2] 张丽,潘超.高效液相色谱法同时测定二妙丸中盐酸小檗碱和黄柏碱的含量[J].中国新药杂志,2011,20(22): 2262-2264.

[3] 蔡俊安.高效液相色谱法测定二妙丸中盐酸小檗碱的含量[J].中国中医药信息杂志,2011,18(1):55-56.

DOI 10.3870/yydb.2014.03.031

R286;R927.1

A

1004-0781(2014)03-0380-02

2013-06-08

2013-07-20

陈骄华(1975-),女,湖北阳新人,主管技师,研究方向:临床检验和含量检测。电话:0714-7323372,E-mail：811405618@qq.com。

汪祖光,男,湖北阳新人,副主任药师,研究方向:临床药学和药物分析。电话:0714-7323372,E-mail：wangzuguang@sina.com。