山楂、杭菊花、决明子煎剂对甲基硫氧嘧啶诱导小鼠动脉硬化的保护作用研究*

宫汝淳，苗婷婷，丁录军，孟丹慧，杨 秀

（通化师范学院生命科学学院，吉林通化 134002）

山楂、杭菊花、决明子煎剂对甲基硫氧嘧啶诱导小鼠动脉硬化的保护作用研究*

宫汝淳，苗婷婷，丁录军，孟丹慧，杨 秀

（通化师范学院生命科学学院，吉林通化 134002）

观察山楂、杭菊花、决明子（SHJ）煎剂高、中、低剂量代茶灌胃对小鼠动脉硬化（AS）模型的保护作用.用甲基硫氧嘧啶和动物猪油造小鼠动脉硬化模型，采用血象法分析检测小鼠血清总胆固醇（TC）、血清甘油三脂（TG）、血清高密度脂蛋白胆固醇（HDL－C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL－C）的含量，观察小鼠主动脉弓血管的形态学变化.研究结果表明:与正常对照组比较，模型组小鼠血清HDL－C含量显著减少，TG、TC、LDL－C显著增加（p＜0.05）;与正常对照组比较，模型组血管壁增厚，脂肪堆积物增多.与模型组比较，山楂、杭菊花、决明子煎剂高、中剂量组小鼠血清HDL－C含量显著增加，TC、TG、LDL－C含量显著减少，对血管壁上脂肪的清除作用效果显著.结论:山楂、杭菊花、决明子煎剂代茶灌胃对小鼠高血脂模型具有保护作用，并能清除残留在血管壁上多余的脂肪堆积产物，加速脂肪物质代谢，预防动脉硬化的形成.

血清;动脉硬化;小鼠

动脉硬化（AS）是一种常见疾病，常累及心、脑血管等重要部位而导致严重后果.因其并发心、脑血管意外事件而死亡的比率占疾病死亡率的首位，故被称为“头号杀手”.近年来，中医药抗AS研究取得了一定进展.目前已被证明有降脂作用的中药:首乌、决明子、泽泻、虎杖、柴胡、杜仲、金银花等能抑制脂质在肠道的吸收;泽泻还能抑制胆固醇在体内合成;泽泻、首乌、黄精、山楂、灵芝等能促使血浆中脂蛋白的转运与脂质的清除;柴胡、茵陈、大黄等可促进脂质从肠道排泄.这些中草药是通过调整脂质代谢的作用途径，缓解脂质代谢紊乱来达到降脂的目的.脂质物沉积于动脉内膜是导致AS最主要的原因［1－3］，因此调整脂质代谢是抗AS的关键.笔者通过研究山楂、杭菊花、决明子煎剂高、中、低剂量对甲基硫氧嘧啶诱导小鼠动脉硬化的保护作用，以期为中草药应用于动脉硬化的治疗和预防提供理论参考.

1 材料

1.1 实验动物

SPF级雄性健康小白鼠，体重（22±2）g，由长春高新经济动物饲养中心提供，合格证号2014－008.

1.2 主要试剂

动物油（市售）;甲基硫氧嘧啶片，批号H44020367，广州白云山光华制药股份有限公司;总胆固醇测定试剂盒，批号2400079，广州市希迈医学诊断用品有限公司;甘油三酯测定试剂盒，批号2400184，四川省新成生物科技有限责任公司;高密度脂蛋白、低密度脂蛋白测定试剂盒，批号2400728，上海北加生化试剂有限公司.

1.3 仪器

徕卡冰冻切片机:型号CM1950，北京悦昌行科技有限公司;生物显微镜:型号XSP21－01V，上海立光精密仪器有限公司;半自动生化分析仪:型号AT－658PLUS型，成都一科仪器设备有限公司;台式离心机:型号GT101，北京时代北利离心机有限公司;旋转蒸发仪:型号R502－2，西安智琦仪器仪表有限公司.

2 方法

2.1 山楂、杭菊花、决明子煎剂制备

山楂、杭菊花、决明子经通化劲峰老百姓大药房采购并由王力明药剂师鉴定.山楂、杭菊花、决明子各100g，加1000mL水浸30min煮沸、并置于文火去掉滤液，反复3次，合并滤液至100mL，冷藏备用.每毫升含生药3g.

2.2 动物分组及给药

60只小鼠随机分为6组，即正常对照组，模型组，洛伐他丁阳性药组以及山楂、杭菊子、决明子水煎剂高、中、低剂量组，每组10只，模型组按小鼠体重0.10mL/10g·d－1灌胃甲基硫氧嘧啶及动物油（取猪油20g置于500mL烧杯中，在电炉上加热融化，再加入甲基硫氧嘧啶1.0g，充分搅拌使其溶解），给药质量浓度为 0.0025g/10g·d－1;正常对照组灌胃等量蒸馏水;SHJ水煎剂高、中、低剂量组灌胃甲基硫氧嘧啶及动物油同时按小鼠体重0.10mL/10g·d－1灌胃给予山楂、杭菊花、决明子煎剂，给药质量浓度为1.08g/10g·d－1、0.54g/10g·d－1、0.27g/10g·d－1;阳性药物组灌胃甲基硫氧嘧啶及动物油同时按0.0001g/10g·d－1灌胃洛伐他丁，饲养2周后，测定血脂水平，以 TC、TG、LDL－C显著升高为标准，确定动脉硬化造模成功.［4］

2.3 数据处理

采用SPSS数据处理软件，对实验进行个体因素与组间存在差异检验，以P＜0.05为有显著性差异.

3 结果

3.1 SHJ对小鼠血清总胆固醇含量的影响

药物入血20d后，心脏取血1mL离心，以3500转/min离心，15～20min，取上清液置半自动生化分析仪测血清总胆固醇含量的变化，测定方法根据参考文献［5－7］，结果见表 1.

表1 SHJ对小鼠血清总胆固醇含量的影响（n=10）

总胆固醇是指血液中所有脂蛋白所含胆固醇之总和，是构成细胞膜的主要成分，其血清浓度可作为脂代谢的指标，总胆固醇高了，会在人体动脉中形成硬化的板块，随着硬化板块的增多，动脉逐渐地变狭窄甚至受阻［8－9］.通过表1可以看出，模型组TC升高，与对照组比较显著升高（P＜0.05），说明造模成立;SHJ灌胃实验组与模型组比较，具有显著性差异（P＜0.05），SHJ灌胃实验组能有效抑制TC的升高，且作用与洛伐他丁相当.

3.2 SHJ煎剂对小鼠血清甘油三酯含量的影响

药物入血20d后，心脏取血1mL离心，取上清液置半自动生化分析仪测血清甘油三酯含量的变化，结果见表2.

表2 SHJ对小鼠血清甘油三酯含量的影响（n=10）

表2研究结果显示，模型组TG升高，与对照组比较有极显著性差异（P＜0.01），说明造模成立;SHJ灌胃实验组与模型组比较，高中剂量组能显著降低TG水平（P＜0.05），且作用与洛伐他丁相当;低剂量组作用效果不存在显著性差异.

3.3 SHJ煎剂对小鼠血清高密度脂蛋白、低密度脂蛋白含量的影响

药物入血20d后，心脏取血1mL离心，取上清液置半自动生化分析仪测小鼠血清高密度脂蛋白、低密度脂蛋白含量变化，结果见表3.

表3SHJ对小鼠血清（LDL－C）、（HDL－C）含量的影响（n=10）

从表3可以看出，模型组比正常对照组小鼠血清高密度脂蛋白（HDL－C）含量降低，有显著差异（P＜0.05）;高、中剂量组和阳性药组均比模型组有显著升高（P＜0.05），表明SHJ煎剂高、中剂量有显著抑制甲基硫氧嘧啶和动物油诱导小鼠高密度脂蛋白降低的作用.与正常对照组比较，模型组低密度脂蛋白有极显著升高（P＜0.01），表明甲基硫氧嘧啶诱导小鼠高血脂模型建立;SHJ煎剂灌胃实验组，高、中、低三个剂量组均能抑制LDL－C含量的升高，但作用不明显（P＞0.05）.

3.4 SHJ对小鼠血管形态学的影响

小鼠心脏取血后，颈椎脱臼立即处死，剖腹分离腹主动脉，并将腹主动脉置于10%中性福尔马林中固定，包埋剂包埋，冰冻切片机切5um厚切片，常规HE染色及Masson染色，镜下观察形态学改变，见图A ～F.

模型组可见血管内皮连续性破坏，管壁局部血管腔明显突出，形成斑块，并有坏死物质堆积管壁，弹性组织不明显，动脉外膜变薄;SHJ煎剂灌胃实验组高剂量组管壁有少量堆积物，内皮虽然有不同程度的凹陷，但清晰可见血管内皮;中、低剂量组血管内皮有脂肪物质堆积.由图A～F可见，甲基硫氧嘧啶和动物油可造成动脉血管粥样硬化，与正常对照组比较，模型组造模成立，SHJ煎剂高剂量组能抑制高脂肪物质残留，加速脂肪物质分解，能较好地预防和控制高血脂动脉硬化症.［10］

4 结论

动脉粥样硬化就是动脉壁上沉积了一层像小米粥样的脂类，使动脉弹性减低、管腔变窄的病变.高血脂、高胆固醇亦是促进动脉粥样硬化发生、发展的重要因子，甲基硫氧嘧啶和动物油可诱导小鼠高血脂、高胆固醇，影响脂类物质代谢，诱发动脉硬化形成.山楂、杭菊花、决明子煎剂高、中、低剂量可不同程度抑制小鼠血清中总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白含量的升高;其作用主要通过离子介导控制外源性脂类吸收，包括轻泻、缓泻、植物固醇竞争脂化酶和多糖类与胆盐结合而减少胆固醇吸收;抑制脂质合成，尤其是抑制胆固醇合成限速酶——羟甲基戊二酰辅酶A还原酶，从而减少胆固醇的细胞内合成;促进脂质的转运和清除，影响脂质的肝肠循环，加速其排泄.中草药山楂、杭菊花、决明子煎剂代茶饮能够有效抑制高血脂、高胆固醇引起的动脉硬化，对动脉硬化具有较好的预防和治疗作用.

图1 药物对动脉血管的影响

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R285

A

1008－7974（2014）03－0039－03

2014－05－19

宫汝淳（1965－），女，吉林通化人，硕士，高级实验师.

何晓燕（1972－），女，吉林通化人，硕士，教授.

（责任编辑:陈衍峰）