HIF-1α和VEGF在扁平苔藓中的表达及意义

王胜 葛清莲

扁平苔藓是常见的慢性炎症性皮肤病之一, 其主要组织病理学改变为表皮角化过度, 基底细胞液化变性, 真皮浅层淋巴细胞带状浸润［1］, 其确切的发病机制至今尚未阐明。近年来扁平苔藓发病的机制一直是人们研究的热点。缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)是在缺氧条件下广泛存在于动物和人体内的转录因子, 于1992年在细胞核提取物中发现, 可能为扁平苔藓发病的关键因素之一, 而HIF-1α可在基因水平上直接调控血管内皮生长因子(VEGF)的表达并促进扁平苔藓中真皮毛细血管的增生, 本实验拟用免疫组织化学方法, 检测扁平苔藓组织中的HIF-1α、VEGF的表达, 探讨HIF-1α、VEGF与扁平苔藓发病的关系。

1 材料与方法

1.1 材料 40例标本均来自本院皮肤科2011年5月～2013年12月手术切除的并经病理检查证实的扁平苔藓患者, 其中男15例, 女25例, 年龄25～72岁, 平均年龄48.5岁, 组织标本取出后立即浸入10%甲醛溶液中固定, 常规石蜡包埋,4 μm连续切片, HE染色, 同时取正常皮肤标本10例作为对照, 对照组病例均来自本院整形科。

1.2 主要试剂 鼠抗人HIF-1α单克隆抗体和鼠抗人VEGF单克隆抗体、即用SP型试剂盒和浓缩型DAB试剂盒均购自武汉博士德生物有限公司。

1.3 实验方法 链霉亲和素-过氧化物酶法(S-P)：将石蜡切片脱蜡至水化；加3%双氧水灭活内源性过氧化物酶；微波修复20 min, 滴加正常山羊血清封闭液, 依次加入一抗(HIF-1α工作浓度1：100稀释, VEGF工作浓度1：50稀释)、辣根过氧化物酶标记链霉素亲和素工作液；DAB显色, 苏木素复染脱水透明、封片。

1.4 染色结果的判定 HIF-1α表达定位于细胞核或细胞浆中, 阳性细胞染色呈棕黄色颗粒；VEGF表达以血管内皮细胞浆中出现棕黄色颗粒为阳性。每张切片在500倍光学显微镜下选取10个视野, 每个视野统计10个细胞中的阳性细胞数, 总数除以10, 乘以100%, 得到该标记物的阳性细胞表达指数。

1.5 统计学方法 应用SPSS10.0软件进行分析, 计数资料采用χ2检验和Spearman相关分析, 以P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 HIF-1α在扁平苔藓皮损中和正常皮肤组织中的表达HIF-1α蛋白表达分级方法如下：(-)阳性细胞数<1%；(+)阳性细胞数1%～10%;(+ +)阳性细胞数10%～50%; (+ + +)阳性细胞数>50%, 将HIF-1α分为高表达和低表达二组。40例扁平苔藓皮损中HIF-1α阳性表达率为85.00%(34/40), 正常皮肤中阳性率20.00%(2/10)与扁平苔藓皮损组相比, 差异有统计学意义(P<0.05)。VEGF表达分级沿用HIF-1α表达分级法, 分为(-)～(+ + +)共四级。本组实验中, 扁平苔藓皮损中VEGF表达阳性率为95.00%(38/40)；正常皮肤中阳性率10.00%(1/10), VEGF在扁平苔藓及正常对照皮肤中的表达差异有统计学意义(P<0.05)。

2.2 HIF-1α与VEGF在扁平苔藓皮损与正常皮肤表达的关系 经Spearman相关分析, 本实验扁平苔藓中HIF-1α表达与VEGF表达呈正相关(相关系数r=0.56)。见表1。

表1 HIF-1α与VEGF在扁平苔藓皮损和正常皮肤的表达情况(n)

3 讨论

扁平苔藓是一种病因不明的慢性炎症性疾病, 好发于皮肤、毛囊、黏膜和指(趾)甲, 皮损通常为紫红色多角形瘙痒性扁平丘疹, 有特征的组织病理学变化［2］。扁平苔藓的发生机制尚不明确, 目前研究认为, 扁平苔藓的发生与免疫失调及炎性损伤有关, 近些年来研究表明, HIF-1α是介导肿瘤细胞缺氧适应的关键性转录调控因子, 可能在基因水平上直接调控VEGF的表达并促进扁平苔藓真皮血管的生长［3］。HIF-1α是一种核转录因子, 在总体上调控细胞对缺氧的反应状况, 通过上调血管内皮生长因子表达促进血管形成, 研究表明［4］, 在人类许多肿瘤中检测出HIF-1α、VEGF的过度表达。HIF-1α可能是实体肿瘤血管形成的初始启动因素之一［3］。研究已证实VEGF是刺激扁平苔藓血管生成的最关键的生长因子, 而HIF-1α能增加VEGF的表达, 促进扁平苔藓血管的生成, 缓解缺氧状态。本实验研究结果表明：HIF-1α、VEGF在扁平苔藓组织中表达阳性率高, 而在正常皮肤组织中表达阳性率低, 且HIF-1α与VEGF在扁平苔藓组织中表达呈正相关, 说明VEGF通过诱导血管生成来促进扁平苔藓的生长, 推测在扁平苔藓的血管生成过程中HIF-1α与VEGF呈协调一致的表达, 提示HIF-1α参与血管形成是通过影响VEGF的表达来实现的, 二者在扁平苔藓的血管生成中具有协同作用。研究也表明以HIF-1α为靶点, 抑制靶基因VEGF的表达, 可能减少扁平苔藓血管的生成, 从而抑制扁平苔藓的生长, 可能将来成为扁平苔藓治疗的新方法。

总之, 扁平苔藓的生长演变过程是一个T细胞增殖和凋亡的动态转化过程［3］。而本实验研究表明扁平苔藓血管的形成有可能通过HIF-1α→VEGF→微血管形成的途径实现的。目前关于HIF-1α的研究刚刚开始, 还有很多临床未研究的领域, 但是随着基础研究的不断深入, 以HIF-1α为靶点治疗扁平苔藓将可能成为新的重要手段之一。

［1］ 朱学骏, 涂平.皮肤的组织病理学诊断.第2版.北京：北京医科大学出版社, 2001:138.

［2］ 赵辩.中国临床皮肤性病学.南京：江苏科学技术出版社,2010:1037.

［3］ Semenza GL.HIF-1 and tumor progression; pathophysiology and therapeutics.Trends Mol Med, 2002(8):62-67.

［4］ Greijer AE, van der wall E.The role of hypoxia inducible factor 1 inhypoxia induced apoptosis.Journal of Clinical Pathology, 2004(57):1009-1014