高效液相色谱蒸发光散射检测器测定虚汗停颗粒中黄芪甲苷的含量

郑 琰王雅静

（1 朝阳市食品药品检验所，辽宁 朝阳 12200；2 朝阳市食品药品安全监督所，辽宁 朝阳 122000）

高效液相色谱蒸发光散射检测器测定虚汗停颗粒中黄芪甲苷的含量

郑 琰1王雅静2

（1 朝阳市食品药品检验所，辽宁 朝阳 12200；2 朝阳市食品药品安全监督所，辽宁 朝阳 122000）

目的探讨利用高效液相色谱蒸发光散射检测器测定虚汗停颗粒中黄芪甲苷含量的方法。方法采用KromasilC18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱；流动相为乙腈-水（32∶68），流速1.0 mL/min。结果黄芪甲苷进样量在0.1950～4.8750 μg(r=0.9998)线性范围内，线性关系良好，平均回收率99.44%，RSD=1.2%(n=6)。结论利用高效液相色谱蒸发光散射检测器测定方法准确，重复性好，可用于虚汗停颗粒中的质量控制。

虚汗停颗粒；黄芪甲苷；蒸发光散射检测器

虚汗停颗粒由黄芪、浮小麦、大枣、糯稻根和牡蛎（煅）制备而成，收载于卫生部药品标准中药成方制剂第十四册，具有益气，养阴，固表敛汗功效，用于气阴不足之自汗、盗汗及小儿盗汗。由于原标准只有薄层色谱法对黄芪的定性分析，无定量分析，达不到对黄芪的质量控制及药品本身的疗效控制，故建立HPLC法对黄芪进行含量测定[1]。

1 仪器与试药

1.1 仪器：Waters e2695型高效液相色谱仪；Waters2424型蒸发光散射检测器；Waters Empower色谱工作站。

1.2 试药：黄芪甲苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110781-200613）；虚汗停颗粒（批号：120501，120801，121002）乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件：色谱柱Kromasil C18（4.6 mm×250 mm；5 μm）；流动相：乙腈-水（32∶68）；流速：1.0 mL/min；柱温：28 ℃；ELSD检测器参数：漂移管温度：50 ℃；气流（压缩空气）压力：400 Pa；理论板数：按黄芪甲苷计算不低于4000[2]。

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液的制备：经减压干燥的黄芪甲苷精密称取适量作为对照品，加甲醇制成每1 mL含0.2 mg的溶液，即得对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备：取虚汗停颗粒，研细，取粉末1.6 g，精密称定，精密加入甲醇100 mL，称定重量，密塞，冷浸过夜，加热回流2 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液50 mL，蒸干，残渣加水10 mL，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次40 mL，把提取液合并，取40 mL用浓氨试液洗涤，充分洗涤3次后弃去洗涤液，蒸干提取液，用5 mL量瓶收集残渣，加甲醇至刻度，摇匀，即得供试品溶液[3]。

2.2.3 阴性对照溶液的制备：取缺黄芪的以外的其他药工材，按所确定的工艺生产阴性样品，方法同2.2.2项制备，即得阴性对照溶液。

2.3 方法学考察

2.3.1 专属性实验：分别精密吸取按照以上方法制备的对照品溶液、供试品溶液、阴性供试品溶液各20 μL，分别注入液相色谱仪，依法测定。在黄芪甲苷对照品色谱相应的位置上，供试品溶液具有相同保留时间的色谱峰，阴性对照品溶液在此峰位无吸收。见图1。

2.3.2 线性关系考察：分别精密吸取对照品溶液1、5、10、15、20、25 μL注入液相色谱仪，测定黄芪甲苷的峰面积。根据测定结果绘制标准曲线，横坐标取对照品进样量，纵坐标取峰面积积分值，经计算回归方程为：Y=124511X-308431，r=0.9998，结果显示：黄芪甲苷对照品进样量在0.1950～4.8750 μg范围内线性关系良好。

2.3.3 精密度试验：取供试品（批号120501），精密称取1.6 g，按“2.2.2”项下的方法制备供试品溶液。精密量取20 μL，连续进样6次，色谱峰面积的RSD为0.18%，结果显示，仪器的精密度良好。

2.3.4 重复性试验：取同一批号（120501）样品6份，分别精密称取1.6 g，按”2.2.2”项下方法制备供试品溶液，每次进样20 μL，记录峰面积，经测定黄芪甲苷的平均含量为0.2164 mg/g，RSD为1.3%，结果显示，利用高效液相色谱蒸发光散射检测器测定方法重复性良好[4]。

2.3.5 稳定性试验：取同一供试品溶液，于0、2、4、8、12 h分别进样20 μL，分别进样分析，测定黄芪甲苷峰面积的RSD为0.28%，结果显示，供试品溶液在12 h内基本稳定。

2.3.6 加样回收率试验：取已知含量的同批样品（批号120501，黄芪甲苷含量为0.2164 mg/g）6份，每份0.8 g，精密称定，分别精密加入黄芪甲苷对照品溶液(0.1950 mg/mL)2 mL，按“2.2.2”项下的方法制备供试品溶液，精密量取20 μL，注入液相色谱仪，计算平均回收率，结果见表1。

表1 回收率试验测定结果

表2 样品中黄芪甲苷的测定结果（n=5）

图1 HPLC色谱图（a 阴性对照；b 对照品；c供试品）

2.3.7 样品测定：分别取以上3批样品，按上述方法制备供试品溶液，进样20 μL，测定样品中黄芪甲苷的含量，结果见表2。

3 讨 论

黄芪甲苷属于四环三萜类皂苷，仅有微弱的紫外末端吸收，检测灵敏度低，干扰因素多，尤其是溶液噪音比较大，故现在多采用HPLC-ELSD法测定黄芪甲苷的含量[5]。本文在文献的流动相的基础上，优化了漂移管的温度和载气压力。为了提高测定的灵敏度，在保证溶剂完全挥发的前提下，应选择较低的载气压力。本方法所用流动相简单，结果重现性好，故可作为虚汗停颗粒中黄芪甲苷含量测定的参考标准。

[1] 施法,侯峰,隋添爽,等.虚寒胃痛颗粒质量标准研究[J].中国药品标准,2013,13(3):184-188.

[2] 丁如贤,李霞,李一珺,等.黄芪药材、饮片中黄芪甲苷含量测定方法的改进[J].世界中医药,2013,8(6):669-671.

[3] 王慧森,刘明,李更生.高效液相色谱-蒸发光散射检测法在中药研究中的应用[J].中医研究,2008,21(8):61-64.

[4] 吴清华.反相高效液相色谱法测定复方黄芪口服液中黄芪甲苷的含量[J].空军医学杂志,2012,28(4):187-189.

[5] 邢婕,秦雪梅,张丽增.HPLC-ELSD法测定黄芪甲苷含量供试品溶液制备方法改进[J].山西大学学报(自然科学版),2008,31(4): 577-579.

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B

1671-8194（2014）35-0071-02