hTERC在宫颈脱落细胞及宫颈活检中表达

文丽芳+丁进进

摘 要：通过检测HR-HPV感染的宫颈脱落细胞和宫颈活检中hTERC的表达，并对实验结果进行比较分析，探讨其与宫颈病变的相关性。对84例HR-HPV阳性（宫颈活检结果为正常及慢性炎 12例、CINⅠ20例、CINⅡ20例、CINⅢ20例 、SCC 12例）应用荧光原位杂交技术（FISH检测），分别检测患者的宫颈脱落细胞和宫颈活检组织中hTERC的表达；应用受试者工作特征曲线（ROC曲线），分别确立细胞学和组织学中宫颈高度鳞状上皮内病变的最佳界值。实验结果为：①在正常及慢性炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ 、SCC组所对应的宫颈脱落细胞中，hTERC基因扩增的阳性率分别为8.33%（1/12）、15.00%（3/20）、80.00%（16/20）、90.00%（18/20）、100%（12/12），与宫颈病变的恶性程度呈正相关（rs=0.713，p<0.001）。②在正常及慢性炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ 、SCC组所对应的的宫颈活检中，hTERC基因扩增的阳性率分别为16.67%（2/12）、25.00%（5/20）、80.00%（16/20）、95.00%（19/20）、100%（12/12），与宫颈病变的恶性程度呈正相关（rs=0.671，p<0.001）。③宫颈脱落细胞中hTERC的扩增在预测≥CINⅡ病变中的敏感度、特异度，分别为92.00%和82.35%；宫颈活检组织中hTERC预测≥CINⅡ的敏感度、特异度，分别为87.03%和83.33%.实验可以得出：hTERC在HR-HPV阳性宫颈病变患者宫颈脱落细胞和宫颈活检组织中的表达具有一致性，hTERC在预测HR-HPV阳性且宫颈细胞学检查为异常的宫颈病变的病理结果中具有重要的意义。

关键词：hTERC；宫颈；脱落细胞；活检

中图分类号：R737.33 文献标识码：A 文章编号：2095-6835（2014）11-0155-02

hTERC（Human Telomerase RNA Component，人端粒酶RNA组成基因）位于人类3号染色体长臂，其异常扩增可导致肿瘤的发生。目前研究证明，hTERC在子宫颈鳞癌或腺癌、食管鳞癌、肺鳞癌等多种恶性肿瘤中存在异常扩增，与肿瘤的发展密切相关。目前研究显示，hTERC在宫颈活检和宫颈脱落细胞中的表达与宫颈病变具有一定的相关性。HR-HPV（High-risk Human Papilloma Virus，高危型人乳头瘤病毒）感染是宫颈上皮内瘤变和宫颈癌的主要致病原因，这一点已达成共识，但在15%～20%HPV持续感染病例中，只有低于5%发生宫颈癌。因此，如何从HPV感染者中分流出真正具有癌变风险的人群，是当前所面临的难题。本研究通过检测HR-HPV阳性宫颈脱落细胞和宫颈活检中hTERC的表达，并对实验结果进行比较分析，探讨其在HR-HPV阳性患者宫颈病变中诊断分流的意义。

1 资料来源

选择2013-07—2014-04就诊于山西省汾阳医院门诊HR-HPV阳性，且均有宫颈活检结果的宫颈脱落细胞学标本84例。患者年龄27～62岁，中位年龄37岁，均为有性生活妇女，其中宫颈活检结果为正常12例、CINⅠ20例、CINⅡ20例、CINⅢ20例、SCC12例。用荧光原位杂交技术检测宫颈脱落细胞和宫颈活检组织中hTERC基因扩增情况。

2 实验方法

应用荧光原位杂交技术，按照参考文献分别检测宫颈脱落细胞和宫颈活检中hTERC基因拷贝数，hTERC/CSP3DNA双色荧光探针（购自广州安必平科技有限公司）。hTERC DNA探针作为检测探针，杂交到3号染色体长臂，荧光信号为红色（四甲基罗丹明）；CSP3DNA作为对照探针，杂交到3号染色体着丝粒，荧光信号为绿。正常细胞为单个细胞核中红绿信号各2个，hTERC基因扩增异常细胞为单个细胞核中红信号>2个，绿信号≥2个。每张片子随机计数100个细胞，记录阳性信号细胞的个数和信号模式，绘制ROC曲线，确定高度鳞状上皮内病变（CINⅡ/Ⅲ/SCC）的阳性界值。本实验宫颈脱落细胞中验临界值为6%，宫颈活检中的临界值为11%，

3 统计学分析

采用SPSS1 6.0统计软件进行分析，比较各级病变中hTERC基因的扩增的阳性率；采用卡方检验，检验水准α=0.05；利用Spearman秩相关检验，分析hTERC的表达与宫颈病变的相关性。

4 实验结果

4.1 宫颈脱落细胞中hTERC基因的检测结果

在84例患者中，50例hTERC扩增阳性。在正常及慢性炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ 、SCC组所对应的宫颈脱落细胞中hTERC基因扩增的阳性率分别为8.33%（1/12）、15.00%（3/20）、80.00%（16/20）、90.00%（18/20）、100%（12/12），五组间比较差异具有统计学意义（（x2=48.858，p<0.001）。Spearman秩相关检验显示宫颈脱落细胞中hTERC的扩增与宫颈病变的恶性程度呈正相关，rs=0.713，p<0.001）。

宫颈脱落细胞中hTERC的扩增在预测≥CINⅡ病变中的敏感度、特异度，分别为92.00%和82.35%.

4.2 宫颈活检组织中hTERC基因的检测结果

在84例患者中，54例hTERC扩增阳性。在正常及慢性炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ 、SCC组所对应的的宫颈活检中hTERC基因扩增的阳性率分别为16.67%（2/12）、25.00%（5/20）、80.00%（16/20）、95.00%（19/20）、100%（12/12），五组间比较差异具有统计学意义（（x2=42.332，p<0.001）。Spearman秩相关检验显示宫颈脱落细胞中hTERC的扩增与宫颈病变的恶性程度呈正相关，rs=0.671，p<0.001）。endprint

宫颈活检组织中hTERC预测≥CINⅡ的敏感度、特异度，分别为87.03%和83.33%.

5 讨论

hTERC与端粒酶逆转录酶、端粒酶结合蛋白等共同参与端粒的组成，在人类端粒酶RNA基因中，在长约450个碱基的人端粒酶RNA序列中，有一段长11个核苷酸区域，发生在该模板区域的hTERC突变，将导致端粒酶功能改变，从而出现染色体异常。 hTERC基因由Feng等于1995年首次从肾癌293细胞系eDNA文库中筛选出，定位于3q26区，是合成端粒重复序列的模板。其模板序列为5—CUAACCCUAAC—3。虽然大量实验证明，HPV感染是宫颈癌的主要致病因素，甚至95%的癌前病变患者携带HPV癌基因；但在15%～20%HPV持续感染病例中，只有低于5%发生宫颈癌。只有当病毒持续感染且整合入宿主细胞，才会发展为宫颈高度鳞状上皮内病变。目前研究显示，hTERC在宫颈病变中的表达与宫颈病变具有一定的相关性。本课题较之前的研究不同，主要集中在对HR-HPV感染的宫颈脱落细胞和宫颈活检组织中的表达，通过检测宫颈脱落细胞与宫颈活检中hTERC基因的表达，发现二者的表达具有很好的一致性，hTERC的表达与宫颈病变的恶性程度呈正相关，预测宫颈高度上皮内病变的敏感度和特异度均较高。宫颈脱落细胞中hTERC的表达完全可以替代宫颈活检组织中hTERC的表达，对宫颈病变的活检结果提供一定的预测价值。对于hTERC扩增阳性的宫颈低度病变应密切随访，对于hTERC扩增阴性的宫颈低度病变可延长随访时间；而对于hTERC扩增阳性的宫颈高度上皮内病变，要警惕宫颈浸润癌的可能，并且及时治疗。

关于FISH检测宫颈高度鳞状上皮内病变中hTERC最佳界值的确定，目前主要有两种方法：一种为均数加减3倍的标准差；另一种为以宫颈活检为≥CINⅡ为金标准，绘制受试者特征曲线（ROC曲线），我们在这里更推荐后者。该界值的范围国内外报道多在5%～20%，本研究中应用ROC曲线确立宫颈脱落细胞中和宫颈活检中高度鳞状上皮内病变界值，分别为6%和11%，二者的误差考虑为宫颈活检组织中FISH细胞杂交的成功率略高于宫颈脱落细胞。对于不同文献报道中界值的误差考虑，与样本含量、是否合并HPV的感染及感染类型具有一定的相关性。总之，宫颈脱落细胞、宫颈活检组织中hTERC基因扩增与宫颈癌前病变和宫颈癌的发生相关，利用FISH技术检测hTERC的扩增，可对HR-HPV阳性患者病理诊断和可能的进展进行预测，避免宫颈癌前病变的诊断不足、宫颈低度病变的过度治疗，对长期无价值的随访等具有一定的意义。

参考文献

[1]Heselmeyer·Haddad K，Sommerfeld K，White NM，et a1.Ge-nomic amplification of the human telomerase gene（TERC）in papsmears predicts the development of cervical cancer[J].Am J Pathol，2005（04）.

[2]Andersson S，Wallin KL，Hellstrom AC，et a1.Frequent gain of the human telomerase gene TERC at 3q26 in cervical adenocarcinomas[J].Br J cancer，2006（03）.

[3]Chen Q，Wang X，Ru Y，et a1.Amplification of the telomcrascRNA component gene in the process of human esophageal carcinogenesis[J].Tohoku J Exp Med，2011（02）.

[4]Bobadilla D，Enriquez EL，Alvarez G，et a1.An interphase fluorescenee in situ hybridization assay for the detection of 3q26.2/EVI，rearrangements in myeloid malignancies[J].Br J Haema—tol，2007（06）.

[5]李静然，魏丽惠，刘宁，等.应用双色间期FISH技术中宫颈脱落细胞取材及制片方法的探讨[J].中国妇产科临床杂志，2007（06）.

[6]李素红，刘玲玲，马海霞，等.宫颈上皮癌变过程中人端粒酶逆转录酶基因扩增与人乳头状瘤病毒的表达[J].中华病理学杂志，2012（02）.

[7]Feng J，Funk WD，Wang SS，et a1.The RNA componet of human telomerase [J].Science，1995（522a）.

〔编辑：李珏〕endprint

宫颈活检组织中hTERC预测≥CINⅡ的敏感度、特异度，分别为87.03%和83.33%.

5 讨论

hTERC与端粒酶逆转录酶、端粒酶结合蛋白等共同参与端粒的组成，在人类端粒酶RNA基因中，在长约450个碱基的人端粒酶RNA序列中，有一段长11个核苷酸区域，发生在该模板区域的hTERC突变，将导致端粒酶功能改变，从而出现染色体异常。 hTERC基因由Feng等于1995年首次从肾癌293细胞系eDNA文库中筛选出，定位于3q26区，是合成端粒重复序列的模板。其模板序列为5—CUAACCCUAAC—3。虽然大量实验证明，HPV感染是宫颈癌的主要致病因素，甚至95%的癌前病变患者携带HPV癌基因；但在15%～20%HPV持续感染病例中，只有低于5%发生宫颈癌。只有当病毒持续感染且整合入宿主细胞，才会发展为宫颈高度鳞状上皮内病变。目前研究显示，hTERC在宫颈病变中的表达与宫颈病变具有一定的相关性。本课题较之前的研究不同，主要集中在对HR-HPV感染的宫颈脱落细胞和宫颈活检组织中的表达，通过检测宫颈脱落细胞与宫颈活检中hTERC基因的表达，发现二者的表达具有很好的一致性，hTERC的表达与宫颈病变的恶性程度呈正相关，预测宫颈高度上皮内病变的敏感度和特异度均较高。宫颈脱落细胞中hTERC的表达完全可以替代宫颈活检组织中hTERC的表达，对宫颈病变的活检结果提供一定的预测价值。对于hTERC扩增阳性的宫颈低度病变应密切随访，对于hTERC扩增阴性的宫颈低度病变可延长随访时间；而对于hTERC扩增阳性的宫颈高度上皮内病变，要警惕宫颈浸润癌的可能，并且及时治疗。

关于FISH检测宫颈高度鳞状上皮内病变中hTERC最佳界值的确定，目前主要有两种方法：一种为均数加减3倍的标准差；另一种为以宫颈活检为≥CINⅡ为金标准，绘制受试者特征曲线（ROC曲线），我们在这里更推荐后者。该界值的范围国内外报道多在5%～20%，本研究中应用ROC曲线确立宫颈脱落细胞中和宫颈活检中高度鳞状上皮内病变界值，分别为6%和11%，二者的误差考虑为宫颈活检组织中FISH细胞杂交的成功率略高于宫颈脱落细胞。对于不同文献报道中界值的误差考虑，与样本含量、是否合并HPV的感染及感染类型具有一定的相关性。总之，宫颈脱落细胞、宫颈活检组织中hTERC基因扩增与宫颈癌前病变和宫颈癌的发生相关，利用FISH技术检测hTERC的扩增，可对HR-HPV阳性患者病理诊断和可能的进展进行预测，避免宫颈癌前病变的诊断不足、宫颈低度病变的过度治疗，对长期无价值的随访等具有一定的意义。

参考文献

[1]Heselmeyer·Haddad K，Sommerfeld K，White NM，et a1.Ge-nomic amplification of the human telomerase gene（TERC）in papsmears predicts the development of cervical cancer[J].Am J Pathol，2005（04）.

[2]Andersson S，Wallin KL，Hellstrom AC，et a1.Frequent gain of the human telomerase gene TERC at 3q26 in cervical adenocarcinomas[J].Br J cancer，2006（03）.

[3]Chen Q，Wang X，Ru Y，et a1.Amplification of the telomcrascRNA component gene in the process of human esophageal carcinogenesis[J].Tohoku J Exp Med，2011（02）.

[4]Bobadilla D，Enriquez EL，Alvarez G，et a1.An interphase fluorescenee in situ hybridization assay for the detection of 3q26.2/EVI，rearrangements in myeloid malignancies[J].Br J Haema—tol，2007（06）.

[5]李静然，魏丽惠，刘宁，等.应用双色间期FISH技术中宫颈脱落细胞取材及制片方法的探讨[J].中国妇产科临床杂志，2007（06）.

[6]李素红，刘玲玲，马海霞，等.宫颈上皮癌变过程中人端粒酶逆转录酶基因扩增与人乳头状瘤病毒的表达[J].中华病理学杂志，2012（02）.

[7]Feng J，Funk WD，Wang SS，et a1.The RNA componet of human telomerase [J].Science，1995（522a）.

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宫颈活检组织中hTERC预测≥CINⅡ的敏感度、特异度，分别为87.03%和83.33%.

5 讨论

hTERC与端粒酶逆转录酶、端粒酶结合蛋白等共同参与端粒的组成，在人类端粒酶RNA基因中，在长约450个碱基的人端粒酶RNA序列中，有一段长11个核苷酸区域，发生在该模板区域的hTERC突变，将导致端粒酶功能改变，从而出现染色体异常。 hTERC基因由Feng等于1995年首次从肾癌293细胞系eDNA文库中筛选出，定位于3q26区，是合成端粒重复序列的模板。其模板序列为5—CUAACCCUAAC—3。虽然大量实验证明，HPV感染是宫颈癌的主要致病因素，甚至95%的癌前病变患者携带HPV癌基因；但在15%～20%HPV持续感染病例中，只有低于5%发生宫颈癌。只有当病毒持续感染且整合入宿主细胞，才会发展为宫颈高度鳞状上皮内病变。目前研究显示，hTERC在宫颈病变中的表达与宫颈病变具有一定的相关性。本课题较之前的研究不同，主要集中在对HR-HPV感染的宫颈脱落细胞和宫颈活检组织中的表达，通过检测宫颈脱落细胞与宫颈活检中hTERC基因的表达，发现二者的表达具有很好的一致性，hTERC的表达与宫颈病变的恶性程度呈正相关，预测宫颈高度上皮内病变的敏感度和特异度均较高。宫颈脱落细胞中hTERC的表达完全可以替代宫颈活检组织中hTERC的表达，对宫颈病变的活检结果提供一定的预测价值。对于hTERC扩增阳性的宫颈低度病变应密切随访，对于hTERC扩增阴性的宫颈低度病变可延长随访时间；而对于hTERC扩增阳性的宫颈高度上皮内病变，要警惕宫颈浸润癌的可能，并且及时治疗。

关于FISH检测宫颈高度鳞状上皮内病变中hTERC最佳界值的确定，目前主要有两种方法：一种为均数加减3倍的标准差；另一种为以宫颈活检为≥CINⅡ为金标准，绘制受试者特征曲线（ROC曲线），我们在这里更推荐后者。该界值的范围国内外报道多在5%～20%，本研究中应用ROC曲线确立宫颈脱落细胞中和宫颈活检中高度鳞状上皮内病变界值，分别为6%和11%，二者的误差考虑为宫颈活检组织中FISH细胞杂交的成功率略高于宫颈脱落细胞。对于不同文献报道中界值的误差考虑，与样本含量、是否合并HPV的感染及感染类型具有一定的相关性。总之，宫颈脱落细胞、宫颈活检组织中hTERC基因扩增与宫颈癌前病变和宫颈癌的发生相关，利用FISH技术检测hTERC的扩增，可对HR-HPV阳性患者病理诊断和可能的进展进行预测，避免宫颈癌前病变的诊断不足、宫颈低度病变的过度治疗，对长期无价值的随访等具有一定的意义。

参考文献

[1]Heselmeyer·Haddad K，Sommerfeld K，White NM，et a1.Ge-nomic amplification of the human telomerase gene（TERC）in papsmears predicts the development of cervical cancer[J].Am J Pathol，2005（04）.

[2]Andersson S，Wallin KL，Hellstrom AC，et a1.Frequent gain of the human telomerase gene TERC at 3q26 in cervical adenocarcinomas[J].Br J cancer，2006（03）.

[3]Chen Q，Wang X，Ru Y，et a1.Amplification of the telomcrascRNA component gene in the process of human esophageal carcinogenesis[J].Tohoku J Exp Med，2011（02）.

[4]Bobadilla D，Enriquez EL，Alvarez G，et a1.An interphase fluorescenee in situ hybridization assay for the detection of 3q26.2/EVI，rearrangements in myeloid malignancies[J].Br J Haema—tol，2007（06）.

[5]李静然，魏丽惠，刘宁，等.应用双色间期FISH技术中宫颈脱落细胞取材及制片方法的探讨[J].中国妇产科临床杂志，2007（06）.

[6]李素红，刘玲玲，马海霞，等.宫颈上皮癌变过程中人端粒酶逆转录酶基因扩增与人乳头状瘤病毒的表达[J].中华病理学杂志，2012（02）.

[7]Feng J，Funk WD，Wang SS，et a1.The RNA componet of human telomerase [J].Science，1995（522a）.

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