南五加皮煎剂对小白鼠四氯化碳急性肝损伤的保护作用

叶婉婷，王莹莹，胡 园，陈 露，朱小龙，刘 兴，罗德生

(1.湖北科技学院临床医学专业2010级本科，湖北 咸宁 437100；2.湖北科技学院基础医学院)

中药五加皮辛、苦、性温，入肝肾而祛风理湿，壮骨强筋，为损伤及风痹专药[1]。且五加皮分南五加皮和北五加皮，它们都是临床上使用的中药饮片，他们的药用部位、药材性状、药用作用存在一些相似，所以很容易造成混淆，甚至会出现代用的情况发生。其中因为北五加皮具有一定的毒性，所以为了保证实验的安全、有效，本研究采用的是南五加皮[2]。南五加皮具有抗缺氧、提高应激的作用，抗心肌缺血、抗氧化、改善血液流变学的作用，以及抗炎、镇痛、提高免疫力的作用[3]，而在化学性肝损害中的药理作用尚未见报道。本文研究南五加皮煎剂对小鼠四氯化碳(CCl4)肝损伤的保护作用。

1 材料和方法

1.1 药材与试剂

南五加皮由湖北省咸宁市中医医院提供，ALT和MDA试剂盒购自南京建成生物工程研究所，葡萄糖试剂盒购自中生北控生物科技股份有限公司，CCl4，进口分装，购自湖北大学化工厂。

1.2 仪器

AEL-200电子分析天平、TP-5000A电子秤均为湘仪天平仪器厂产品；721-E型分光光度计，上海光谱仪器有限公司产品。

1.3 动物及分组

健康小白鼠60只(湖北省实验动物研究中心提供，动物品系：KM，等级：SPF级)，雌雄不拘，体质量18～22g。适应性喂养1周后，随机分为5组，即模型对照组(模型组)、正常对照组(对照组)和南五加皮小、中、大3个不同剂量保护组，每组12只。不同剂量保护组的生药用量分别为0.40g/kg、0.80g/kg、1.60g/kg，分别相当于人体推荐摄入量的5倍、10倍、20倍。

1.4 方法

分别称取2.5、5、10 g南五加皮生药，用中药煎剂法制备煎剂，最后分别定容至50ml，作为小、中、大剂量组受试物，灭菌后冷藏备用。

各剂量组小白鼠用含不同浓度的南五加皮煎剂，模型组和对照组小白鼠用生理盐水，按每天0.1ml/10g经口灌胃，1次/d，连续12d。于第12d，除对照组小白鼠按2ml/kg灭菌生理盐水腹腔注射外，模型组和南五加皮各保护组按文献[4]给予CCl4，建立急性化学性肝损伤模型。24h后，按文献[5]方法，自小白鼠后眼眶静脉丛连续穿刺取各组动物血液，及时分离出血浆备用。采血后立即断颈处死小白鼠，称取动物体质量，以备计算肝脏系数。打开腹腔，分离出肝脏，生理盐水洗去肝表面血液，滤纸吸干水分称重。取肝脏组织测肝糖原含量和病理学检查。

1.5 检测指标

①ALT活性和MDA含量按试剂盒说明书操作，肝糖原含量测定按文献方法[6]操作；②肝脏系数的计算：肝脏重量/体质量 ；③肝组织病理学检查：按常规固定，石蜡包埋，超薄切片(厚约5mm),HE染色，光镜下观察。

1.6 统计学处理

2 结 果

2.1 动物的一般表现

造模前，各组小白鼠一般情况都好：饮食正常，运动快速活泼有力，被毛浓密而有光泽，眼睛鲜红而有精神。造模后，对照组小白鼠的一般状况同前，药物保护组小白鼠的饮食量稍有减少，活泼性稍差，毛发光泽；模型组小白鼠，注射CCl4后的当天晚上死亡1只，多只小白鼠步态不稳，活动度差，被毛紧贴身体、粗乱蓬松。

2.2 南五加皮煎剂对CCl4致小白鼠急性肝损伤血浆ALT活性和MDA含量的影响

模型组动物的血浆ALT活性和MDA含量均非常显著地高于对照组(P<0.01)，表明造模成功。各保护组中，除小剂量组小白鼠血浆ALT活性显著高于对照组外(P<0.05)，其他组动物的这两项指标与对照组均无统计学差异(P>0.05)，提示南五加皮煎剂对CCl4致小白鼠急性肝损伤有良好的保护作用，见表1。

表1 南五加皮煎剂对小白鼠血浆ALT活性和MDA含量的影响

2.3 南五加皮煎剂对肝组织肝糖原及肝脏系数的影响

CCl4能显著降低动物肝糖原的含量，使肝脏系数增加，而南五加皮煎剂能提高肝糖原的含量，降低肝脏系数，并有显著的量效关系。由此说明，南五加皮煎剂对肝脏有保护作用，见表2。

表2 南五加皮煎剂对肝组织肝糖原及肝脏系数的影响

2.4 肝组织病理学检测结果

镜下可见正常组小白鼠的肝小叶结构正常，肝细胞索结构清晰可辨。模型组动物的肝细胞气泡样变，细胞境界不清，细胞索解离，有明显的点、灶状坏死，有的甚至呈弥漫性坏死，淋巴细胞，单核细胞广泛浸润。药物处理组小白鼠的肝组织损伤明显减轻，小剂量组的肝细胞变性较明显，有点状或带状坏死，间质内可见炎性细胞的浸润，中、大剂量组的组织细胞变性很轻，无明显带状坏死，炎性细胞局限于汇管区，细胞境界清晰。

3 讨 论

给实验动物注射CCl4是复制急性化学性肝损伤动物模型的常用经典方法，重复性好。自由基及其自由基引发的脂质过氧化反应是CCl4诱导动物急性肝损伤的重要因素，其机制是：CCl4进人体内后，在肝细胞中经细胞色素P450代谢，生成活泼的三氯甲基自由基(·CCl3)和氯自由基(·Cl)，这些自由基攻击肝细胞膜磷脂分子上的不饱和脂酸发生脂质过氧化反应，或与肝微粒体脂质和蛋白质发生共价交联，从而破坏细胞膜结构，最终导致细胞及器官功能的丧失[7，8]。本实验结果发现，模型组动物的血浆ALT活性、MDA含量及肝脏系数均非常显著地高于对照组，而肝糖原含量却非常显著地低于对照组，这些都反映造模成功。南五加皮煎剂各剂量组的血浆酶活性、MDA含量、肝脏系数均非常显著地低于模型组，肝糖原含量非常显著地高于模型组，这些指标与对照组比较，其差异无统计学意义。肝组织病理学改变也能说明南五加皮煎剂对CCl4性肝损伤有保护作用，其作用机制可能是通过抑制自由基-脂质过氧化作用有关。结果提示，中药南五加皮可作为预防化学性肝损害的有效药物应用于临床。

[1]清徐大椿撰,伍悦点校.神农本草经百种录[M].北京：学苑出版社，2011:03

[2]许慧.南五加皮与北五加皮的鉴别[J].求医问药(下半月刊)，2012,10(7):73

[3]何玉洁.关于南五加皮的有关研究[J].光明中医，2012，27(2):392

[4]金晶，郑操，林丽，等.青皮对大鼠急性四氯化碳肝损伤保护作用的量效关系[J].时珍国医国药，2007，18(12)：2977

[5]陈桂枝，罗德生，王梅娟，等.茵陈煎剂对大鼠急性化学性肝损伤的保护作用[J].时珍国医国药，2005，16(7)：617

[6]丁莉，陈志， 金兰，等.玉树獐牙菜对小鼠实验性肝损伤的保护及肝糖原的影响[ J ].时珍国医国药，2007,18(7)：1567

[7]Eossa P，Houglum K，Trautwein C，et al.Stimulation of collagen al(l) gene expression is associated with lipid peroxidation in hepatocellular injury: a link to tissue fibrosis[J].Hepatology,1994，19(2): 1262

[8]沈洪，张蓓．急性肝损伤研究进展[J]．现代中西医结合杂志，2009，18(18)：2211