老年乳腺癌患者外周血趋化因子及其受体的表达

朱 旭 李 炯 杨 檬 曾冬竹

(重庆市渝北区人民医院心胸外科，重庆 401120)

血管生成在乳腺癌侵袭和转移过程中起着至关重要的作用，促血管生成因子是极为重要的乳腺癌预后因素〔1〕。目前，针对血管生成因子进行靶向生物治疗已成为临床防治肿瘤疾病的研究热点。临床研究证明，趋化因子在肿瘤的血管形成、播散与转移、发展演变等过程中的影响意义深远。趋化因子是一大类细胞因子超家族的蛋白多肽，具有特异性激活和募集白细胞小分子的作用。趋化因子不仅能够直接刺激肿瘤细胞促其生长， 还可促血管生成，从而达到间接促肿瘤细胞生长的作用〔2，3〕。本文拟探讨趋化因子及其受体在外周血中的变化及与乳腺癌发病机制的联系。

1 资料与方法

1.1临床资料 抽选2012年1月至2013年3月我院收治的45例老年乳腺癌患者，年龄57～73〔平均(63.7±4.8)〕岁，术后经病理检查均已确诊为浸润性导管癌，且腋窝淋巴结均已出现转移；抽选同期体检的健康者45例为对照组，年龄59～75〔平均(64.2±5.1)〕岁；均排除肝肾功能不全、心律失常、肺部疾病、心力衰竭、糖尿病以及电解质代谢紊乱等患者，均无创伤、应激以及感染等情况。

1.2方法 抽取患者空腹肘静脉血3 ml，离心分离出血清，再进行血清趋化因子检测；取2 ml静脉全血放入含抗凝剂的试管中，用于外周血CD3+T细胞表面受体的检测。采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清趋化因子，白介素(IL)-8、CCL20、正常细胞表达及分泌物因子(RANTES)、细胞趋化蛋白(MCP)-1检测试剂盒由上海博光科技公司生产，严格按试剂盒说明书操作。采用流式细胞仪分析外周血CD3+T淋巴细胞表面CXCR1、CCR6、CCR5、CCR2等趋化因子受体表达，CXCR1、CCR6、CCR5、CCR2鼠抗人单克隆抗体来自美国RD公司。主要步骤：①离心管中分别注入100 μl全血。②注入10 μl的CXCR1、CCR6、CCR5、CCR2单克隆抗体溶液，再置入4℃冰箱中过夜。③将洗液置入离心管中，混匀，然后离心去上清液，连续洗涤2次除去多余抗体。④摇匀沉淀加入1.3 μl工作浓度异硫氰酸荧光素的羊抗鼠IgG以及10 μl藻红蛋白抗CD3抗体，置入4℃冰箱中反应30 min。⑤加入3 ml红细胞裂解液充分溶血，1 000 r/min离心2 min，除去上清液。⑥用洗液洗涤以及离心2次，使其体积恢复到0.5 ml，再加入50 ml固定液，采用流式细胞仪检测。采用CellQuest软件收集和分析数据。

2 结 果

2.1两组患者血清趋化因子含量比较 研究组血清IL-8、CCL20、RANTES、MCP-1等趋化因子的含量明显高于对照组(P<0.05)，见表1。

2.2两组外周血CD3+T细胞表面受体表达比较 两组外周血CD3+T细胞表面CXCR1、CCR6、CCR5、CCR2等趋化因子受体表达比较无显著性差异〔研究组：对照组CXCR1(7.4±1.2)% vs (7.9±1.4)%、CCR6(2.6±2.1)% vs(2.4±1.9)%、CCR5(13.3±1.6)% vs (12.9±1.3)%、CCR2(6.4±1.1)% vs (6.7±1.0)%〕(P>0.05)。

表1 两组患者血清趋化因子含量及阳性率比较

3 结 论

临床研究发现，趋化因子及其受体与乳腺癌等多种恶性肿瘤发展及转移有着密切联系。一方面，一部分趋化因子可增强宿主抗肿瘤侵入特异性或者固有免疫反应；另一方面，部分趋化因子可通过促进肿瘤组织血管生成和癌症细胞增殖从而引起肿瘤加快生长和转移〔4～7〕。趋化因子相互作用可促成伪足形成及引起细胞膜皱褶，从而诱导癌症细胞发生趋化性迁移，最终导致癌症细胞从原发部位黏附，并借助血管基底膜以及细胞外基质膜通道进入到血液循环中，且转移到特定器官中。肿瘤细胞侵袭与转移并不是一个随机、被动的过程，而是主动的。起源于不同器官及组织肿瘤的转移方式均有其特定性， 是靶器官与癌症细胞多种特异性趋化因子及其受体之间相互作用的结果〔8～10〕。

趋化因子可分为CXC、CC、C、CX3C等四类，CXC类趋化因子根据是否有ELR基序可分为ELR-CXC和non-ELR-CXC两类。研究发现ELR-CXC趋化因子具有高效的促血管生长作用，如IL-8不仅能够直接刺激肿瘤细胞生长，还能促血管生成，间接加快肿瘤生长及转移〔11，12〕。RANTES是在活化时被调节的一类由正常T细胞表达以及分泌的蛋白， 是提示乳腺癌生长、演进以及转移的可靠标记物。MCP-1在肿瘤相关巨噬细胞募集、肿瘤生长转移以及抗肿瘤免疫过程中作用明显，是目前临床研究最广泛并且深入的一种趋化因子。趋化因子CCL20又称为巨噬细胞炎症蛋白-3α(MIP-3α)，其受体即CCR6，属七次跨膜孤儿受体，多在异型T细胞、中性粒细胞、B细胞以及未成熟的树突细胞上表达〔13〕。CCL20及其受体间的作用在B细胞发育、分化、未成熟树突细胞的介导及记忆性T细胞炎症部位迁移等过程中发挥至关重要的作用〔14〕。

本研究说明外周血趋化因子受体表达水平和乳腺癌的发生、发展无显著相关性。提示上述趋化因子可能参与乳腺癌发病机制，并且作用显著。

综上，乳腺癌患者外周血中IL-8、CCL20、RANTES、MCP-1等趋化因子浓度可作为理想的乳腺癌转移预测指标，CCL20、RANTES异常升高在乳腺癌的发病及进展中可能发挥着作用，IL-8、MCP-1 高表达可能预示预后较差。

4 参考文献

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10郭满盈,陈 扬,王 栋，等.乳腺癌患者外周血中趋化因子及其受体的研究〔J〕.国际检验医学杂志,2010；31(1):54-5.

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12郭满盈,陈 扬,徐利民.老年乳腺癌患者外周血趋化因子及其受体的表达〔J〕.中国医师进修杂志,2012；35(29)：1-2.

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14Byeong CL,Tae HL,Shalom A,etal.Involvement of the chemokine receptor CXCR4 and its ligand stromal cell-derived factor 1a in breast cancer cell migration through human brain microvascular endothelial cells〔J〕.Mol Cancer Res,2004；2(6):327-38.