染色体12p13上的rs12425791多态性与缺血性脑卒中患者血脂的相关性

古 联 宋旭津 谢娟娟 陈 清 严 雁 苏 莉

(广西中医药大学第一附属医院，广西 南宁 530023)

脑卒中是一种严重致残和致死的常见神经系统疾病,且约85%～90%的脑卒中为缺血性脑卒中(IS)〔1〕。近年一项全基因组关联研究(GWAS)〔2〕发现高加索人染色体12p13上NINJ2基因附近的rs12425791多态性与IS之间的关联达到了全基因组关联显著性水准，因此，rs12425791被认为是很有可能的IS的易感遗传变异。本研究分析IS患者rs12425791多态性与血脂水平的相关性。

1 对象与方法

1.1研究对象 2009年7月至2011年6月在广西中医药大学第一附属医院神经内科住院治疗的IS患者，每名患者均经2名主治医师以上职称的神经内科医师，根据1995年中华医学会第四次全国脑血管病学术会议《各类脑血管疾病诊断要点》〔3〕进行诊断，且所有患者均经CT和(或)MRI检查确诊为IS。共纳入166例IS患者，男104例，女62例，平均年龄(68.23±8.46)岁。采用自行设计的统一调查问卷，对病例或其家属进行询问，内容包括研究对象的一般情况、高血压病史和糖尿病病史等既往病史以及吸烟、饮酒等行为生活方式状况。166例病例均自我报告为广西汉族人，并知情同意，而且所有病例之间均无亲缘关系。

1.2标本采集及血脂检测 患者住院次日清晨空腹抽取外周血液标本5 ml，分为抗凝血和非抗凝血。将抗凝血置于-4℃保存，于3 d内提取血液基因组DNA。非抗凝管血用于进行血脂检测，采用日立 7600全自动生化分析仪检测总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)。血脂异常：根据中国成人血脂异常诊断标准〔3〕，TC≥6.22 mmol/L为升高，TG≥2.26 mmol/L为升高，LDL-C≥4.14 mmol/L为升高，HDL-C<1.04 mmol/L为降低。

1.3DNA提取及基因分型 本研究采用天根科技(北京)有限公司生产的血液基因组DNA提取试剂盒〔TIANamp Blood DNA Kit(离心柱形),目录号DP318DNA〕，按照产品说明书所述步骤提取血液基因组DNA。将提取后的DNA分装为3管，于-20℃保存以备用。使用美国应用生物系统(ABI) 公司生产的ABI7500 Fast 实时荧光定量PCR仪以及TaqMan SNP基因分型试剂盒〔试剂盒包括2×通用PCR预混试剂Universal PCR Master mix (无AmpErase UNG酶)，40×SNP 基因分型试剂Genotyping Assay Mix〕，采用TaqMan MGB探针等位基因分型技术来对rs12425791进行基因分型。PCR反应体系的总体积为10 μl，包含：2×TaqMan Universal PCR Mix，5.00 μl；Assay-on-Demand SNP Genotyping Assay Mix(40×)，0.25 μl；无核酸H2O，3.75 μl；基因组DNA，1.00 μl。PCR的反应条件：预变性95℃10 min，变性92℃ 15 s、退火60℃ 1 min，变性以及退火程序循环43次。对基因分型实验操作采取以下措施进行质量控制：对实验的操作者施盲，使其在进行基因分型时不知道标本的病例/对照状态；每次96孔PCR反应板均要设置2个空白对照并设置3个随机重复样本作为阳性对照；而且，随机抽取5%的检测样本做盲法重复测定，检测结果一致率达100%。

1.4统计学方法 采用SPSS16.0软件进行χ2及t检验。

2 结 果

2.1HarDY-Weinberg Equilibrium(HWE)检验 rs12425791基因型在166例IS患者中的频数观察值分别为103，54，9；期望值分别为102，56，8。频数观察值和期望值差异无显著性(χ2=0.297,P=0.586)，符合HarDY-Weinberg平衡定律(P>0.05)，说明本研究应用的抽样群体适合于遗传分析。

2.2不同rs12425791基因型IS患者的血脂水平比较 由于G/G基因型患者例数较少，为便于比较，将G/G基因型与A/A基因型患者合并为(G/A+A/A)基因型组。不同rs12425791基因型IS患者的血脂水平相比较，G/G基因型患者与(G/A+A/A)基因型患者在TC、TG、LDL、HDL水平上的差异均无统计学意义(P>0.05)；不同rs12425791等位基因IS患者的血脂水平相比较，G等位基因患者与A等位基因患者在TC、TG、LDL、HDL水平上的差异也均无统计学意义(P>0.05)。见表1。

2.3不同rs12425791等位基因型IS患者血脂比较 不同rs12425791基因型IS患者的血脂异常率比较，G/G基因型患者与(G/A+A/A)基因型患者在TC、TG、LDL、HDL异常率上的差异均无统计学意义(P>0.05)；不同rs12425791等位基因IS患者的血脂异常率相比较，G等位基因患者与A等位基因患者在TC、TG、LDL、HDL异常率上的差异也均无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表1 不同rs12425791基因型、等位基因IS患者血脂比较

表2 不同rs12425791基因型、等位基因IS患者血脂异常比较〔n(%)〕

3 讨 论

rs12425791是Ikram等〔2〕的GWAS所发现与IS的关联性达到GWAS显著性水准的SNP。rs12425791是邻近NINJ2基因一个位点。NINJ2基因编码ninjurin2蛋白，ninjurin2是一种嗜同种的与基质金属蛋白酶相互作用的细胞-细胞黏附分子〔4〕，在人类骨髓、外周白细胞、肺和淋巴结中高表达。目前，NINJ2基因对IS的功能作用在很大程度上仍是不清楚的。

据报道，IS可控制的危险因素主要包括高血压、糖尿病、高脂血症等，而年龄、性别及种族则是不可控制的危险因素。高脂血症〔5〕可能是一种致炎状态，当发生局灶性循环障碍时可以介导免疫炎症反应而加重组织损伤,而调脂治疗能改善脑血管病患者的预后〔6〕。既往国内外有关易感基因遗传多态性与IS患者血脂代谢的相关性研究结果并不一致：例如，有研究报道APOE基因与脑梗死血脂异常相关联〔7，8〕，还有研究报道CD14基因多态性可能通过影响血脂水平而影响IS的发生〔9〕。但是，也有文献报道易感基因遗传多态性与IS血脂水平无关联，例如，Járomi 等〔10〕在对459例高加索卒中患者进行rs16996148，rs17321515、rs12130333基因分型和血脂测定的研究中发现，不同等位基因的脑卒中患者的TG及TC水平无统计学差异。目前，易感基因遗传多态性在IS患者血脂代谢中的作用机制目前仍是不甚清楚的。本研究显示，不同rs12425791基因型或等位基因IS患者在TC、TG、LDL、HDL水平及异常率上的差异均无统计学意义，与Járomi等〔10〕的研究结果相类似。本研究提示，rs12425791多态性可能与IS血脂代谢无关联。但是，目前有关于rs12425791多态性与IS患者血脂代谢的相关性研究还很少，有待于更多更大样本量的同类研究来丰富研究证据。

4 参考文献

1Rothwell PM，Coull AJ，Giles MF，etal.Change in stroke incidence,mortality，case-fatality，severity，and risk factors in Oxfordshire，UK from 1981 to 2004 (Oxford Vascular Study) 〔J〕.Lancet，2004；363(9425)：1925-33.

2Ikram MA，Seshadri S，Bis JC,etal.Genomewide association studies of stroke〔J〕.N Engl J Med,2009；360(17):1718-28.

3《中国成人血脂异常防治指南》制订联合委员会.中国成人血脂异常防治指南〔J〕.中华心血管病杂志，2007；35(5)：390-419.

4Zhang S，Dailey GM，Kwan E,etal.An MMP liberates the Ninjurin A ectodomain to signal a loss of cell adhesion〔J〕.Genes Dev,2006；20(14):1899-910.

5张小菊，王 荔，高建英，等.高脂血症对脑缺血再灌注大鼠脑组织中MMP- 9和COX-2表达的影响〔J〕.中国临床神经科学 ，2011；19(3)：270-5.

6王红卫，谢 明，何周文.脑血管患者血脂变化及调脂治疗对其预后的影响〔J〕.中南医学科学杂志,2011；39(2):207-9.

7马飞煜，邬 伟，王 凤，等.载脂蛋白E 基因多态性及脂类代谢与缺血性脑卒中亚型关系的研究〔J〕.中华老年心脑血管病杂志，2006；8(8):513-6.

8Havasi V，Szolnoki Z，Talián G，etal.Apolipoprotein A5 gene promoter region T-1131C polymorphism associates with elevated circulating triglyceride levels and confers susceptibility for development of ischemic stroke〔J〕.J Mol Neurosci，2006;29(2):177-83.

9韦叶生，蓝 艳，黄瑞雅，等.CD14基因启动子区多态性与缺血性脑卒中及血脂的相关分析〔J〕.中华老年心脑血管病杂志，2007；9(4)：269-72.

10Járomi L，Csöngei V，Polgár N，etal.Triglyceride level influencing functional variants of the ANGPTL3，CILP2，and TRIB1 loci in ischemic stroke〔J〕.Neuromol Med，2011;13(3):179-86.