多药耐药相关蛋白及乳腺癌耐药蛋白在食管鳞癌中的表达及意义

刘 亮 左连富 郭建文

(河北医科大学第四医院肿瘤研究所流式细胞室，河北 石家庄 050011)

食管癌临床治疗主要是以放化疗为主，尤其是化疗作为癌症晚期主要的治疗方法，已经被广大医务人员及患者所认可，但是食管癌化疗效果往往不佳，主要原因是多药耐药的产生，使化疗疗效降低。目前食管癌多药耐药机制仍未阐明，研究发现细胞跨膜蛋白与多药耐药产生密切相关，这类跨膜蛋白多为三磷酸腺苷结合(ABC)转运蛋白〔1～3〕。ABCC1〔又称多药耐药相关蛋白1(MRP1)〕和ABCG2〔又称乳腺癌耐药蛋白(BCRP)〕属ABC转运蛋白家族〔4，5〕，已有大量文献报道其与肿瘤多药耐药有关〔6～8〕，但在食管癌中的研究报道少见。本文主要研究食管癌中MRP1和BCRP表达水平，探讨其与食管癌多药耐药的关系。

1 材料与方法

1.1标本来源及一般资料 收集我院2008年1月至2009年11月食管鳞状细胞癌手术切除标本150例，所有患者术前未接受过化疗和放疗。每例标本分别取癌组织、癌旁组织(距癌边缘2～5 cm)及手术切缘正常食管黏膜(距癌边缘5 cm以上)，固定于4%多聚甲醛溶液用于免疫组织化学(IHC)检测，所有标本临床病理资料完整，全部经病理检查确诊，实验选用与HE染色一致的典型蜡块作4 μm厚的连续切片，供IHC染色备用。从中选出80例食管鳞状细胞癌、不典型增生和正常食管黏膜组织，用于IHC的检测，其中男55例，女25例，年龄38～83岁，平均(58.38±6.70)岁，中位年龄58.5岁。80例食管鳞状细胞癌，59例为高中分化鳞癌，21例为低分化鳞癌，54例侵及纤维膜，26例未达到纤维膜，27例淋巴结转移，53例未转移。

1.2主要实验仪器及试剂 BMⅡ型病理组织包埋机，安徽电子科学研究所；RM2135型石蜡切片机，德国LEICA公司；BCRP(5D3)抗体(sc-18841)，购自美国Santa Cruz公司；MRP1抗体、 DAB试剂盒、免疫组化二抗试剂盒均由北京中杉金桥生物技术有限公司生产。

1.3免疫组织化学方法检测不同食管组织中MRP1和BCRP蛋白表达 SP法：所用载玻片均经APES处理，连续切片厚4 μm，一抗分别为小鼠抗人BCRP单克隆抗体(1∶100稀释)、小鼠抗人MRP1单克隆抗体(1∶100稀释)，二抗为生物素化羊抗小鼠IgG，以0.01 mol/L PBS代替一抗作阴性对照。MRP1、BCRP蛋白表达结果判断标准：以细胞膜和(或)胞质出现棕黄色颗粒为阳性细胞。双盲法由两位病理医师对免疫组化染色标本共同评估。先在低倍镜下随机选取10个视野，然后在高倍镜下每一视野中连续计数100个细胞，记录其中阳性细胞数，计算阳性细胞百分数并取平均值。根据肿瘤细胞染色程度以及阳性细胞所占百分比进行综合评价〔9，10〕，①阳性(+)：阳性细胞数>10%；②阴性(-)：无阳性细胞或阳性细胞数≤10%。

1.4统计学分析 采用SPSS11.5软件进行χ2检验。

2 结 果

2.1食管不同病变组织MRP1 蛋白的表达 MRP1阳性产物定位于细胞膜和胞质，呈棕黄色颗粒状，弥漫或散在分布(图1)。食管鳞癌、不典型增生及正常组织中MRP1蛋白表达阳性率分别为：70.00%、33.75%、7.50%。食管癌组织中MRP1蛋白表达阳性率显著高于不典型增生及正常组织(P<0.05)。

2.2食管不同病变组织BCRP 蛋白的表达 BCRP阳性产物定位于细胞膜和胞质，呈棕黄色颗粒状，弥漫或散在分布(图2)。食管正常黏膜表达阳性率为3.75%；非典型增生组织为26.25%食管癌组织BCRP蛋白表达阳性率为86.25%。食管癌组织中BCRP蛋白表达阳性率显著高于食管不典型增生及正常黏膜(P<0.05)。

2.3食管癌组织中MRP1、BCRP表达与临床病理特征的关系 MRP1、BCRP蛋白表达量在低分化、浸润深度达到纤维膜及有淋巴结转移者中均显著高于中高分化、浸润深度未达到纤维膜及无淋巴结转移者(P<0.05)，见表1。

表1 食管鳞癌中MRP1及BCRP蛋白阳性表达与不同临床病理特征之间的关系(n)

正常组织

不典型增生

鳞癌

正常组织

不典型增生

鳞癌

3 讨 论

肿瘤耐药是临床上化疗的一重大障碍，甚至会导致化疗的失败，研究发现，肿瘤耐药的产生主要有三方面的机制，细胞跨膜蛋白起到药物外排泵的作用、抗凋亡作用增强以及一些酶解毒机制。目前药物外排泵机制与肿瘤多药耐药作用研究较多，进一步研究发现，ABC转运蛋白可以利用ATP释放的能量将细胞内化疗药物泵出细胞外，从而降低细胞内化疗药物的有效浓度，从而产生耐药〔11〕。MRP1是与肿瘤多药耐药有关的ABC蛋白，参与多种肿瘤的多药耐药的产生，与多药耐药的关系十分密切，但在食管癌中的研究较少见。BCRP是近年来发现的与肿瘤多药耐药有关的ABC蛋白〔12〕，本研究结果提示MRP1及BCRP可能参与了食管癌多药耐药的产生以及与食管癌的恶性度有关。有研究发现BCRP与肿瘤干细胞关系密切〔13～15〕，是肿瘤干细胞的标记物。“肿瘤干细胞学说”认为肿瘤干细胞可以逃逸化疗药物及机体免疫的杀伤，从而存活下来成为肿瘤复发和转移的根源。本研究的结果与此学说观点相一致，实验中观察到有淋巴结转移的食管癌组织中BCRP蛋白表达水平显著增高，可以作为判断食管癌恶性度及预后的指标从而指导临床。

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