桦褐孔菌多糖对微波辐射致大鼠免疫损伤的防护作用

孙艳美 钟秀宏 吕士杰

(吉林医药学院检验学院，吉林 吉林 132013)

微波对机体免疫功能的各方面都可造成影响,且表现明显的双向效应,适宜剂量微波短期辐射对免疫功能起到正向的调节作用,而过量微波辐射可抑制机体的免疫功能，表现为细胞免疫、体液免疫和非特异免疫功能的改变〔1〕。高强度微波辐射可产生多种生物学效应，其中免疫系统对电磁辐射较为敏感。由于免疫系统被破坏程度和恢复能力是决定伤者存活的关键，因此，寻找安全有效地增强机体免疫力的药物进行防护已成为当今微波损伤防护领域的研究热点。桦褐孔菌多糖是桦褐孔菌中主要有效成分之一，通过免疫调节在抗肿瘤、抗HIV等方面具有较好的功效〔2，3〕。本实验探讨桦褐孔菌多糖对微波辐射的防护作用。

1 材料与方法

1.1动物及分组 清洁级成年Wistar雄性大鼠18只，吉林大学白求恩医学院动物实验中心提供，许可证号SCXK-吉2008-0005，体重(200±20)g。随机分为正常对照组、微波辐射模型组、微波辐射加药物预防组，每组6只。各组大鼠同一种饲料平行饲养，适应性喂养1 w后进行动物实验。

1.2药物 桦褐孔菌精制多糖(纯度98%)由河南大学药学院赵芬琴博士制备并鉴定。

1.3仪器及试剂 微波辐射装置为雷达发射机改装的大功率脉冲微波辐射发射源(吉林医药学院微波辐射研究重点实验室提供)；数码生物显微镜(BA300型，中国麦克奥迪实业集团有限公司)；轮转式切片机(RM2126型，上海徕卡仪器有限公司)；全自动组织包埋机(ZMN-7803型，常州市华利电子有限公司)。大鼠免疫球蛋白-G(IgG)试剂盒(ADRDIAGNOSTICS公司)。

1.4动物模型制备〔4，5〕及给药方法 微波辐射源为雷达发射机改装的大功率脉冲微波辐射装置,出口天线为矩形喇叭天线,峰值功率2兆瓦，辐射强度200 mW/cm2，辐射时间6 min。将大鼠置于辐射源的正下方,辐射参考点为大鼠背部体表,电磁波电场方向与大鼠的长轴平行。正常对照组、微波辐射模型组给予蒸馏水灌胃，每次2 ml，1次/d，药物预防组给予桦褐孔菌多糖溶液(按400 mg/kg体质量)灌胃〔6〕，每次2 ml，1次/d，持续10 d。第10天,微波辐射模型组和药物预防组接受相同功率和时间的辐射。辐射时环境温度为(24±0.5)℃，相对湿度为74%±1%。正常对照组不做任何处理，其他环境条件与实验组一致。末次灌胃后禁食不禁水，18 h后(即第11 天)处死所有实验动物。

1.5检测指标

1.5.1脾标本制备和观察 常规固定、包埋、切片、苏木精-伊红(HE)染色，然后光镜下观察。

1.5.2巨噬细胞吞噬功能的测定 实验前1 d每只动物注射10 g/L的淀粉生理盐水溶液2 ml以刺激巨噬细胞渗出。实验当天每只动物腹腔注射2%鸡红细胞悬液，30 min后处死动物，固定于解剖板上，腹部消毒后，在腹部中央剪一小口取小鼠腹腔液(内含腹腔巨噬细胞)涂片,自然干燥，瑞氏-姬姆萨染液染色后，计数200个巨噬细胞吞噬鸡红细胞数,并计算吞噬百分率、吞噬指数。吞噬率=吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/200×100%;吞噬指数=200个巨噬细胞吞噬鸡红细胞的总数/200。

1.5.3IgG含量的测定 所有动物处置前,股动脉放血法采血5 ml,置于试管中,不抗凝,室温下静置1 h,2 000 r/min离心5 min,分离血清，-20℃冰箱保存。采用免疫浊度法,用免疫球蛋白试剂盒在全自动生化分析仪上测定IgG含量。

2 结 果

2.1各组大鼠脾脏的组织学改变 正常对照组脾脏被膜完整，生发中心、边缘区、红白髓交界区未见异常，脾中央动脉呈圆形，无增生、萎缩及玻璃样变性。微波辐射模型组与正常对照组比较，白髓红髓结构紊乱，可见较多坏死淋巴细胞，伴有炎细胞浸润；白髓中B细胞减少，动脉周围T淋巴细胞减少，淋巴细胞核固缩、崩解，红髓中脾索内B细胞减少，巨噬细胞增多,脾窦扩张，瘀血明显，脾脏脾小体体积缩小,生发中心不明显。药物预防组与微波辐射模型组比较，白髓红髓结构尚清楚，淋巴细胞较多，但仍有少许凋亡的淋巴细胞，脾窦轻度扩张、瘀血。见图1。

正常对照组 微波辐射模型组 药物预防组

2.2巨噬细胞吞噬功能的测定 与正常对照组相比，微波辐射模型组吞噬百分率和吞噬指数明显降低(P<0.05)，药物预防组大鼠吞噬百分率和吞噬指数比微波辐射模型组明显升高(P<0.05)。见表1。

表1 各组大鼠巨噬细胞吞噬功能的测定

2.3IgG含量的测定 微波辐射可显著降低大鼠血清中IgG的含量〔(12.89±1.43) vs (19.56±2.96)mg/L〕(P<0.05)，药物预防组IgG含量〔(16.92±2.65)mg/L〕比微波辐射模型组明显升高(P<0.05)。

3 讨 论

免疫系统是人体最重要的防御系统，是机体防卫有害物质入侵最有效的武器。脾脏是机体最大的外周免疫器官，是B、T淋巴细胞的主要居所，也是发生免疫应答的主要场所。脾形态结构的改变势必会影响免疫系统的正常功能。免疫功能的发挥与免疫细胞的功能密不可分,单核巨噬细胞是机体重要的免疫细胞，外来抗原进入机体后，先由巨噬细胞吞噬、消化并与自身MHC Ⅱ类分子结合,作为活化T细胞的重要信号,促进T、B细胞增殖，从而在机体的特异性细胞免疫及体液免疫中起重要作用。

本研究发现，微波辐射可造成大鼠脾脏白髓和红髓结构紊乱，淋巴细胞坏死和凋亡，腹腔巨噬细胞吞噬百分率和吞噬指数明显降低，血清中IgG的含量也减少，说明短期高功率微波辐射可引起脾脏结构和功能受损。而免疫功能异常可导致多种疾病的发生，因此寻找一种安全有效的抗辐射药物在当今尤为重要。

桦褐孔菌对免疫器官损伤防护方面起到很好的防护作用，因此被誉为“免疫之王〔7，8〕”。桦褐孔菌多糖是桦褐孔菌中主要的有效成分之一，国内外研究已证实，桦褐孔菌多糖进入机体后经代谢又可成为机体的营养物质，具有无毒、无蓄积作用〔2〕。本实验说明桦褐孔菌多糖能提高机体的体液免疫水平和非特异性免疫能力，对微波辐射致机体的免疫功能损伤有一定的防护作用，可以作为一种新的抗辐射药物加以利用。

4 参考文献

1张文辉，孙 侠，牛玉杰，等.微波辐射对小鼠免疫功能影响〔J〕.中国公共卫生，2006;22(2)：201-3.

2Zhong XH，Ren K,Lu SJ，etal.Progress of research on Inonotus Obliquus〔J〕.Chin J Integr Med，2009;15(2): 156-60.

3崔 涛，钟秀宏，杨淑艳，等.桦褐孔菌的不同提取物对胃癌BGC-823细胞株生长抑制作用的体外观察〔J〕.中国老年学杂志，2012；32(20)：4442-3.

4田志杰,沈 楠,吕士杰，等.黑木耳多糖对高强度微波辐射大鼠血清超氧化物歧化酶和肝脏脂质过氧化的影响〔J〕.时珍国医国药，2009;20(12)：3011-3.

5朱辛为，田洪艳，徐 冶，等.黑木耳多糖对高功率微波辐射大鼠卵巢和子宫形态结构的影响〔J〕.中国妇幼保健，2012;27(5)：735-6.

6陈 辉，钟秀宏，杨森林，等.桦褐孔菌多糖对急性酒精性肝损伤模型大鼠的保护作用研究〔J〕.中国药房，2013;24(27)：2510-1.

7张泽生,杨超慧,史 珅,等.桦褐孔菌多糖对小鼠免疫调节作用的影响〔J〕.食品研究与开发，2008;29(7)：35-7.

8王 伟,景少巍,张庆镐.桦褐孔菌多糖对小鼠免疫功能的影响〔J〕.时珍国医国药， 2008;19(7)：1739.