缪刺对脑缺血大鼠细胞凋亡相关蛋白c-fos、p53表达的影响

李雪青 石志敏

(河北联合大学中医学院，河北 唐山 063000)

在即刻早期反应基因(IEGs，即早基因)中研究较多的有原癌基因c-fos和e-jun它是一类对外界刺激信号传入数分钟内即作出反应并进行表达的基因〔1〕。脑缺血时间、缺血模型、鼠的种类及检测所用的试剂等因素有关都可能使脑缺血后c-fos表达出现差异。目前缺血神经元死亡机制中的一个关键性环节就是p53及其相关基因在脑缺血中的表达调控。本研究观察缪刺对细胞凋亡相关蛋白c-fos、p53的影响。

1 资料与方法

1.1动物分组 雄性Wistar大鼠80只,随机分成模型对照组、普通针刺组、缪刺组、普通针刺和缪刺联合组,每组20只。

1.2右侧大脑中动脉阻塞模型制作 参照文献〔2〕采用改良方法将 Wistar大鼠制备为MCAO模型。

1.3针刺选穴与操作 模型对照组:不予治疗,每天同样抓取1 次,不做其他处理。普通针刺组:根据华兴邦等研制的大鼠穴位图谱选取穴位：合谷、内关、委中、三阴交针具:30 号 1 寸毫针(华佗牌,苏州针灸器械厂) 操作方法：先在施针处常规消毒,然后持针依次在大鼠左侧肢体上(患侧)针刺以上四穴为了保证刺激强度的稳定,采用电针的方法,直刺进针5 mm,针柄连接于电针治疗仪的电极上,频率2 Hz,电压一般3～5 V,电流1～2 mA,疏密波,1次/d,30 min/次。缪刺组操作同上,选穴在大鼠右侧肢体(健侧)，联合组:操作同上,双侧肢体同时选穴(健侧、患侧同时)，首次针刺造模术后 6 h开始,治疗各组疗程分别为 1、3、5、10、15 d;1次/d。

1.4缪刺对MCAO模型大鼠脑组织蛋白c-fos、p53表达的影响 步骤：①载玻片防脱片剂处理；②脑组织固定、脱水、透明、包埋及切片；③将切片置于经防脱片剂处理过的载玻片上，保存，备用；④石蜡切片脱蜡水化→显色剂DAB显色→显微镜观察;⑤终止反应→复染→冲洗返蓝→脱水→封片观察；⑥结果:胞核或胞质棕黄色为阳性细胞。⑦图像分析:400倍光镜下，计数阳性细胞，观察5个高倍视野，计数每100个细胞中染色的细胞数；⑧取8组数据求其平均值进行组间比较。

1.5统计学方法 采用SPSS11.5统计软件进行t检验。

2 结 果

2.1缪刺对MCAO模型大鼠大脑皮质c-fos蛋白表达的影响 见表1。普通针刺组、缪刺组、联合组分别与模型对照组比较其中在24 h及48 h时间点普通针刺组、缪刺组、联合组c-fos蛋白表达均有不同程度的降低(P<0.05)。在72 h时间点联合组及缪刺组c-fos蛋白表达较模型对照组降低(P<0.05)。

表1 缪刺对MCAO模型大鼠大脑皮质c-fos蛋白表达的影响

2.2缪刺对MCAO模型大鼠大脑皮质p53蛋白表达的影响 与模型对照组比较，在24 h及48 h时间点普通针刺组、缪刺组、联合组p53蛋白表达均有降低(P<0.05)。在72 h时间点联合组及缪刺组p53蛋白表达较模型对照组降低(P<0.05)。见表2。

表2 缪刺对MCAO模型大鼠大脑皮质p53蛋白表达的影响

3 讨 论

缪刺法是《黄帝内经》针对络病提出的一种针刺方法，疗效肯定所谓“缪”是“荒缪、错误”的含义。即在针刺治疗过程中“左病取右，右病取左”，《素问·缪刺论》“夫邪客大络者，左注右，右注左，上下左右与经相干，而布于四末，其气无常处，不入于经俞，命曰缪刺。”指出：邪气侵入大络后，在左边流窜到右边，在右边流窜到左边，或上或下，或左或右，但只是影响到络脉而不能进入经脉之中，从而随络脉流布到身体四肢部；邪气流窜没有固定地方，也不能进入经脉腧穴，所以病气在右而症状见于左，病气在左而症状见于右，必须右痛刺左，左痛刺右，才能中邪，这种刺法叫做“缪刺”。由于缪刺是刺其络，因此在临床上常取各有关的经脉在四肢端的井穴(四末为阴阳之大络)及皮肤部出现郁血的络脉。本实验结果表明，缪刺能降低c-fos蛋白的表达，对脑缺血损伤产生适应性变化，增强脑组织的修复能力，说明缪刺能有效抑制脑缺血后p53的表达，从而抑制细胞凋亡，从而达对脑组织的保护作用。

4 参考文献

1袁琼兰.即早基因c-fos在脑缺血中的作用及研究进展〔J〕.沪州医学院学报，2001；24(3):261-3.

2徐 凌.PKB/Akt及其生理作用的研究进展〔J〕.国外医学·流行病学传染病学分册，2003；30(4):233-6.