奈韦拉平／齐多夫定／拉米夫定复方片剂的处方工艺及质量研究

刘哲鹏，潘 风，施与群

［1.上海理工大学医疗器械与食品学院药物制剂（设备与工艺）研究所，上海200093；2.上海美优制药有限公司产品开发部，上海201423］

［本文编辑］兰 芬

单用一种药物治疗艾滋病容易产生耐药性，组合药物治疗（又称鸡尾酒疗法）的疗效明显优于单药治疗，并且可以延缓耐药性的产生。研究发现，与单药治疗相比，鸡尾酒疗法使艾滋病患者的死亡率降低逾80%，已成为标准的艾滋病治疗方案［1］。鸡尾酒疗法同时使用3～4种药物，针对艾滋病毒繁殖周期的不同环节，全面抑制或杀灭艾滋病毒。经鸡尾酒疗法治疗后，部分患者体内的艾滋病毒可长期保持在检测限以下。基于鸡尾酒疗法策略开发的抗艾滋病复方制剂一般包括逆转录酶抑制剂和蛋白酶抑制剂。目前国内已上市的艾滋病治疗药物多为单方或双复方制剂，存在耐药性、患者用药依从性差等问题，临床迫切需要疗效确切、不易产生耐药性的抗艾滋病复方制剂，但目前国内尚未生产采用鸡尾酒疗法的复方制剂。作者所在的课题组研发了由奈韦拉平、齐多夫定和拉米夫定组成的抗艾滋病复方片剂，这3种药物均为WHO推荐的艾滋病组合治疗药物［2－4］。由于复方片剂的3种主药理化性质各不相同，因此工艺开发难度较大，特别是药物溶出不合格、有关物质来源复杂且含量超标、药物含量均匀度不合格等问题，均会影响产品质量［5，6］。本研究对奈韦拉平／齐多夫定／拉米夫定复方片剂的处方工艺进行筛选、优化，得到最优处方，并考察了样品的稳定性，最终确立了可以进行生产的处方工艺条件。本研究为国内企业生产该药提供了部分依据。

1 仪器和试药

1.1 仪器 Dionex P680型HPLC仪（美国戴安公司）；GL－5型干法制粒机（浙江明天机械有限公司）；RCZ－6CZ型药物溶出度仪、LB－2D智能崩解实时测定仪、YPJ－200B片剂硬度计（上海黄海药检仪器有限公司）；FT－2000片剂脆碎度检查仪（天大天发科技有限公司）；低温光照仪（药物制剂国家工程研究中心）；GSP－9050MBE型隔水式恒温培养箱（上海博讯实业有限公司医疗设备厂）；BPS－250C恒温恒湿箱（上海一恒科技有限公司）；Welchrom－C18色谱柱（月旭材料科技有限公司）；BS 224S万分之一电子分析天平（德国Satorious公司）。

1.2 药品和试剂 奈韦拉平原料药（含量99.7%，批号C5021－10－027，浙江华海药业股份有限公司）；齐多夫定原料药（含量99.6%，批号1103001，上海现代制药股份有限公司）；拉米夫定原料药（含量99.6%，批号LZ01100601，浙江永宁药业股份有限公司）。奈韦拉平对照品（批号100641－200401）、齐多夫定对照品（批号100672－200401，中国食品药品检定研究院）；拉米夫定对照品（含量99.7%，批号1356836，美国药典委员会提供）。微晶纤维素（德国瑞登梅尔公司）；乳糖（德国美剂乐集团）；预胶化淀粉（Starch 1500，上海卡乐康包衣技术有限公司）；羧甲基淀粉钠（永日化学工业股份有限公司）；聚乙烯吡咯烷酮（PVP－K30，美国国际特品公司）；交联聚维酮（PVPP，德国BASF公司）；交联羧甲基纤维素钠（安徽山河药用辅料有限公司）；甲基纤维素（浙江海申化工有限公司）；微粉硅胶（上海昌为医药辅料技术有限公司）；硬脂酸镁（海盐六和淀粉化工有限公司）；聚乙二醇（PEG）6000（上海市高南化工厂）。乙酸钠、冰乙酸、氢氧化钠等其他试剂均为分析纯（上海国药集团化学试剂有限公司）。奈韦拉平／齐多夫定／拉米夫定复方片剂［每片含奈韦拉平、齐多夫定、拉米夫定分别为200、300、150mg，批号111101、111102、111103，上海理工大学医疗器械与食品学院药物制剂（设备与工艺）研究所自制］。

2 方法和结果

2.1 溶液的配制（1）试剂溶液 pH 1盐酸溶液：取浓盐酸9ml，加水稀释至1000ml，即得。pH 4.5乙酸盐缓冲液：取乙酸钠2.99g、冰乙酸1.6ml，加水稀释至1000ml，即得。pH 6.8磷酸盐缓冲液：取0.2mol／L磷酸二氢钾溶液250ml，0.2mol／L氢氧化钠溶液118ml，加水稀释至1000ml，即得。流动相A：0.05mol／L乙酸铵溶液［用乙酸调节pH值（3.0±0.1）］与甲醇按95∶5比例配制即得。（2）药物对照品溶液 精密称取奈韦拉平对照品50.0mg、齐多夫定对照品75.0mg、拉米夫定对照品37.5mg，置100ml容量瓶中，加入20ml甲醇和60ml流动相A，超声溶解，放冷至室温，用流动相A稀释至刻度，摇匀。精密量取10ml，置25ml容量瓶中，用流动相A稀释至刻度，得到对照品溶液。（3）样品溶液 取奈韦拉平／齐多夫定／拉米夫定复方片剂粉末适量（约含奈韦拉平50mg、齐多夫定75mg、拉米夫定37.5mg），置100ml容量瓶中，余同（2）药物对照品溶液操作。过滤，取续滤液10ml，置25ml容量瓶中，用流动相A稀释至刻度，作为样品溶液。制备不含3种主药的片剂作为阴性对照样品，同法制备得到阴性对照样品溶液。（4）用于有关物质含量测定的供试品溶液 将复方片剂5片磨成细粉，取细粉约100mg（相当于含奈韦拉平26mg、齐多夫定39mg、拉米夫定19.5mg），置50ml容量瓶中，加5ml甲醇和适量流动相A，强力振摇2min，超声5min，放冷，再用流动相A稀释至刻度，摇匀，滤过，得到用于有关物质含量测定的供试品溶液。（5）用于有关物质含量测定的对照品溶液 精密量取1ml用于有关物质含量测定的供试品溶液，置100ml容量瓶中，加流动相A稀释至刻度，摇匀，滤过，得到用于有关物质含量测定的对照品溶液。

2.2 含量测定及有关物质检查（1）色谱条件：Welchrom－C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）；采用梯度洗脱，流动相A按2.1项（1）下方法配制，流动相 B为甲醇，0～15min，A 相100%，15～65min，A 相 100% →60%，65～70min，A 相60%→0%，70～75min，A 相0%→100%，75～80min，A 相100%。流速1.0ml／min；检测波长277nm；进样量20μl。（2）系统适应性实验：取2.1项的阴性对照样品溶液、药物对照品溶液和样品溶液分别进样测定，得到色谱图见图1。理论塔板数按奈韦拉平、齐多夫定、拉米夫定峰计均≥2000，主峰与相邻杂质峰的分离度＞1.5。该色谱条件下，片剂中各辅料对3种主药检测无干扰，峰形良好，拉米夫定、齐多夫定、奈韦拉平保留时间分别约为14、34、48min。（3）含量测定方法考察：奈韦拉平浓度在57.2～472.8μg／ml、齐多夫定浓度在101.2～586.3μg／ml、拉米夫定浓度在86.5～397.4μg／ml范围内与峰面积呈良好线性关系，日内和日间RSD均＜0.5%，相对回收率为97.3%～102.2%（见表1）。（4）药物含量测定：分别量取2.1项的样品溶液和对照品溶液20μl，按上述色谱条件进样测定，用外标法计算奈韦拉平、齐多夫定和拉米夫定的含量。（5）有关物质含量测定：分别量取2.1项（4）、（5）用于有关物质含量测定的供试品溶液和对照品溶液20μl，按上述色谱条件进样测定。测量供试品溶液色谱图中杂质峰峰面积之和（扣除系统溶剂峰和辅料峰），将其与对照品溶液峰面积比较，采用主成分自身对照法计算得到有关物质含量。

图1 奈韦拉平／齐多夫定／拉米夫定复方片剂的HPLC谱图Figure 1 HPLC photograms of compound nevirapine－zidovudine－lamivudine tablets

表1 含量测定方法学考察结果Table 1 The results of methodology investigation of content determination

2.3 溶出度测定 取复方片剂6份，按《中华人民共和国药典》2010年版一部附录ⅩC第二法检测药片在不同溶出介质中的溶出曲线。分别以1000ml的pH 1盐酸溶液、水、pH 4.5乙酸盐缓冲液和pH 6.8磷酸盐缓冲液为溶出介质，转速75r／min，分别于0、5、10、15、30、45min取溶出液10ml，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液20μl，按2.2项色谱条件进样测定。取奈韦拉平对照品20.0mg、齐多夫定对照品30.0mg、拉米夫定对照品15.0mg，置100ml容量瓶中，加相应的溶出介质适量，强力振摇2min，超声5min，放冷，再用溶出介质稀释至刻度，摇匀，同法滤过，测定峰面积。按外标法以峰面积计算各取样时间点奈韦拉平、齐多夫定、拉米夫定的溶出量，绘制溶出曲线。

2.4 休止角和崩解时限测定 按文献［7］的方法测定压片所用粉末的休止角，以评价流动性。按《中华人民共和国药典》2010年版一部附录ⅩA的方法，取复方片剂6片分别置吊篮的玻璃管中，启动崩解仪，测定片剂的崩解时限。

2.5 脆碎度和硬度测定 按《中华人民共和国药典》2010年版一部附录ⅩG的方法，取复方片剂10片，精密称重后置于脆碎度检查仪圆筒中，转动100次。取出，除去粉末，精密称重，根据减失重量计算片剂的脆碎度。用硬度计测定片剂的硬度。

2.6 复方片剂的制备

2.6.1 根据影响因素实验筛选辅料 取奈韦拉平、齐多夫定、拉米夫定原料药，分别与微晶纤维素、乳糖、预胶化淀粉、甲基纤维素、羧甲基淀粉钠、交联羧甲基纤维素钠、交联聚维酮、PVP－K30、硬脂酸镁、微粉硅胶、PEG 6000等辅料两两混匀，将粉末直接压制成片后分别放置在60℃隔水式恒温培养箱、低温光照仪和内置有饱和硝酸钾溶液的干燥器内进行高温（60℃）、强光照射（光照强度为4500lx）和高湿（25℃，相对湿度90%）影响因素实验。分别于0、5、10d取样，按2.1项（5）的主成分自身对照法测定有关物质含量的变化，结果见表2。另取奈韦拉平、齐多夫定、拉米夫定原料药，按1∶1∶1混匀，将粉末直接压制成片剂，进行高温、高湿和强光照射影响因素实验以测定原料药的相容性。

影响因素实验发现，齐多夫定与各辅料在强光照射下，以及与微晶纤维素、交联聚维酮在高湿条件下有关物质含量上升较快。拉米夫定与PVP－K30、交联聚维酮在高温、高湿条件下有关物质含量上升较快。因此初步确定制剂工艺应在避光条件下进行，填充剂避免使用微晶纤维素，黏合剂避免使用PVP－K30，崩解剂避免使用交联聚维酮。确定复方片剂的填充剂使用乳糖和预胶化淀粉，黏合剂使用甲基纤维素，崩解剂使用羧甲基淀粉钠和交联羧甲基纤维素钠，润滑剂使用硬脂酸镁、微粉硅胶和PEG 6000。

2.6.2 片剂的制备及性质考察 将奈韦拉平、齐多夫定、拉米夫定原料药和辅料分别过80目筛，按表3中的处方配比混合均匀。用干法制粒机制粒，进料转速12Hz，滚轮转速14Hz，主轮压力14kPa，侧封压力14kPa，颗粒经20目筛网整粒后压片，即得白色的复方片剂。在制备颗粒和压片过程中拉上窗帘，关闭室内日光灯，制片的环境相对湿度控制在≤60%。测定各处方组成制备的颗粒的休止角，片剂的硬度、脆碎度、崩解时限、有关物质及药物含量，结果见表4。测定不同处方组成的片剂在不同溶出介质中的溶出曲线，见图2。

表2 不同辅料对影响因素实验中有关物质含量的影响Table 2 Effects of various excipients on contents of related substances in influencing factor tests（%）

表3 奈韦拉平／齐多夫定／拉米夫定复方片剂的处方设计Table 3 Formula design of compound nevirapine－zidovudine－lamivudine tablets

由表4可见，各处方组成的颗粒流动性均较好，片剂崩解时限≤15min，硬度、脆碎度及有关物质含量等质量指标较好。但是由图2可见，不同处方组成的片剂在不同溶出介质中的溶出曲线有较大差异。处方5和6中的药物在各溶出介质中溶出度均较好，30min内各主药溶出度＞80%。相比较而言，按处方6制备的片剂硬度和脆碎度综合评价较好，因此确定以处方6作为最优处方。

表4 不同处方组成片剂的性质考察Table 4 Properties of tablets with different formulae

图2 不同处方制备的奈韦拉平／齐多夫定／拉米夫定复方片剂在不同溶出介质中的溶出曲线Figure 2 Dissolution curves of compound nevirapine－zidovudine－lamivudine tablets prepared based on different formulae in different dissolvants

2.7 片剂的试制及稳定性实验结果 按处方6和2.6.2项方法制备奈韦拉平／齐多夫定／拉米夫定复方片剂3批，进行影响因素实验，结果见表5。片剂经铝塑包装后，进行加速实验考察［温度（40±2）℃，相对湿度75%］。结果发现，3批样品经过6个月的加速实验，其性状、药物含量、有关物质含量等质量指标未见显著变化，因此确定处方6制备的片剂各项指标合格，稳定性良好。

表5 按处方6制备的片剂的影响因素实验结果Table 6 Results of influencing factor tests of tablets prepared based on formula 6（%）

3 讨 论

筛选片剂的处方组成，首先应根据原辅料的相容性研究结果选择适宜的辅料。各辅料的配比和用量除了与颗粒流动性、片剂的硬度、脆碎度、崩解时限等质量指标紧密联系之外，还影响药物在溶出介质中的溶出度。在处方筛选过程中，比较药物在多种溶出介质中的溶出曲线是非常重要的考察项目。对于溶解度受pH值影响大、低溶解性的药物，处方组成对药物的溶出度影响较大。奈韦拉平属于低溶解性药物，不同处方组成片剂中的奈韦拉平溶出度差异较大。PEG 6000在处方中既作润滑剂，又因其亲水性而加快水分对片剂的湿润，可以显著增加奈韦拉平的溶出度。复方片剂的成分比较复杂，作者在筛选处方前考察了原料药与辅料在高湿、高温、强光照射等条件下的稳定性，从而选择了合适的辅料，采用干法制粒技术，制备了质量稳定的奈韦拉平／齐多夫定／拉米夫定复方片剂，值得进一步开发。

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