白藜芦醇对大鼠脊髓缺血再灌注损伤组织的保护作用

刘 辉

河南焦作市中站区人民医院骨科 焦作 454191

脊髓组织发生缺血，经处理恢复血流后损伤反而加重的现象称为脊髓缺血再灌注损伤，可能与血流恢复后脊髓组织的氧自由基过剩、细胞凋亡加重等有关［1］。本研究探讨脊髓缺血再灌注损伤的发病机制及防治途径，采用大鼠脊髓缺血再灌注损伤模型观察白藜芦醇造模前给药的效果。

1 材料与方法

1.1 研究对象 48只清洁级健康Wistar大鼠，雌雄各半，体质量240～320g，由河南省实验动物中心提供，许可证号SCXK（豫）2012-0001。

1.2 药品与试剂 白藜芦醇购自美国Sigma公司；超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）及考马斯亮蓝试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。

1.3 动物分组及给药方法 48只大鼠随机均分为假手术组、缺血再灌注损伤模型组、白藜芦醇高剂量组和白藜芦醇低剂量组，每组12只，造模前各组进行相应处理：白藜芦醇高剂量组和低剂量组大鼠于造模前分别给予白藜芦醇40 mg／kg＋0.85%的NaCl溶液和20mg／kg＋0.85%的NaCl溶液，每只大鼠给药量10mL／kg，连用7d；假手术组和缺血再灌注损伤模型组大鼠术前均给予同体积质量分数0.85%的NaCl溶液，连用7d。

1.4 模型制备 参考文献［2］改良的腹主动脉缺血法制备脊髓缺血再灌注损伤模型，缺血45min，再灌注8h后终止实验，其中假手术组仅行腹主动脉分离术，而未行结扎手术，麻醉后处死大鼠，取第3～5腰椎处的脊髓组织，置于-80℃冰箱中待测。

1.5 生化指标检测 将冰箱中待测标本取出，用0.85%NaCl溶液制成组织匀浆，4℃以4 000r／min离心10min，取上清液，采用考马斯亮蓝法检测总蛋白量，采用嘌呤氧化酶法检测SOD水平，采用硫代戊巴比妥法检测MDA水平。

1.6 统计学处理 采用SPSS 10.0进行数据分析与处理，各组SOD、MDA水平比较采用单因素方差分析和LSD-t检验，检验水准α＝0.05。

2 结果

白藜芦醇高剂量和低剂量组大鼠脊髓组织中SOD水平均高于缺血再灌注损伤模型组，而MDA水平均低于缺血再灌注损伤模型组（P＜0.05）。白藜芦醇高剂量组和低剂量组脊髓组织中SOD、MDA水平比较差异均有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 各组大鼠脊髓组织中SOD、MDA水平比较 （±s）

表1 各组大鼠脊髓组织中SOD、MDA水平比较 （±s）

注：与假手术组比较，△P＜0.05；与缺血再灌注损伤模型组比较，＊P＜0.05；与白藜芦醇高剂量组比较，＃P＜0.05

组别 n SOD（U／mg） MDA（nmol／mg）假手术组12 128.45±23.83 1.207±0.120缺血再灌注损伤模型组 12 44.92±14.09△ 3.427±0.598△白藜芦醇高剂量组 12 89.76±17.62＊ 1.769±0.408＊白藜芦醇低剂量组 12 65.74±10.66＊＃ 2.183±0.524＊＃F 值53.804 29.531 P值 ＜0.001 ＜0.001

3 讨论

脊椎部位的手术及脊柱骨折、脊髓供血血管病变、腹主动脉病变等均可能出现脊髓缺血再灌注损伤。研究表明［1］，脊髓缺血再灌注损伤的发病与机体因缺血而出现的氧自由基过剩、细胞凋亡、能量代谢障碍及钙离子超载等关系密切。本研究为进一步探讨脊髓缺血再灌注损伤的氧自由基理论，利用改良的大鼠脊髓缺血再灌注损伤模型，观察白藜芦醇造模前干预与否对模型脊髓组织SOD、MDA的影响。SOD是一种氧自由基清除剂，其水平及活性的高低反映机体抗氧化能力；MDA是氧自由基攻击不饱和脂肪酸过程中产生的一种脂质过氧化产物，其水平高低不但反映脂质过氧化程度，而且能破坏细胞膜或线粒体膜等生物膜类，对机体造成损伤［3］。白藜芦醇是一种多酚类化合物，已被证实具有抗氧化、清除自由基、抗凝、抗炎等生物学功能，抗衰老、对抗骨质疏松、提高免疫力、对抗老年痴呆以及多种组织的缺血再灌注损伤等均有一定价值［3-4］。另外，本研究模型制备过程中选择再灌注8h时检测数据，是因有研究［3］证实，再灌注8h是损伤最明显的时间。本文结果显示，白藜芦醇高剂量和低剂量组大鼠脊髓组织中SOD水平均高于缺血再灌注损伤模型组，而MDA水平均低于缺血再灌注损伤模型组；且白藜芦醇高剂量组和低剂量组脊髓组织中SOD、MDA水平存在显著差异，提示白藜芦醇对脊髓缺血再灌注损伤组织具有抗氧化作用，可能通过该途径减轻脊髓组织缺血再灌注损伤，而且这种作用可能与白藜芦醇的剂量有关，而关于其具体作用机制及是否有剂量依赖性尚需进一步研究证实。

［1］孟春阳，尹飞，郭丽，等.银杏叶对大鼠脊髓缺血再灌注损伤保护作用的实验研究［J］.中国实验诊断学，2010，14（6）：812-814.

［2］肖博晗，陈强，杨东旭，等.脊髓缺血再灌注损伤模型改进的研究［J］.中国实验诊断学，2009，13（6）：747-749.

［3］李霞，孙慧萍，李冬梅，等.白藜芦醇对大鼠脑缺血再灌注损伤SOD和MDA的影响［J］.现代中药研究与实践，2014，28（1）：28-30.

［4］Singh N，Agrawal M，DoréS.Neuroprotective properties and mechanisms of resveratrol in in vitro and in vivo experimental cerebral stroke models［J］.ACS Chem Neurosci，2013，4（8）：1 151-1 162.

［5］徐贵森，刘合年，杨淑霞，等.缺血再灌注脊髓丙二醛含量和超氧化物歧化酶活性的变化［J］.西南军医，2006，8（2）：10-11.