土鳖虫酶解物镇痛作用的研究*

丁志军 张后富 罗美兰#

（1江西省皮肤病专科医院药剂科 南昌330001；2江西省中医药研究院 南昌330046）

土鳖虫（Eupolyphaga sinensis Walker）为鳖蠊科昆虫地鳖雌虫的干燥体，主产于湖南、湖北和安徽等地，是我国传统的名贵药材，药用历史悠久，应用范围广泛，具有破血逐瘀，续筋接骨的功效。本品在我院临床上以土鳖虫打粉用温开水泡服用于治疗带状疱疹（蛇串疮）、水痘、单纯性疱疹（热疮）及带状疱疹的后遗神经痛等疾病，疗效确切。依据土鳖虫为昆虫类中药，其蛋白质经口服进入胃可被胃蛋白酶酶解为多肽，以及多肽的良好水溶性，我们制备了土鳖虫酶解提取物样品，送军事医学科学院毒物药物研究所进行了镇痛活性的研究，为将其进一步开发成新药提供试验依据。

1 材料

1.1 动物 KM种小鼠，SPF级，雌雄兼用，体质量（20±2）g；SD大鼠，SPF级，雌雄兼用，体质量（200±20）g，均由军事医学科学院试验动物中心提供，实验设施合格证号为SCXK-（军）2007-004，总后卫生部。

1.2 药品与试剂 土鳖虫，雌性，购自安徽省亳州市中成药公司。胃蛋白酶（国药集团化学试剂有限公司产品，批号F20061108）；碳酸氢钠（上海虹光化工厂有限公司）；吗啡（青海制药厂有限公司）；阿司匹林（南京制药厂有限公司）；戊巴比妥钠（上海新亚药业有限公司）；加巴喷丁（江苏恒瑞医药股份有限公司）。

1.3 仪器 万能粉碎机（江阴市康和机械制造有限公司）；离心机（江苏华大离心机股份有限公司）；BS224S电子天平（万分之一）（德国SARTORIUS）。

2 方法与结果

2.1 酶解提取物样品的制备 土鳖虫虫体经过万能粉碎机粉碎，过40目筛，称取80 g粉碎后的粉末，混悬于1.5 L纯化水中，加入1.5 L模拟胃液（取3.0 g NaCl、10.5 mL浓盐酸，加入约1.2 L纯化水中搅匀后，继续加入4.8 g胃蛋白酶，加纯化水定容至1.5 L，搅匀，即得。），37℃振荡培养（200 r/min）4 h，抽滤，固体NaHCO3调pH值至7.0左右，5 000 r/min离心15 min，取上清液，经膜过滤器浓缩至约600 mL，微波干燥（50 ℃、-0.07 MPa），干膏产率约为25%，干膏粉代号为XCAV706-B-0。

2.2 对醋酸所致小鼠扭体模型的影响[1]取KM种小鼠80只，随机分为空白对照组、吗啡阳性对照组、阿司匹林阳性对照组、土鳖虫酶解提取物超高、高、中、低剂量组共7组，每组10只。土鳖虫酶解提取物超高、高、中、低剂量组分别灌胃给药160 mg/kg、40 mg/kg、20 mg/kg、10 mg/kg，阳性对照组分别皮下注射吗啡2.5 mg/kg、腹腔注射阿司匹林150 mg/kg，空白对照组给口服同体积生理盐水，给药30 min后再给小鼠腹腔注射0.6%醋酸（0.4 mL/20 g体重），致使小鼠产生“扭体”反应；注射醋酸5min后，记录15min内小鼠的“扭体”次数，计算各组小鼠的扭体抑制率，并与盐水对照组进行比较。结果见表1。扭体抑制率=（对照组平均扭体次数-用药组平均扭体次数）/对照组平均扭体次数×100%。

表1 土鳖粉酶解提取物对醋酸所致小鼠扭体的影响 （±S）

表1 土鳖粉酶解提取物对醋酸所致小鼠扭体的影响 （±S）

注：与空白对照组比较，＊P＜0.01，土鳖虫酶解提取物超高、高、中剂量组能显著降低醋酸所致小鼠扭体反应次数（P＜0.01），并与剂量呈一定的依赖关系。

药物 n 剂量（mg/kg） 扭体次数（次） 抑制率（%）空白对照组Morphine（吗啡）Aspirin（阿司匹林）XCAV706-B-0（低）XCAV706-B-0（中）XCAV706-B-0（高）XCAV706-B-0（超高）10 10 10 10 10 10 10 2.5（sc）150（ip）10（op）20（op）40（op）160（op）49.3±10.9 0.0＊0.5±1.3 40.1±13.6 38.9±12.5 32.9±10.3＊22.8±10.1＊100 99 18.7 21.1 33.3 53.8

2.3 对坐骨神经慢性压迫性神经病理性疼痛模型的影响

2.3.1 模型的建立 取SD大鼠40只，腹腔注射戊巴比妥钠55 mg/kg（ip）麻醉，在左后侧大腿中段分离坐骨神经。在坐骨神经即将分叉的前段，用无菌玻璃钩将坐骨神经与周围组织分离，用无菌铬肠线（4号，直径0.15 mm）结扎4个环，每个环间距1～2 mm，局部撒青霉素钠消毒，分别缝合肌肉组织与皮肤，置于铺有软木屑的笼中。假手术组只暴露坐骨神经，不进行结扎，其余处理同神经结扎组。在术后14 d，测定CCI大鼠压力痛阈值，筛选出疼痛症状的大鼠。测定基础痛阈，淘汰基础痛阈大于8 g或小于0.6 g的大鼠（正常痛阈15 g）。

2.3.2 分组及给药 根据基础痛阈将大鼠随机均分为加巴喷丁对照组、土鳖虫酶解提取物超高、高剂量组共3组。土鳖虫酶解提取物超高、高剂量组分别灌胃给药160 mg/kg、40 mg/kg（相当于临床用量的8倍、2倍），加巴喷丁对照组灌胃给药60 mg/kg，测定给药后 0.5 h、1 h、2 h、4 h，8 h 的压力痛阈值。结果见表2。

表2 土鳖虫酶解提取物对CCI大鼠痛觉的影响 （±S） g

表2 土鳖虫酶解提取物对CCI大鼠痛觉的影响 （±S） g

注：与给药前比较，＊P＜0.01，土鳖虫酶解提取物超高、高剂量组能显著提高大鼠压力痛阈。

药物(mg/kg) n 基础压力痛阈 给药后机械压力痛阈0.5 h 1 h 2 h 4 h 8 h加巴喷丁（60）XCAV706-B-0（40）XCAV706-B-0（160）888 3.83±1.47 3.99±1.52 4.00±1.66 17.10±3.56＊ 21.18±5.39＊ 17.70±6.63＊ 16.51±6.64＊ 15.13±6.61＊7.34±3.58＊ 10.87±3.28＊ 10.20±4.59＊ 9.81±2.40＊ 11.34±5.38＊11.19±5.98＊ 15.62±6.41＊ 16.0±4.56＊ 11.67±7.01＊ 12.14±6.54＊

2.3.3 压力痛阈测定 将大鼠置于金属笼中，用不同克重的纤维丝（Von Frey Hair）刺激其足底足心部位，持续刺激5 s，每次刺激间隔5 s，找到10次刺激中引起4次到6次大鼠抬足反应的纤维丝，记录其克重，此克重即为压力痛阈值（单位：g）。在某一克重的毛刷无反应，而另一克重的毛刷达到最大抬足次数，则取两者的平均值。

3 讨论

虽然目前有许多止痛药物可用于镇痛，如阿片类药物，非甾体类抗炎药[2]，但这些药物并不能治愈疼痛，且易产生耐受性。所以镇痛药物的研发一直是热点，开发出镇痛效果好、无成瘾性的新型镇痛药变得日益重要。本研究采用腹腔注射醋酸建立动物扭体模型，采用无菌铬肠线结扎制备坐骨神经慢性压迫性神经病理性疼痛模型，对土鳖虫酶解提取物进行了镇痛作用的实验研究，其结果显示，土鳖虫酶解提取物对两种疼痛模型均有显著镇痛作用，且呈明显量效关系。此研究为土鳖虫酶解提取物临床治疗疼痛提供了实验依据，但关于其药理作用机制可能是多方面的，尚有待于进一步探讨。

[1]范文昌，梅全喜，高玉桥.12种广东地产清热解毒药的镇痛作用实验研究[J].今日药学，2010，20(2):12-15

[2]Holtman JR，Dwoskin LP，Dowell C，et al.The novel small molecule α9α10 nicotinic acetylcholine receptor antagonist ZZ-204G is analgesic[J].Eur J Pharmacol，2011，670(2-3):500-508