血府逐瘀汤对自发性高血压大鼠血管重塑的影响*

刘月平李心亮蔡俊龙郑 兵谢芳一

（1.湖南省儿童医院，湖南 长沙 410007；2.湖南省中医研究院，湖南 长沙 410013；3.湖南省怀化市第一人民医院，湖南 怀化 418000）

·研究报告·

血府逐瘀汤对自发性高血压大鼠血管重塑的影响*

刘月平1李心亮2△蔡俊龙3郑 兵2谢芳一2

（1.湖南省儿童医院，湖南 长沙 410007；2.湖南省中医研究院，湖南 长沙 410013；3.湖南省怀化市第一人民医院，湖南 怀化 418000）

目的观察血府逐瘀汤对自发性高血压大鼠（SHR）血管形态学的影响并对其可能存在的降压机制进行探索。方法将40只SHR按随机数字表法随机分成模型对照组，硝苯地平片组，血府逐瘀汤（中药）高、中、低剂量组5组；另取8只Wistar大鼠作为空白对照组，上述动物均灌胃给予相应药物，其中空白和模型对照组给予等量蒸馏水，连续6周。每周于固定时间采用无创血压计检测大鼠尾动脉收缩压；放射免疫分析法测定血浆血管紧张素Ⅱ、醛固酮、6-酮前列环素及TXB2含量；HE染色显微镜拍照后检测胸主动脉中膜厚度、血管内径并计算壁腔比。结果与空白组比较，模型组大鼠灌胃蒸馏水6周收缩压持续升高，血浆TXB2含量、胸主动脉中膜厚度、壁腔比比值均显著升高（P＜0.01）。与模型组比较，硝苯地平片组，中药高、中、低剂量干预后大鼠收缩压均显著下降（P＜0.05或P＜0.01）；中药高、中剂量组大鼠血浆血管紧张素Ⅱ、醛固酮含量显著升高（P＜0.05）；中药高、中、低剂量组大鼠血浆TXB2活性显著降低（P＜0.01）；中药高、中剂量组大鼠胸主动脉中膜厚度、壁腔比比值均显著降低（P＜0.01）。结论血府逐瘀汤能够显著降低自发高血压大鼠收缩压，改善高血压血管重塑。其降压机制可能与阻断血管紧张素Ⅱ与其受体结合以及纠正TXA2和PGI2失衡有关。

血府逐瘀汤 高血压 血管紧张素Ⅱ TXB2PGI2自发性高血压大鼠

高血压病（hypertension）是一种以体循环动脉压升高为主要特征的具有多重危险因素的综合症，它既是多种心、脑、肾等疾病的重要病因，又是心脑血管疾病最重要的危险因素，可影响心、脑、肾等重要脏器的结构和功能，是心脑血管疾病死亡的重要原因之一［1］。高血压血管重塑是在高血压环境下动脉血管结构和功能的适应性改变，主要包括血管壁增厚、壁腔比改变和微小动脉立体构筑疏松，随之产生血管功能的异常［2］。基础与临床研究显示血管重塑伴随高血压病的始终，是导致靶器官损害的直接原因［3］。2005年高血压指南明确将颈动脉中膜厚度作为衡量高血压患者靶器官损害的指标之一，强调了其在高血压血管重塑中的重要性。血府逐瘀汤是活血化瘀经典方，由桃仁、红花、当归、生地黄、牛膝、川芎、桔梗、赤芍、枳壳、甘草、柴胡组成，具有活血化瘀、行气止痛的功效。临床上常用于治疗冠心病心绞痛、风湿性心脏病、脑血栓等。现代医学研究发现血府逐瘀汤对高血压有较好疗效［4］。临床研究显示血府逐瘀汤治疗高血压头痛（瘀血证）者，能够降低血压水平，改善患者证候积分，提高生活质量［5］，对高血压内皮功能障碍也有一定效果［6］。但是其降压作用机制尚不明确。本研究主要通过观察血府逐瘀汤对SHR尾动脉收缩压的影响对血府逐瘀汤的有效性进行系统评价；通过观察血府逐瘀汤对自发性高血压大鼠（SHR）肾素血管紧张素系统、血栓素B2（TXA2）与前列环素（PGI2）平衡的影响来探讨血府逐瘀汤可能存在的降压作用机制；观察血府逐瘀汤对SHR胸主动脉形态学的影响来研究血府逐瘀汤对高血压血管重塑的影响。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 动物 40只SPF级自发性高血压大鼠（SHR），雄性，6周龄，体质量180～220 g；8只SPF级性Wisrar大鼠，雄性，6周龄，体质量180～220 g，以上动物均购自北京维通利华实验动物中心，许可证号SCXK（京）2012-0001。动物合格证号43004700012458。

1.2 药品与试剂 血府逐瘀汤干膏粉（湖南省中医药研究院中药研究所中药制剂室，批号120512）；硝苯地平片（购自长沙永康堂大药房，批号20120813）；血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、醛固酮、6-酮前列腺素F1α和TXA2放免试剂盒（购自中生北控生物制剂有限公司）。

1.3 仪器 BP-98A型无创血压计 （北京阮龙科技有限责任公司），AY-120电子分析天平 （日本岛津公司），TG16-WS台式高速离心机（湖南湘仪有限责任公司），TS-12A型生物组织自动脱水机（湖北康隆电子科技有限责任公司），BM-V3型生物组织包埋机（湖北康隆电子科技有限责任公司），BM-Ⅷ型生物组织包埋机（冷冻台）（湖北康隆电子科技有限责任公司），CS-VI组织摊片烤片机 （湖北康隆电子科技有限责任公司），BX43奥林巴斯生物显微镜（上海赖氏电子科技责任有限公司）

1.4 动物分组与给药 分组：6周龄SHR 40只，Wistar大鼠8只，分笼饲养，每笼4只，适应性喂养3 d。将SHR按随机数字表法随机分成5组，每组8只，分别为模型对照组、阳性药对照组（硝苯地平）、血府逐瘀汤（中药）高、中、低剂量组；Wistar大鼠作为空白对照组。模型对照组、空白对照组，蒸馏水灌胃；阳性药对照组，硝苯地平片3.6 mg（10 mL·kg）灌胃给药；中药高、中、低剂量组分别为2.4 g（10 mL·kg）、1.2 g（10 mL·kg）、0.6 g（10 mL·kg）灌胃给药，连续10周。

1.5 血压测量与取材 每周于固定时间测量大鼠血压，方法如下：打开BP-98A无创血压计电源，电加热温度设定为38℃，预热30 min后将大鼠放入鼠套内加热10 min，将血压探测器套在大鼠尾根部，待大鼠血压稳定后，取3 min内连续且波动小于5的3个值求平均值作为大鼠血压值。取材：给药10周后将大鼠禁食不禁水12 h后，用肝素钠抗凝采血管腹主动脉取血4 mL，摇匀，4℃3000 r/min离心15 min，取上清液，送湖南省中医药研究院附属医院放免中心检测血浆AngⅡ、醛固酮、6-酮前列腺素F1α、TXA2含量。摘取大鼠胸主动脉弓后约1 cm置于4%多聚甲醛溶液中固定。

1.6 胸主动脉形态学检查 将摘取的动脉酒精梯度脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，常规切片，HE染色后中性树胶封片，显微镜下观察，在统一放大10×40倍镜下，测量腹主动脉血管中膜厚度（MT），按顺时针方向测5个值取其均值；10×5倍镜下测量血管内径（LD），计算血管中膜厚度/血管内径（MT/LD）比值。

1.7 统计学处理 采用SPSS17.0统计软件。计量资料以（±s）表示。两组资料比较采用非配对t检验，多组资料比较采用One-way ANOVA统计方法进行分析，组问比较采用q检验。P＜0.05或P＜0.01为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 各组给药6周后SHR收缩压比较 见表1。结果示给药前SHR各组血压接近且均高于空白组，空白对照组大鼠蒸馏水给药0周血压无明显变化。与空白对照组比较，模型对照组大鼠给药蒸馏水6周血压持续升高（P＜0.01）。与模型对照组比较，阳性对照组给药硝苯地平6周血压明显下降（P＜0.01）；中药高剂量组给药6周血压显著降低（P＜0.01）；中药中剂量给药3周后血压显著降低（P＜0.05）。

2.2 各组SHR血浆血管紧张素Ⅱ、醛固酮、6-酮前列环素F1α、TXB2水平比较 见表2。 结果示与空白对照组比较，模型对照组大鼠血浆AngⅡ、TXB2含量均显著升高（P＜0.01）。与模型对照组比较，中药高、中剂量组大鼠血浆血管紧张素含量显著升高 （P＜0.05）；SHR血浆AngⅡ水平升高，与模型对照组比较，差异有统计学意义 （P＜0.05）；中药高、中剂量组大鼠血浆TXB2水平显著降低（P＜0.05）；中药低剂量组给药10周后，SHR血浆AngⅡ水平也略有升高，差异无统计学意义（P＞0.05）。

表1 各组SHR收缩压比较（mmHg，±s）

表1 各组SHR收缩压比较（mmHg，±s）

与空白组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。下同。

组别 n空白对照组 8模型对照组 8阳性对照组 8 5 W 6 W 1 2 4 . 3 ± 1 2 . 8 1 2 8 . 3 ± 7 . 3 1 9 6 . 8 ± 1 2 . 6**2 0 8 . 4 ± 6 . 3**1 4 0 . 3 ± 4 . 5**△△1 4 5 . 4 ± 6 . 3**△△中药高剂量组 8 1 6 2 . 6 ± 9 . 5**1 6 2 . 8 ± 1 1 . 4**△△1 6 5 . 3 ± 9 . 6**△△1 6 8 . 3 ± 1 7 . 3**△△1 6 9 . 6 ± 8 . 7**△△1 6 8 . 8 ± 1 3 . 3**△△1 7 0 . 8 ± 7 . 7**△△中药中剂量组 8 1 6 1 . 1 ± 9 . 3**1 7 0 . 4 ± 1 0 . 2**1 7 5 . 4 ± 1 2 . 0**1 7 5 . 5 ± 8 . 5**△1 7 9 . 2 ± 1 1 . 7**△1 8 5 . 3 ± 9 . 5**△1 8 8 . 8 ± 2 0 . 6**△中药低剂量组 8 1 6 3 . 9 ± 1 2 . 7**1 7 8 . 8 ± 1 4 . 0**1 8 3 . 9 ± 1 2 . 1**1 8 8 . 7 ± 1 7 . 7**1 9 0 . 8 ± 1 6 . 2**1 9 1 . 8 ± 1 7 . 5**1 9 5 . 6 ± 1 4 . 5**0 W 1 W 2 W 1 2 3 . 9 ± 7 . 9 1 2 3 . 1 ± 5 . 8 1 2 4 . 7 ± 4 . 4 1 6 2 . 8 ± 1 3 . 6**1 7 4 . 5 ± 8 . 7**1 7 9 . 1 ± 8 . 7**1 6 2 . 7 ± 1 1 . 6**1 3 9 . 7 ± 1 0 . 1*△△1 4 0 . 6 ± 7 . 9*△△3 W 1 2 3 . 7 ± 4 . 8 1 8 4 . 9 ± 8 . 7**1 3 9 . 5 ± 6 . 2*△△4 W 1 2 3 . 0 ± 9 . 9 1 8 9 . 3 ± 1 0 . 7**1 3 6 . 5 ± 8 . 2**△△

表2 各组SHR肾素-血管紧张素指标及TXA2与PGI2水平的比较（±s）

表2 各组SHR肾素-血管紧张素指标及TXA2与PGI2水平的比较（±s）

组别 n空白对照组 8模型对照组 8阳性对照组 8 6 -K -P G F 1 α（n g / L）5 2 . 5 9 ± 1 5 . 4 1 6 5 . 7 6 ± 2 2 . 6 7 5 5 . 3 1 ± 1 4 . 9 8中药高剂量组 8 1 4 5 1 . 4 3 ± 7 0 . 8 3△2 . 0 2 ± 1 . 0 6**2 6 8 . 4 9 ± 1 9 3 . 2 7△△5 4 . 7 0 ± 1 9 . 0 4中药中剂量组 8 1 4 4 7 . 7 4 ± 5 8 . 9 9△2 . 1 4 ± 1 . 0 5**3 1 6 . 4 4 ± 3 1 9 . 5 7△5 9 . 9 8 ± 2 3 . 1 1中药低剂量组 8 1 4 0 9 . 6 9 ± 6 3 . 6 0 1 . 8 5 ± 1 . 0 3*4 5 6 . 1 1 ± 1 3 3 . 6 4*6 8 . 7 1 ± 1 6 . 6 2 T X B2（n g / L）1 4 3 4 . 3 6 ± 9 4 . 2 9 0 . 3 3 ± 0 . 1 2 2 9 4 . 9 7 ± 2 4 7 . 3 4 1 3 7 4 . 6 5 ± 7 7 . 2 1**1 . 4 6 ± 1 . 4 6*4 9 7 . 2 9 ± 6 8 1 . 1 0**1 3 8 4 . 3 3 ± 8 6 . 4 3**1 . 4 3 ± 1 . 0 7*3 6 9 . 4 3 ± 3 4 7 . 6 2*△血管紧张素Ⅱ（n g / L）醛固酮（p m o l / L）

2.3 各组SHR胸主动脉形态学比较 见表3，图1，图2。与空白对照组比较，模型对照组大鼠胸主动脉中膜厚度，壁腔比比值均显著升高（P＜0.01）。与模型对照组比较，中药高、中、低剂量组大鼠胸主动脉中膜厚、壁腔比比值均显著降低（P＜0.05或P＜0.01）。

表3 血府逐瘀汤对SHR胸主动脉血管重塑的影响（±s）

表3 血府逐瘀汤对SHR胸主动脉血管重塑的影响（±s）

组别 n空白对照组 8模型对照组 8阳性对照组 8 M T（μ m） L D（半径）（μ m） M T / L D 3 4 7 . 1 4 ± 3 7 . 3 2 2 6 6 7 . 4 0 ± 4 0 1 . 2 2 0 . 1 3 ± 0 . 0 2 6 3 0 . 5 8 ± 2 3 3 . 7 2**3 0 3 3 . 8 3 ± 4 2 0 . 2 4 0 . 2 1 ± 0 . 0 7**5 1 9 . 9 2 ± 1 2 5 . 6 3**2 7 3 1 . 3 4 ± 3 5 7 . 6 5 0 . 1 9 ± 0 . 0 3**中药高剂量组 8 3 4 2 . 4 5 ± 5 1 . 6 0△△2 7 3 5 . 7 3 ± 2 6 7 . 5 2 0 . 1 3 ± 0 . 0 2△△中药中剂量组 8 4 2 9 . 6 1 ± 1 0 3 . 8 7△2 8 9 7 . 6 6 ± 5 9 1 . 1 9 0 . 1 6 ± 0 . 0 7#中药低剂量组 8 4 9 8 . 8 1 ± 8 4 . 4 9△2 9 9 0 . 3 0 ± 4 8 6 . 9 9 0 . 1 6 ± 0 . 0 2#

图1 血府逐瘀汤对SHR胸主动脉形态学的影响（×500）

图2 血府逐瘀汤对SHR胸主动脉形态学的影响（×400）

3 讨 论

3.1 动物模型的选择与血府逐瘀汤的有效性 SHR因其与人类原发性高血压有许多相似之处而被认为是研究人类原发性高血压的最佳动物模型，现已被广泛应用于高血压发病机制和抗高血压药物疗效的实验研究中［7］。本实验以SHR为动物模型，对血府逐瘀汤有效性进行了评价。结果显示血府逐瘀汤可显著降低SHR收缩压，且其降压效果与给药剂量成正比。

3.2 血府逐瘀汤对SHR肾素-血管紧张素系统的影响 肾素-血管紧张素系统（RAS）是对血压进行调节的最重要的内分泌系统［8］。AngⅡ是已知最强的缩血管活性物质之一，同时也是RAS中最重要的组成部分。AngⅡ主要是通过与血管紧张素1型受体（AT1）结合，促进AT1表达，作用于血管平滑肌，可使全身微动脉收缩，动脉压升高。AngⅡ还可强烈刺激肾上腺皮质球状带细胞促进其合成和释放醛固酮，醛固酮可促进肾小管对Na+的重吸收，使细胞外液数量增加引起水纳潴留。本实验的结果显示血府逐瘀汤给药后SHR血压显著降低的同时，血浆中AngⅡ含量显著上升，且给药剂量越高血浆中AngⅡ含量越高。众所周知，血管紧张素Ⅱ升高与血压升高之间的关键是AngⅡ与其AT1结合而激活达到收缩血管、升高血压的目的。同时血府逐瘀汤给药量越大其AngⅡ含量高。另有大量研究显示AngⅡ受体拮抗剂（ARB）在给药后普遍出现血浆血管紧张素含量升高的现象［9-10］，原因是AngⅡ受体拮抗剂可竞争性与AngⅡ受体结合而造成血浆局部AngⅡ含量升高［11］。因此笔者推测血府逐瘀汤是通过竞争性拮抗AngⅡ与AT1体结合而达到降血压的目的。醛固酮是RAS下游的重要组成部分，通过与组织中的盐皮质激素受体结合而参与维持机体的水和电解质平衡。过量的醛固酮可导致心脏、血管、肾脏等重要脏器损伤。给予血府逐瘀汤后，SHR血浆中醛固酮含量略有上升，可能是由AngⅡ含量升高引起的。

3.3 血府逐瘀汤对SHR血液TXA2与前列环素平衡的影响 TXB2和6-酮前列环素F1α分别是TXA2和PGI2的稳定代谢产物，可代表体内TXA2与PGI2活性。在生理状态下二者保持动态平衡。当因TXA2含量上升而打破上述动态平衡可引起血管收缩、血压升高。研究表明TXA2和PGI2失衡是高血压重要的发病的机制［12］。本实验结果显示血府逐瘀汤在不影响PGI2活性的前提下能够明显降低SHR血浆中TXA2活性，提示其能有效地抑制血小板粘附，降低血液黏度纠正TXA2和PGI2失衡而达到降低血压的目的。

3.4 血府逐瘀汤对SHR血管重塑的影响 血管重塑是临床上预测高血压靶器官损害的重要指标之一，是血管为适应血压的改变对形态和功能的自我调整，主要包括血管细胞的改变和细胞外基质的改变过程。高血压血管重塑是指高血压所导致的血管结构和功能的异常，主要包括：血管壁增厚、血管壁/管腔直径比值增大、小动脉立体构筑疏松，随之产生血管功能障碍［13］。高血压血管重塑是高血压重要的发病机制之一。本实验的结果显示血府逐瘀汤给药后能够显著降低SHR胸主动脉厚度、降低壁腔比比值，说明血府逐瘀汤能够有效逆转高血压血管重塑，从而降低血压，降低靶器官损害。

综上所述，血府逐瘀汤其降压作用机制可能是通过争性拮抗AngⅡ与AT1受体结合、纠正TXA2和PGI2失衡而达到降低血压的目的；通过逆转高血压血管重塑而降低靶器官损害。

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A Preliminary Study of the Anti-hypertensive Mechanism of Xuefu Zhuyu Decoction on SHR

LIU Yueping，LI Xinliang，CAI Junlong，et al. Children′s Hospital，Hunan，Changsha 410007，China

Objective：To study the antihypertensive effect of hospital preparation of Xuefu zhuyu Decoction on spontaneously hypertensive rats and preliminary inquiry its hypotensive mechanism.Methods：40 spontaneously hypertensive rats were randomly divided into 5 groups-the control group，the nifedipine group，groups of Xuefu zhuyu Decoction high，medium and low dose with intragastric administration.8 wistar rats as the blank control group were given distilled water for 6 weeks.In the fixed time every week，the systolic pressure of rats′tail artery were tested with Sphygmomanometer，as well as the content of AngiotensinⅡ，aldosterone，6-Keto-PGF1αand TXB2with radioimmunoassay.Taken photos by HE staining microscope，media thickness of thoracic aorta，blood vessel diameter were also tested and the ratio of wall to cavity was calculated.Results：Compared with the control group，the systolic pressure of the model group was constantly increasing after Ig distilled water for 6 weeks，as well as the content of TXB2in the Plasma，media thickness of thoracic aorta，ratio of wall to cavity，with statistical significance（P＜0.01）.Compared with the model group，the systolic pressure of the groups of nifedipine and Xuefu zhuyu Decoction high，medium and low dose decreased obviously，with statistical significance（P＜0.05 or P＜0.01）.In the groups of Xuefu zhuyu Decoction high，medium and low dose，AngiotensinⅡ，the content of aldosterone increased obviously（P＜0.05）and TXB2in the Plasma，as well as media thickness of thoracic aorta，ratio of wall to cavity，decreased obviously（P＜0.01），with statistical significance.Conclusion：Xuefu zhuyu Decoction can significantly reduce systolic pressure of spontaneous hypertensive rats and improve the reshape of hypertensive vascular.The hypotensive mechanism may related with the blocking-up of the combination of AngiotensinⅡand its recipient and correcting the unbalance of TXA2and PGI2.

Xuefu zhuyu Decoction；Hypertension；Angiotensin II；TXB2；PGI2；Spontaneous hypertensive rat

R285.5

A

1004-745X（2015）08-1376-04

10.3969/j.issn.1004-745X.2015.08.023

2015-04-25）

湖南省中医药研究院院级课题

△通信作者（电子邮箱：hankey001＠163.com）