长春西汀注射液与临床常用输液配伍的稳定性考察

邓 丽 ，汪秋兰，王世民，施春阳，方建国，王文清#(.华中科技大学同济医学院附属同济医院药学部，湖北 武汉 430030;.武汉华龙生物制药有限公司新药研发部，湖北 武汉 430030)

长春西汀是从夹竹桃科小蔓长春花提取的生物碱经合成、筛选而开发的吲哚类生物碱长春胺的衍生物，系脑血管扩张剂，能维持或恢复脑血管的生理性扩张，增加缺血区的正常脑血流量，提高脑对血氧的利用率，改善缺氧脑组织的代谢［1-3］。长春西汀注射液的原研产品由匈牙利Gedeon Richter公司生产，规格为2 ml∶10 mg。我国长春西汀注射液共3 种规格:2 ml∶10 mg、2 ml∶20 mg 和5 ml∶30 mg。长春西汀注射液的说明书“用法用量”项中注明，可用本品20 ～30 mg 加入0.9%氯化钠注射液或5%氯化钠注射液500 ml 内缓慢滴注(滴注速度不能超过80 滴/min)，配制好的输液须在3 h 内使用。可见，500 ml 输液至少需要125 min(约2 h)才能滴注完毕，故配制好的输液应至少能在室温(20 ～25 ℃)下稳定保存6 h。本研究考察了长春西汀注射液分别与5%葡萄糖注射液和0.9%氯化钠注射液配伍后的稳定性，以探讨中试处方工艺的合理性，为临床用药的安全性提供实验依据。

1 仪器与试剂

LC-20AD 型高效液相色谱仪(日本岛津公司)，包括LC solution 工作站、LC-20AD 泵、SIL-20A 型自动进样器、SPDM20A 型二极管阵列检测器(190 ～800 nm);AUW 220D 型双量程分析天平(日本岛津公司，感量0.1 mg/0.01 mg)。长春西汀注射液中试样品(武汉华龙生物制药有限公司，规格:2 ml∶10 mg，批 号:1330001、1330003、1330008、1330009、1330010);长春西汀注射液市售样品(郑州羚锐制药股份有限公司，批号:1206111;匈牙利吉瑞大药厂，批号:A27161A);氯化钠注射液(武汉滨湖双鹤药业有限责任公司，规格:250 ml∶2.25 g，批号:1403110303);葡萄糖注射液(四川科伦药业股份有限公司，规格:250 ml∶12.5 g，批号:A12112705-1);长春西汀对照品(中国药品生物制品检定所，批号:100947-201203，供含量测定用，供高效液相色谱法测定，按C22H26N2O2计，含量为99.4%);欧洲药典委员会长春西汀杂质对照品，包括杂质A(批号:Y0000590)、杂质B(批号:Y0000591)、杂质C(批号:Y0000790)、杂质D(批号:Y0000760)，均购自欧洲药典委员会;甲醇、乙腈(美国天地公司，色谱纯);其他试剂均为分析纯，水为新制多效纯化水。

2 方法与结果

2.1 含量测定分析方法验证

2.1.1 色谱条件:色谱柱:InertSustain C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相:0.2 mol/L 醋酸铵溶液-乙腈(V∶V =40∶60)，检测波长:280 nm，流速:1 ml/min，柱温:30 ℃，进样量:10 μl。长春西汀主峰与各杂质峰之间分离度良好，杂质B 和杂质D的分离度＞2.0，理论板数按长春西汀峰计算不低于3 000。

2.1.2 溶液制备:(1)对照品溶液:精密称取长春西汀对照品12.88 mg(相当于长春西汀12.8 mg)，置于50 ml 棕色量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液;再精密量取2 ml，置于10 ml 量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得。(2)系统适用性溶液:分别精密称取杂质A、B、C、D 4.97、5.18、4.99、5.23 mg，分别置于100 ml 量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀;精密量取长春西汀对照品贮备液2 ml，杂质A、B、C、D 各1 ml，置于10 ml 量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得。(3)供试品溶液:精密量取本品1 ml，置于20 ml 量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀;再精密量取2 ml，置于10 ml 量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得。(4)空白对照溶液:按长春西汀注射液处方制备不含长春西汀的阴性样品，再按照供试品溶液的制备方法制备空白对照溶液。

2.1.3 专属性试验:按“2.1.1”项下色谱条件，精密量取长春西汀对照品溶液、系统适用性溶液、供试品溶液、阴性对照溶液、空白输液各10 μl 进样，记录色谱图。对照品溶液色谱图中，长春西汀主峰tR为18.38 min，理论板数为14 204.36;系统适用性溶液色谱图中，杂质A、D、B 和C 的tR分别为6.39、12.25、13.73 和15.08 min，杂 质B 和 杂 质D 的 分 离 度 为3.29 ＞2.0;供试品溶液色谱图中，在与对照品溶液主峰色谱图相应的位置上，显相同的色谱峰;阴性对照溶液和空白输液对长春西汀的测定无干扰。

2.1.4 线性关系考察:精密量取“2.1.2”项下对照品贮备液0.5、1、2、3、5、10 ml，分别置于10 ml 量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品系列溶液。分别取上述溶液各10 μl进样，记录色谱图，以峰面积(A)对浓度(C)绘制标准曲线。长春西汀在12.80 ～256.00 μg/ml 的浓度范围内线性关系良好，回归方程为:A=15 969C-8 432.3(r=0.999 95，n=6)。2.1.5 仪器精密度试验:精密量取“2.1.2”项下的对照品溶液，连续进样5 次，测得长春西汀峰面积的RSD为0.16%(n=5)，即仪器精密度良好。

2.1.6 重复性试验:取同一批中试样品(批号:1330001)，按照“2.1.2”项下方法平行制备供试品溶液6 份并进行测定。结果显示，长春西汀标示量百分含量的平均值为98.17%(n=6)，RSD为0.59%，重复性良好。

2.1.7 中间精密度试验:在不同时间由3 个不同的分析人员用不同的高效液相色谱仪(Agilent 1100)，按“2.1.2”项下方法各制备2 份供试品溶液，按照上述色谱条件，测定峰面积。结果显示，长春西汀标示量百分含量的平均值为96.66%(n=6)，RSD为0.98%。

2.1.8 供试品溶液的稳定性试验:取“2.1.2”(项下的供试品溶液1 份，于室温(20 ～25 ℃)下放置，在不同时间段(0、2、4、6、8、10 h)分别定点进样测定。结果显示:长春西汀峰面积的RSD为0.28%(n=6)，说明供试品溶液在10 h 内测定，其含量保持稳定。

2.1.9 范围:根据供试品取样量的80%为低浓度，供试品取样量的120%为高浓度，按照“2.1.2”项下方法分别制备3 份供试品溶液，精密量取10 μl 进样，测定峰面积。结果显示:长春西汀标示量百分含量的平均值为98.07%(n=6)，RSD为0.96%。

2.1.10 准确度考察:精密量取已知含量的长春西汀注射液(批号:1330001)0.5 ml，分别置于9 个20 ml 量瓶中，精密量取长春西汀对照品溶液(质量浓度为500.98 μg/ml)4、5、6 ml各3 份，分别加入上述9 个量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀;再分别精密量取上述溶液2 ml，置于10 ml 量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为回收率供试品溶液。测定其含量并计算回收率，结果见表1。2.1.11 样品含量测定:取5 批长春西汀注射液中试样品及2 批市售样品，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，测定其长春西汀标示量的百分含量，结果见表2。

表1 长春西汀加样回收率测定结果(n=9)Tab 1 The determination results of recovery of vinpocetine(n=9)

表2 7 批样品中长春西汀标示量的百分含量测定结果(n=3)Tab 2 The determination results of the percent content of labeled amount of vinpocetine in 7 batches of samples(n=3)

2.2 配伍稳定性考察

2.2.1 输液配伍方法:按照临床常用最低治疗质量浓度(0.04 mg/ml)和最高治疗质量浓度(0.06 mg/ml)，将批号:1330008(中试样品)、1206111(郑州羚锐制药股份有限公司)和A27161A(匈牙利吉瑞大药厂)分别与5%葡萄糖注射液或0.9%氯化钠注射液配伍，具体配伍方法见表3。在室温(20 ～25 ℃)下放置，分别于0、1、2、4、6、8 h 考察配伍溶液的性状、pH 值、含量和不溶性微粒的变化情况。

2.2.2 配伍溶液性状和pH 值变化:灯检结果显示，配伍后的输液均为无色的澄明液体，在室温(20 ～25 ℃)下放置8 h 内，所有样品性状均未发生明显变化，颜色未发生改变，未检出明显可见异物和细微可见异物。配伍后的输液在不同时间点的pH 值均未发生明显改变，见表4。

表3 输液配制方法Tab 3 The preparation of infusion solutions

表4 12 种配伍溶液在不同时间点的pH 值测定结果Tab 4 pH value of 12 kinds of infusion solutions at different time points

2.2.3 配伍溶液含量变化:取“2.2.1”项下各配伍溶液，分别于0、1、2、4、6、8 h 精密量取10 μl，注入高效液相色谱仪，按“2.1.1”项下色谱条件测定，记录峰面积，以0 h 时长春西汀的含量为100%计算相对含量。结果显示，12 种配伍溶液中长春西汀的相对含量均未发生明显变化，见表5。

2.2.4 配伍溶液不溶性微粒变化:分别于0、1、2、4、6、8 h 取各配伍溶液适量，依照《中华人民共和国药典:二部》(2010 年版)附录ⅨC 所述操作规程，按光阻法，用GWJ-4 智能微粒检测仪测定各配伍溶液中的微粒变化情况，结果见表6。《中华人民共和国药典:二部》(2010 年版)附录ⅨC 规定:“(1)标示装量为100 ml 或以上的静脉用注射液，除另有规定外，每1 ml中含10 μm 及10 μm 以上的微粒不得过25 粒，含25 μm及25 μm 以上的微粒不得过3 粒。(2)标示装量为100 ml 以下的静脉用注射液、静脉注射用无菌粉末、注射用浓溶液及供注射用无菌原料药，除另有规定外，每个供试品容器(份)中含10 μm 及10 μm 以上的微粒不得过6 000 粒，含25 μm 以上微粒不得过600 粒。”因此，换算后，配伍前长春西汀注射液和5%葡萄糖注射液的不溶性微粒均符合规定，配伍后的溶液在室温(20 ～25 ℃)下放置8 h 的不溶性微粒合格，且在此时间内未出现不溶性微粒增加的趋势，见表7。

表5 12 种配伍溶液在不同时间点的长春西汀相对含量Tab 5 Relative contents of vinpocetine in 12 kinds of infusion solutions at different time points

表6 12 种配伍溶液在不同时间点的不溶性微粒测定结果(个/ml)Tab 6 The results of particulate matter of 12 kinds of infusion solutions at different time points (species/ml)

表7 不同样品不溶性微粒的合格标准Tab 7 Acceptance criteria of particulate matter for different samples

3 讨论

长春西汀为吲哚类生物碱，几乎不溶于水，结构中含有2 个叔胺氮原子，显弱碱性(pKa=7.31)，易与色谱柱中的硅醇基相互作用，使峰形拖尾。参考标准［4］及文献［5］色谱条件，选用甲醇-碳酸铵溶液-乙醚(V∶V∶V =80∶25∶3)为流动相时，峰形拖尾;更换色谱柱及调整流动相比例后，未见明显改善，同时，乙醚的强挥发性易导致流动相配比发生变化。本研究选用0.2 mol/L 醋酸铵溶液-乙腈(V∶V=40∶60)为流动相［6-8］，流动相显弱碱性，以抑制长春西汀的解离，主成分的峰形对称，与杂质峰分离度良好。本研究选用的检测器为二极管阵列检测器，选择在200 ～400 nm 查看光谱图。在长春西汀相对应保留时间处查看光谱图可知，长春西汀在273 nm 波长处具有最大吸收。参考欧洲药典EP 7.0［6］和美国药典USP 35［7］的长春西汀的质量标准及本研究中长春西汀注射液有关物质检查的检测波长，选择280 nm 作为本研究的紫外检测波长。经方法学验证，本方法准确可靠，专属性强，可用于长春西汀原料及其制剂的含量测定。

本研究结果表明，长春西汀注射液上市产品和自研中试产品与0.9%氯化钠注射液和5%葡萄糖注射液分别配伍后，在室温(20 ～25 ℃)下放置8 h，配伍溶液的性状、pH 值、长春西汀含量均未发生明显改变，不溶性微粒符合规定且未呈现明显增加趋势，说明输液配伍稳定性良好。静脉输液的外观性状、pH 值和含量是用药的安全性、有效性的重要指标，而输液中的不溶性微粒会引起静脉炎、血管栓塞、肉芽肿、肺动脉高压、输液不良反应等，因此，静脉输液中不溶性微粒的大小和数量对于临床用药风险评价的意义越来越受到医药工作者的重视［9-10］。

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