金银花腋芽快速繁殖体系探讨

任 斌

（湖州中等卫生专业学校，浙江长兴 313100）

金银花腋芽快速繁殖体系探讨

任 斌

（湖州中等卫生专业学校，浙江长兴 313100）

以金银花试管苗带腋芽茎段为外植体，应用L16（45）正交试验设计，优选出金银花腋芽扩繁的培养基。结果表明，金银花经腋芽扩繁的最佳培养基是B5＋NAA 0.05 mg·L－1＋BA 2.0 mg·L－1＋GA31.0 mg· L－1，繁殖系数达4.1。

金银花；腋芽；快速繁殖

文献著录格式：任斌.金银花腋芽快速繁殖体系探讨［J］.浙江农业科学，2015，56（1）：56－57.

DOI 10.16178／j.issn.0528⁃9017.20150117

金银花（Lonicera japonica）为我国传统中药材，具有清热解毒、凉散风热之功效，被誉为中药中的青霉素，近年来由于我国先后经历了非典型肺炎、禽流感等疫情，防疫形势严峻，金银花市场需求量越来越大，而传统的无性繁殖方式已经无法满足金银花需求量的快速增长。对于金银花快繁体系的研究，国内外已有一些报道。Suk等［1］以金银花的合子胚为外植体，利用合子胚衍生的胚性细胞建立了细胞悬浮培养体系，再经体细胞发生途径再生为植株；宋振巧等［2］对中花1号金银花进行组培研究，经愈伤组织和丛生芽诱导，建立快繁体系；李景刚等［3］以金银花的嫩枝梢为外植体，经愈伤组织和丛生芽诱导建立快速繁殖体系；李军等［4］以在平邑县发现的金银花自然变异优良品种红河金银花为材料，建立了腋芽快繁体系。经愈伤组织诱导途径而再生的植株，由于细胞变异等原因，会产生变异植株，在遗传稳定性上不如经腋芽再生的植株。已报道的金银花快繁体系的繁殖系数也不是很高［5－6］。

正交设计与数据分析方法作为选择最佳试验方案的有效工具，能同时考察多因素对试验的影响，常用于植物快繁体系的研究［7－8］，但在金银花的快速繁殖研究中鲜见报道。本研究旨在建立一个更稳定、高效的金银花快速繁殖体系，应用L16（45）正交试验，进行金银花腋芽快速繁殖体系的研究，为金银花的快速繁育提供参考。现将有关金银花快速繁育的试验结果总结和报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

以金银花为外植体，在B5空白培养基上培养30 d，以所得试管苗作为试验材料。

1.2 处理设计

通过L16（45）正交试验设计，研究6⁃BA，NAA，IAA，GA3不同外源激素对金银花腋芽扩繁的影响。1－4水平BA因素分别为0.50，1.00，2.00和4.00 mg·L－1；NAA因素分别为0.00，0.05，0.10和0.50 mg·L－1；IAA因素分别为0.00，0.50，1.00和2.00 mg·L－1；GA3因素分别为0.00，0.20，0.50和1.00 mg·L－1。

以金银花带腋芽茎段为外植体（去除叶片），每瓶接种5个，每处理接种5瓶。25℃下全光照培养40 d后，测定每瓶的腋芽数目，求平均值。

2 结果与分析

2.1 腋芽数

各处理组的每瓶平均腋芽数统计结果如表1所示。

根据直观分析表明，腋芽增殖效果最好的是处理10，达20.6个，即培养40 d后，繁殖系数达4.1。极差分析表明，4个因素对腋芽扩繁的影响大小依次为NAA＞BA＞GA3＞IAA，其中NAA对繁殖系数影响最大。

为了更好地反映各处理因子对腋芽繁殖的影响，以便寻求腋芽扩繁的最佳培养基组，对表1试验结果作进一步方差分析。结果表明，4个因素对腋芽扩繁的影响大小依次为NAA（F＝7.185∗）＞BA（F＝5.344）＞GA3（F＝0.898）＞IAA（F＝0.698），其中NAA对腋芽扩繁有显著影响。腋芽扩繁的最佳培养基为B5＋NAA 0.05 mg·L－1＋BA 2.0 mg·L－1＋GA31.0 mg·L－1，繁殖系数达4.1。

2.2 试管苗

获得的丛生腋芽再在生根培养基B5＋NAA 0.05 mg·L－1＋IBA 0.4 mg·L－1＋MET 0.5 mg· L－1培养30 d后，即可获得形态正常的试管苗。

图1中a是金银花单个腋芽在扩繁培养基培养40 d后的生长情况；b是扩繁苗在生根培养基培养40 d后生长情况。由图可知，试管苗形态正常，生长旺盛，根系发达，有利于后期的移栽成活。

3 小结与讨论

试验应用L16（45）正交试验建立金银花快繁体系，结果表明，腋芽扩繁的最佳培养基为B5＋NAA 0.05 mg·L－1＋BA 2.0 mg·L－1＋GA31.0 mg· L－1，繁殖系数达4.1，获得丛生腋芽在先前研究建立的生根培养基B5＋NAA 0.05 mg·L－1＋IBA 0.4 mg·L－1＋MET 0.5 mg·L－1培养30 d后，即可获得形态正常的试管苗。以上研究为下一步金银花多倍体育种和优良品种的工厂化育苗打下了基础。

［1］ Kim S W，Oh S C，In D S，et al.High frequency somatic embryogenesis and plant regeneration in zygotic embryo cultures of Japanese honeysuckle［J］.Plant Cell，Tissue and Organ Culture，2003，72：277－280.

［2］ 宋振巧，陈为序，王建华.金银花开花与繁育特性研究［J］.山东农业科学，2012，44（1）：32－34，38.

［3］ 李景刚，孙满芝.良种金银花的组培快繁技术研究［J］.山东林业科技，2004（6）：36－37.

［4］ 李军，乔元伟.红河金银花的组培快繁技术［J］.山东林业科技，2000（3）：41－42.

［5］ 刘伟，和兆荣，周厚高.金银花组织培养初报［J］.中国农学通报，2006，22（8）：99－101.

［6］ 王文静，王鹏，李伟强.红金银花组培快繁技术研究［J］.北方园艺，2013（18）：100－102.

［7］ 魏翠华，秦建彬，谢宇，等.应用正交设计法优选台湾金线莲快繁培养基［J］.中国农学通报，2013，29（4）：114－117.

［8］ 孙周平，褚丽敏，洪仁伟.正交设计在刺五加组织培养中的应用［J］.中国农学通报，2010，26（4）：85－88.

（责任编辑：张瑞麟）

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0528⁃9017（2015）01⁃0056⁃02

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湖州市科技局项目（2013GY31）

任 斌（1981－），男，讲师，硕士，从事中药组织培养及优良品种培育研究工作。E⁃mail：hzwxrb＠126.com。