无花果叶中补骨脂素含量测定

郑岩　王红霞　陈随清

【摘要】目的：建立无花果叶中补骨脂素含量的HPLC测定方法，为无花果叶的开发利用及质量标准的制定提供依据。方法：色谱柱为hypersil ODS（250mm×4.0mm、5μm）；流动相为乙腈-水（55：45）；流速为1.0mL/min；检测波长290nm；柱温32℃。结果：补骨脂素在2～10μg范围与峰面积线性关系良好（R2=0.9996），平均回收率为102.2%，RSD=1.80%。

【关键词】补骨脂素；无花果叶；HPLC；含量测定

【中图分类号】R284.2【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2014）02-0013-02

无花果为桑科榕属植物无花果（Ficus carica L.），为药食兼优的植物。原产地中海及西南亚，现我国各地均有栽培[1]，主要分布于新疆、江苏、浙江、福建、山东、上海、四川、陕西、甘肃、江西、广东、河南等省，有悠久的栽培历史，是开发应用较广的经济植物。其果实营养价值高，富含糖、蛋白质、氨基酸、维生素和矿物元素，除食果外，其叶、根又俱含药用成份，为药食同源果品树种[2]。我国应用其叶、根入药，治疗肠炎，腹泻；外用治痈肿。现代医学研究证明，无花果叶中含有多种化学成分，包括香豆素、黄酮、挥发油、多糖、微量元素、氨基酸、维生素等[3]，其药理作用包括抗菌、抗病毒、抗肿瘤、降血脂、降血糖、治疗白癜风、痔疮等，药效显著[4]。无花果叶中所含的补骨脂素经体外抑瘤率活性测试，表明对表皮癌、膀胧癌、肝癌均有显著疗效，并有较好的抗菌活性和降低血糖、血脂的作用。

为进一步开发利用无花果叶，采用高效液相色谱法对无花果叶中补骨脂素的含量进行测定，并对不同提取方法进行了初步探索，为建立无花果叶中有效成分的含量测定方法提供了科学依据。

1仪器与试剂

1.1实验仪器高效液相色谱仪（LC-20AT，日本岛津公司），紫外检测器（SPD-20A，日本岛津公司），色谱工作站（CBM-102，日本岛津公司）；无油真空泵（HP-01，天津市恒奥科技发展有限公司）；溶剂过滤器（HL，天津市恒奥科技发展有限公司）；数控超声波清洗器（KQ-500DV，昆山市超声仪器有限公司）；十万分之一天平（梅特勒，Mettler Toledo AB 135-S）；分析天平（BS2242S，北京赛多利斯仪器系统有限公司）；自动双重纯水蒸馏器（SZ-93，上海亚荣生化仪器厂）；电子天平（JJ5000，常熟市双杰测试仪器厂）；粉碎机（FW200，北京中兴伟业仪器有限公司）；循环水式多用真空泵（SHZ-95B，巩义市予华仪器有限责任公司）。

1.2试剂乙腈（色谱纯，天津四友精细化学品有限公司）；甲醇（分析纯，北京化工厂）；双蒸水为自制。

1.3对照品补骨脂素为中国生物制品检定所提供，批号110739-200814，经HPLC检测含量>99%。

1.4样品样品均采于河南中医学院，由河南中医学院陈随清教授鉴定为桑科榕属植物无花果（Ficus carica L.）的干燥叶。

2方法与结果

2.1对照品溶液的制备精密称取补骨脂素5.0mg置10ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（0.5mg/ml）。

2.2供试品溶液的制备取无花果叶适量研细。精密称取0.5g置50ml量瓶中，加50%甲醇约50ml超声提取30min。放置至室温，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品。

2.3色谱条件色谱柱：phenomenex hydro ODS C18（250mm×4.6mm，4μm）色谱柱，流动相：乙腈-水（55：45），流速：1.0ml/min，检测波长：290 nm，进样量：10μl，柱温：32℃。在上述色谱条件下，补骨脂素与其他成分分离良好，见图1。

2.4方法学考察

2.4.1线性关系考察取补骨脂素对照品溶液，分别进样4、6、8、10、15、20μl，以补骨脂素的进样量（μg）为横坐标，峰面积（×106）为纵坐标进行线性回归，回归方程为：y=0.9297x+0.0671，R2=0.9996，表明补骨脂素的进样量2～10μg时与峰面积呈良好线性关系。

2.4.2稳定性试验取无花果叶粉末0.5g，精密称定，按供试品溶液制备方法制备，按同样的色谱条件进行HPLC分析，进样6次，时间间隔为0、2、4、8、12、24小时，分别测定补骨脂素峰面积，计算RSD=1.00%。表明补骨脂素在本实验条件下至少48小时内较稳定。

2.4.3精密度试验取补骨脂素标准品溶液，按同样的色谱条件进行HPLC分析，连续进样6次，分别测定补骨脂素峰面积，计算RSD=0.76%。表明此方法精密度良好。2.4.4 重现性试验 取无花果叶粉末6份，各0.5g，精密称定，按供试品溶液制备方法制备，按同样的色谱条件进行HPLC分析，分别测定补骨脂素峰面积，计算RSD=0.34%，表明此方法重现性良好。

2.4.5加样回收率试验取无花果叶粉末6份，各0.5g，精密称定，于每份样品中加入适量补骨脂素对照品溶液，按供试品溶液制备方法制备供试液，进样分析，计算回收率，平均回收率为102.2%，RSD=1.80%，表明本试验方法回收良好。

2.4.6样品含量测定取六份无花果叶粉末各0.5g，分别精密称定后，按上述制备方法制备，精密吸取供试品溶液，注入液相色谱仪进行测定，计算补骨脂素的含量，结果见表1。

3结果与讨论

3.1提取溶剂的考察分别用50%甲醇、75%甲醇、及甲醇超声提取无花果叶，结果表明，用50%的甲醇提取补骨脂素效率最高。

3.2提取时间的考察用50%的甲醇作为溶剂提取无花果叶，分别超声提取10、20、30min，结果表明，超声提取30min的补骨脂素峰面积最大。

3.3流动相的考察考察甲醇-水及乙腈-水作为流动相，结果表明用乙腈-水=55：45做流动相时，补骨脂素吸收峰能与其他成分有效分离，且基线较平稳，杂质峰较少，峰形好，因此选用乙腈-水=55：45作为流动相进行含量测定。

3.4测定结果表明，本实验建立的高效液相色谱法测定无花果叶中补骨脂素的含量方法，方法准确、灵敏、简便、快速、重现性好，可作为其补骨脂素的含量测定的主要方法，并为今后无花果叶的质量控制研究提供一定科学依据。

参考文献

[1]中国药材公司.中国中药资源志要[M].北京：科学出版社，1994：186.

[2]车久玲.无花果的栽培历史生态特性及药用价值[J].山东林业科技，1995，26（5）：19.

[3]刘弘，赵丽娅.无花果叶的化学及药理研究进展[J].华夏医学，2006，19（5）：1049-1051.

[4]叶华，谢绍诗，张文清.无花果叶、根的药用研究进展[J].海峡药学，2006，18（6）：3-7.

（收稿日期：2013.11.27）