AGR2、P53、GST-π在慢性萎缩性胃炎和胃腺癌中的表达及其意义

孙　敏

四川省成都市邛崃医疗中心医院　611530

AGR2、P53、GST-π在慢性萎缩性胃炎和胃腺癌中的表达及其意义

孙敏

四川省成都市邛崃医疗中心医院611530

胃癌是我国发病率和死亡率最高的恶性肿瘤。胃癌分为胃腺癌、平滑肌肉瘤和胃淋巴癌，其中胃腺癌是临床上发病率最高的胃恶性肿瘤，约占所有胃恶性肿瘤的95%。胃腺癌是由胃腺体细胞恶化所致的，胃腺癌的发生与慢性萎缩性胃炎、胃黏膜肠化生等胃癌前病变有关，在胃黏膜癌变过程中常常伴有多种原癌基因和抑癌基因表达失衡的共同作用结果[1，2]。AGR2广泛存在于胃腺癌、乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌等腺体组织中，在这些腺体组织中存在过量表达，与肿瘤细胞的生长、增殖和转移等过程密切相关[3]。GST-π是谷胱甘肽-S-转移酶，具有稳定遗传物质，抗氧化应激的功效，与恶性肿瘤的关系密切。笔者通过对正常胃组织、慢性萎缩性胃炎、胃腺癌组织中AGR2、突变型P53、GST-π表达水平的检测和分析，探讨胃癌发生发展过程中这些指标的意义。

1资料与方法

1.1一般资料收集2012年10月-2014年5月我院病理室的胃腺癌患者(胃腺癌组)、慢性萎缩性胃炎患者(慢性萎缩性胃炎组)和无胃病患者(正常对照组)的病变部位或胃部组织标本各98例。胃腺癌组：男53例，女45例；年龄45～76岁，平均年龄(64.35±12.78)岁；按照世界卫生组织肿瘤组织学分型标准：乳头状腺癌34例，管状腺癌32例，黏液腺癌18例，印戒腺癌14例；TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期43例，Ⅲ～Ⅳ期55例。慢性萎缩性胃炎组：男56例，女42例；年龄43～74岁，平均年龄(63.14±13.75)岁；伴肠上皮化生41例。正常对照组：男54例，女44例；年龄46～75岁，平均年龄(61.57±12.41)岁。经统计学分析三组患者间性别、年龄等基线资料无显著差异，具有可比性。

1.2纳排标准胃腺癌纳入标准：(1) 术前未经任何形式的化疗或放疗治疗；(2)具有完整的病例资料和病理资料；(3)病理组织学检查确诊为胃腺癌患者。慢性萎缩性胃炎纳入标准：(1)取标本前4周内无质子泵抑制剂治疗史和抗菌药物应用史；(2)具有完整的病例资料和病理资料；(3)病理组织学检查确诊为慢性萎缩性胃炎伴或不伴肠上皮化生。正常对照组纳入标准：(1)具有完整的病例资料和病理资料；(2)经胃镜和病理组织学检查未见胃部异常。排除标准三组一致：(1)合并有身体其他部位癌变者；(2)近4周有非甾体抗炎药、抗生素、抑酸药等药物治疗史者。

1.3方法采用免疫组织化学方法检测AGR2(前梯度基因-2)、突变P53、GST-π(谷胱甘肽-S-转移酶-π)在胃癌组织、萎缩性胃炎病变组织和正常胃壁组织中的表达。所有标本均采用4%的中性甲醛固定，石蜡包埋，采用切片机将组织蜡块进行连续切片10张，每片的厚度为4μm。采用链霉素生物素法进行免疫组织化学染色，首先依次进行烤片、脱蜡、抗原修复和封闭，然后PBS缓冲液振荡洗涤3次后，加入小牛血清封闭；然后在每个切片中加入AGR2、突变P53、GST-π单克隆抗体(由南京建成生物科技有限公司提供)，阴性对照则加入PBS代替一抗，确保加入的抗体与切片充分接触，置于冰箱冷藏过夜；第2天，将切片取出置于37℃恒温箱中孵育60min，用PBS缓冲液振荡洗涤3次加入二抗链霉素生物素溶液，室温孵育40min；取出后再次用PBS缓冲液振荡洗涤3次加入DAB显色液，显色5min，苏木精衬染，脱水透明后用DPX封固。

1.4结果判定由两位病理专家对病理切片进行双盲分析，将每张切片选择10个典型的高倍视野，计数细胞在1 000个以上，AGR2、P53阳性信号主要定位于胃腺上皮细胞的细胞质和(或)细胞膜呈棕黄色颗粒，GST-π阳性染色主要定位于细胞质和(或细胞核)呈棕黄色颗粒，采用北京航空航天大学真彩色图像分析系统体视力学分析软件进行阳性细胞数的计数。根据阳性细胞数和染色强度进行计分，阳性细胞数在5%以下者判断计0分，5%～25%计1分，26%～50%计2分，51%～75%计3分，75%以上计4分。染色强度，无色为0分，浅黄色为1分，黄色为2分，棕黄色为3分。将阳性细胞数和染色强度得分相乘，即为AGR2、P53、GST-π的表达水平，得分在1分以上者判断为阳性表达。

1.5统计学处理采用SPSS13.0软件进行统计分析。计量资料组间比较采用t检验，计数资料组间比较采用卡方检验，所有统计均采用双侧检验，以P<0.05为差异具有统计学意义。

2结果

2.1AGR2、P53、GST-π在胃腺癌、慢性萎缩性胃炎和正常组织中的表达水平比较检测结果显示胃腺癌、慢性萎缩性胃炎和正常组织中AGR2、P53、GST-π表达存在显著性差异，AGR2、P53、GST-π在胃腺癌组织中表达量显著高于慢性萎缩性胃炎组织，在慢性萎缩性胃炎组织中的表达量又显著高于正常组织，P<0.05。具体结果见表1。

2.2AGR2、P53、GST-π在不同病理分期胃腺癌组织中的表达水平比较检测结果显示不同病理分期胃腺癌组织中AGR2、P53、GST-π表达水平存在显著性差异，AGR2、P53、GST-π在病理分期为Ⅰ～Ⅱ期的胃腺癌患者中表达水平显著低于病理分期为Ⅲ～Ⅳ期者，P<0.05。具体结果见表2。

表1　AGR2、P53、GST-π在胃腺癌、慢性萎缩性胃炎和

表2　AGR2、P53、GST-π在不同病理分期

3讨论

胃癌的发生是环境因素、遗传因素以及吸烟、喝酒、长期不良饮食等众多因素交互作用下产生的结果，与其他癌症的发生发展过程一样，尽管在细胞癌变之前胃腺细胞的细胞形态和结构并没有发生明显的变化，但是细胞内的一些代谢酶、蛋白质及细胞的功能已经出现了一些变化，这些变化又随着肿瘤的进展而放大。因此通过对细胞内这些蛋白质、酶的检测可以预测癌变的发生及进展。

AGR2是一种肿瘤转移分泌蛋白，在消化道发育和疾病中具有重要作用，其对保持消化道上皮细胞的增殖和终端分化具有重要作用，AGR2还能调节P53的活性，介导炎症反应和外界刺激，调控内质网应激，从而对肿瘤细胞的增殖、黏附和转移造成影响[4]。AGR2在血液、消化道、生殖系统等多种癌症组织中均有发现，是癌症的恶性病变标记物[5]。P53基因是重要的抑癌基因，P53蛋白在调控细胞周期、DNA修复和诱导细胞凋亡方面均发挥着重要作用[6]。在肿瘤组织中P53基因发生突变，突变型的P53基因具有抑制野生型P53的转录活性、诱导原癌基因异常表达等获得性的新功能，从而具有诱导肿瘤生成和促进肿瘤生长的功效[7]。GST-π具有转运亲脂性化合物和清除细胞毒性产物的作用，能减少氧化应激、清除氧自由基和稳定遗传物质，GST-π主要分布在消化道、呼吸道和泌尿系统中，其在机体内的正常表达是保护机体正常功能和癌症发生的保护因子。在癌症患者体内GST-π过度表达，与致癌物质结合发挥细胞内解毒的功效，但是这一过程需要消耗大量还原型谷胱甘肽，而还原型谷胱甘肽的活性和数量是保证细胞解毒的物质基础，因此它又反过来也促进了细胞的分裂和分化、导致细胞癌变的发生[8，9]。

笔者发现胃腺癌、慢性萎缩性胃炎和正常组织中AGR2、P53、GST-π表达存在显著性差异，AGR2、P53、

GST-π在胃腺癌组织中表达量显著高于慢性萎缩性胃炎组织，在慢性萎缩性胃炎组织中的表达量又显著高于正常组织，而且在病理分期为Ⅰ～Ⅱ期的胃腺癌患者中AGR2、P53、GST-π表达水平显著低于病理分期为Ⅲ～Ⅳ期者。可见AGR2、P53、GST-π的高水平表达与胃癌的发生发展密切相关，综合评估AGR2、P53、GST-π有助于胃癌高危人群早期筛查，以进行预防性的治疗措施。

参考文献

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(编辑羽飞)

摘要目的：检测慢性萎缩性胃炎和胃腺癌组织中AGR2、P53、GST-π的表达水平，分析其临床意义。方法：对98例慢性萎缩性胃炎、98例胃腺癌和98例正常胃壁组织的病理切片进行HE染色，采用免疫组化法检测病理切片中AGR2、P53、GST-π的表达。结果：AGR2、P53、GST-π在胃腺癌组织中表达量显著高于慢性萎缩性胃炎组织，在慢性萎缩性胃炎组织中的表达量又显著高于正常组织，P<0.05。AGR2、P53、GST-π在病理分期为Ⅰ～Ⅱ期的胃腺癌患者中表达水平显著低于病理分期为Ⅲ～Ⅳ期者，P<0.05。结论：AGR2、P53、GST-π的高水平表达与胃癌的发生发展密切相关，综合评估AGR2、P53、GST-π有助于胃癌高危人群早期筛查，以进行预防性的治疗措施。

关键词慢性萎缩性胃炎胃腺癌AGR2P53GST-π

The Expression and Its Significance of AGR2,P53,GST-π in Chronic Atrophic Gastritis and Gastric Adenocarcinoma

SUN Min.TheMedicalCentralHospitalofQionglai,ChengduCity,SichuanProvince611530

ABSTRACTObjective:To detect the level of the expression of AGR2, P53, GST-π in chronic atrophic gastritis and gastric adenocarcinoma, and analyze its clinical significance.Methods:98 cases of chronic atrophic gastritis, 98 cases of gastric cancer and 98 cases of normal gastric tissue biopsy were taken for HE staining, and immunohistochemistry method was used to detect the pathological expression of AGR2,P53,GST-π.Results:AGR2,P53,GST-π expression in gastric adenocarcinoma was significantly higher than that of chronic atrophic gastritis,chronic atrophic gastritis in the expression level was significantly higher than in normal tissue,P<0.05. The level of expression of AGR2, P53, GST-π in pathologic stage Ⅰ~Ⅱ stage was significantly lower than pathologic stage Ⅲ ~ Ⅳ,P<0.05.Conclusion:The development of high levels of AGR2, P53 and GST-π expression is closely with gastric cancer. Comprehensive assessment of AGR2, P53, GST-π is contribute to the early screening for the high risk of gastric cancer, and it is good for the preventive treatment.

KEY WORDSChronic atrophic gastritis,Gastric adenocarcinoma,AGR2,P53,GST-π

收稿日期2014-10-28

中图分类号：R573.3+2；R735.2

文献标识码：A

文章编号：1001-7585(2015)05-0566-03