细胞因子信号转导抑制因子3在早产和足月产胎盘组织中的不同表达

温　娜，张巧玉，王振国

(解放军第三〇九医院妇产科，北京 100091)

细胞因子信号转导抑制因子3在早产和足月产胎盘组织中的不同表达

温娜，张巧玉，王振国※

(解放军第三〇九医院妇产科，北京 100091)

早产是引起围生儿发病率和病死率升高的重要因素，是妊娠期常见的并发症，其发生率为5%～15%，如何有效避免早产，为优生优育提供指导，具有重要的临床意义[1]。细胞因子信号转导抑制因子(suppressors of cytokine signaling，SOCS)是近年来发现的免疫抑制因子家族，有研究提示足月妊娠产程发动与其密切相关[2]。因此,进一步深入研究SOCS3在早产患者中的表达及分布情况，可能进一步揭示早产发病的免疫学机制。因此，本研究主要分析SOCS3在早产和足月产胎盘组织中的不同表达，探讨其在早产发生中的意义，现报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料选取2013年2~10月解放军第三〇九医院收治的自发性早产患者(早产组)及足月妊娠妇女(足月组)各30例，同时根据分娩方式不同各自分为经阴道产组和剖宫产组，各15例。早产组选择标准按第6版《妇产科学》标准执行，足月组为无产科并发症及内科合并症患者，以获取两组妇女妊娠后的胎盘组织作为研究材料。其中早产组年龄20～37岁,平均(28±4)岁；孕周为28～35周,平均(32.0±2.3)周。足月组年龄20～38岁,平均(26±6)岁；孕周为37～41周,平均(38.0±1.7)周。两组孕妇在年龄、孕周等一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究已通过医院伦理委员会审查，两组孕妇均签署相关知情同意书。

1.2样本采集胎盘娩出后，于胎盘母体面中央切边长0.5 cm、厚0.5 cm的四边形组织块；胎膜选择胎膜靠近子宫侧剥取一层膜；脐带于脐带根部2 cm处选取组织切块。全部新鲜标本于24 h内甲醛固定，常规石蜡包埋行4 μm厚度的连续切片，行病理形态学检查。

1.3免疫组织化学方法定位SOCS3分布采用EnVision法免疫组织化学技术行SOCS3染色(丹麦Dako公司试剂盒)，阳性对照采用已知的阳性片，阴性对照采用PBS代替一抗，标本的分级及观察采用双盲法，由固定两名病理副主任医师审定，SOCS3蛋白表达强度(-)和(+)为阴性，以(++)和(+++)为阳性判断。判断标准参照[3]：对标本中的标本中阳性细胞百分比及染色强度进行综合评分，阳性细胞百分比为5个高倍镜(10×40)随机视野的阳性细胞百分比，根据着色强度记分：0分为无色，1分为弱(浅黄色)，2分为中(棕黄色)，3分为强(棕褐色)。再根据阳性细胞百分比记分：0分为阴性，1分为阳性细胞≤10%，2分为阳性细胞11%～50%，3分为阳性细胞51%～80%，4分为阳性细胞>80%。最后得分=着色强度与阳性细胞百分比的乘积：0分为(-)，1～4分为弱阳性(+)，5～8分为阳性(++)，9～12分为强阳性(+++)。

1.4Western blot检测胎盘组织中SOCS3蛋白表达收集新鲜组织，切成小块，加入含抑制剂的蛋白裂解液，用匀浆器低速匀浆，提取总蛋白，Braford法测定蛋白浓度。采用垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳法行电泳分离，槽式湿转法转膜，免疫杂交染色。以β肌动蛋白为内参蛋白，采用天能凝胶图像分析系统分析蛋白条带吸光度(A)光度。

1.5反转录聚合酶链反应法检测SOCS3-mRNA在胎膜中的表达选取新鲜胎盘组织(组织样本同上)，匀浆器打匀，加入1 mL TRIZOL试剂(美国Invitrogen公司)，室温静置5 min，根据操作说明提取总RNA，按Permentas公司逆转录说明书，逆转录cDNA，进行针对目的基因的聚合酶链反应。以β肌动蛋白基因为内参观察目的基因。采用天能凝胶图像分析系统读取各条带吸光度(A)光度，基因序列详见表1。

表1　PCR引物序列

PCR：聚合酶链反应；SOCS3：细胞因子信号转导抑制因子3

2结果

2.1两组胎盘组织中SOCS3蛋白表达情况比较早产组所有患者SOCS3蛋白均表达阳性或强阳性，足月组其蛋白表达程弱阳性或阴性，使用高倍显微镜观察早产组SOCS3蛋白主要表达于细胞核和细胞质，见图1；足月组主要表达于细胞质，见图2。早产组在绒毛、脐带和胎膜中SOCS3蛋白的表达均高于足月组(均P<0.01)；组间比较，足月组和早产组阻道产和剖宫产亚组SOCS3蛋白表达差异均无统计学意义(P>0.05)。见表2。

图1　胎膜中细胞因子信号转导抑制因子3表达1A：早产组；1B：足月组(免疫组织化学，×40)

组别例数绒 毛阴道产(n=15)-++++++阳性(%)剖宫产(n=15)-++++++阳性(%)足月组30113101(6.7)212101(6.7)早产组30009615(100.0)007815(100.0)T132.0123.5P0.0000.000组别例数脐 带阴道产(n=15)-++++++阳性(%)剖宫产(n=15)-++++++阳性(%)足月组30113101(6.7)113101(6.7)早产组30029413(86.7)0110414(93.3)T139.5120.5P0.0000.000组别例数胎 膜阴道产(n=15)-++++++阳性(%)剖宫产(n=15)-++++++阳性(%)足月组30211202(13.3)212101(6.7)早产组300031215(100.0)0011415(100.0)T123.0120.5P0.0000.000

SOCS3:细胞因子信号转导抑制因子3;a与足月组比较，P<0.05

2.2两组胎盘组织中SOCS3-mRNA基因表达情况早产组SOCS3-mRNA基因相对表达量为1.28±0.17，足月组为0.61±0.19，早产组SOCS3基因表达较足月组显著增强(t=23.43，P<0.01),见图2。

图2　足月产和早产胎盘组织中细胞因子信号转导

3讨论

早产是导致孕产妇和围生儿病率及病死率升高的重要原因之一[4]。因此，明确早产的原因对临床早产的治疗和预防具有重要的理论及实践意义。近年来研究表明，妊娠是一种成功的同种异体移植现象，其成功有赖于妊娠母体的免疫耐受，这种耐受一旦被破坏，则导致病理妊娠，如流产、早产等[5]。本研究结果显示，SOCS3在所有早产患者中均有不同程度的表达，无论绒毛、胎膜或脐带均有表达，其阳性表达率为100%，但在足月产孕妇中其表达率却明显较低，说明SOCS3在产程的启动、发生和进程中具有一定作用。

SOCS是近几年发现的一类新型免疫分子，包括SOCS1~7和细胞因子诱导序列等类型，SOCS3作为SOCS家族中的重要成员，是现阶段此家族成员中研究最为广泛和深入的一种[6-7]。SOCS3可表达于多种细胞中，主要通过以下3种途径影响细胞因子的信号转导：①通过抑制JAK激酶活性阻断酪氨酸激酶-转录因子信号通路(Janus kinase-signal transducer and activator of transcription signaling pathway,JAK-STAT)通路；②与细胞因子受体结合，阻断STAT活性；③通过增加蛋白酶体的活性，加速JAK-STAT途径信号蛋白的水解。SOCS3通过以上机制影响白细胞介素、肿瘤坏死因子、干扰素等多种细胞因子的信号转导，并在T细胞的分化和免疫调控中扮演重要角色，是机体固有免疫和获得性免疫的重要调节因子。本研究结果显示，早产组SOCS3的胎膜中基因表达明显较足月组增强，提示其可能通过JAK-STAT通路，调剂体内免疫平衡，激发产程提前启动[8]。

目前已有研究表明在足月妊娠的绒毛、蜕膜以及胎盘等组织中均表达SOCS的mRNA，然而在部分学者研究认为SOCS蛋白表达仅在胎盘和极少数的蜕膜组织中[9-10]。另有学者发现，在流产的妊娠组织中SOCS的mRNA和蛋白表达

一致，但并未发现SOCS蛋白表达的降低[11]。本研究结果显示，胎膜中SOCS3的基因及蛋白表达水平一致，同时发现足月组同既往研究[9]一样绒毛、胎膜等组织间SOCS表达差异无统计学意义，但在早产孕妇中，胎膜的强阳性率较其同组中脐带及绒毛中表达增高，这可能与胎盘的保护机制存在关系，需要进一步探索。本研究比较不同分娩方式的SOCS3表达，结果显示SOCS3的表达与分娩方式无关。

关于SOCS3蛋白在早产中的意义还需要进一步探索，就目前研究结果可以推测，SOCS3在早产的发生中具有一定意义，同时其作用机制可能是通过JAK/STAT信号途径干预体内调节免疫平衡。本研究为进一步深入探讨SOCS在早产中的临床意义奠定了基础，为今后早产的临床防治起到积极的指导作用。

参考文献

[1]任黎明,郭宏.早产儿免疫功能检测的临床意义[J].实用医药杂志,2006,23(5):567-568.

[2]Li Y,de Haar C,Peppelenbosch MP,etal.SOCS3 in immune regulation of inflammatory bowel disease and inflammatory bowel disease-related cancer[J].Cytokine Growth Factor Rev,2012,23(3):127-138.

[3]叶伟萍，杨祖菁.NF-κB p65在早产和足月产胎盘组织中的不同表达[J].中国医师杂志，2010,12(11)：1494-1496.

[4]Alcazar MA,Boehler E,Rother E,etal.Early postnatal hyperalimentation impairs renal function via SOCS-3 mediated renal postreceptor leptin resistance[J].Endocrinology,2012,153(3):1397-1410.

[5]Yoshimura A,Suzuki M,Sakaguchi R,etal.SOCS,Inflammation,and Autoimmunity[J].Front Immunol,2012,3:20.

[6]Sennstrom MB,Ekman G,Westergren-Thorsson G,etal.Human cervical ripening,an inflammatory process mediated by cytokines[J].Mol Hum Reprod,2000,6(4):375-381.

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[9]Blumenstein M，Keelan JA，Bowen-Shauver JM，etal.Suppressors of cytokine signaling proteins in human preterm placental tis-sues[J].J Mol Endocfinol，2005,35(1)：165-175．

[10]邢长英，归绥琪，王海燕．细胞因子信号抑制因子3(SOCS3)在先兆流产绒毛和蜕膜组织中的表达[J]．生殖和避孕，2008，28(11)：660-664．

[11]Buun C，Heding PE，Rnn SG，etal．Suppressor of cytokine signalling- 3 inhibits tumor necrosis factor-alpha induced apoptosis and signalling in betacells[J]．Mol Cell Endocrinol，2009，311(1/2)：32-38．

摘要：目的分析细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS3)在早产和足月产胎盘组织中的表达，探讨该因子在早产发生中的意义。方法选取2013年2~10月解放军第三〇九医院收治的自发性早产患者30例(早产组)，足月妊娠妇女30例(足月组)，两组依据分娩方式的不同各分为阴道产、剖宫产，各15例，收集患者的绒毛、脐带、胎膜的胎盘组织，应用免疫组织化学法检测两组孕妇各胎盘组织中的SOCS3蛋白表达情况；半定量聚合酶链反应法检测SOCS3-mRNA在胎膜的表达情况，比较2组以及组织部位间SOCS3蛋白及基因表达强度。结果早产组所有患者SOCS3蛋白均表达阳性或强阳性，足月组蛋白表达程弱阳性或阴性，其中早产组SOCS3蛋白主要表达于细胞核和细胞质，足月组主要表达于细胞质；早产组绒毛、胎膜、脐带中SOCS3蛋白表达阳性率显著强于足月组对应组织(P<0.01)。结论SOCS3蛋白表达强度与早产的发生、发展机制存在一定的联系，但与分娩方式无关。

关键词：早产；细胞因子信号转导抑制分子3；蛋白

Expression of Suppressors of Cytokine Signaling 3 in Placental Tissue between Premature Delivery and Full Term DeliveryWENNa，ZHANGQiao-yu，WANGZhen-guo.(DepartmentofGynecologyandObstetrics,ChinesePLA309thHospital,Beijing100091,China)

Abstract:ObjectiveTo analyze the expression of suppressors of cytokine signaling 3(SOCS3) in placental tissue of premature delivery and full term delivery,and to evaluate significance of the factor in premature delivery.MethodsRetrospective analysis was made on 30 patients as premature group who had spontaneous premature delivery and 30 pregnant women as full term group with normal delivery from Feb.to Oct.2013 in Chinese PLA 309th Hospital．Each group included vaginal delivery and cesarean section,15 cases respectively.The placenta tissue of villi,umbilical cord,membranes were collected,and the expression of SOCS3 protein in the above tissues was analyzed by immunohistochemistry method.RT-PCR was used to detect the expression of SOCS3-mRNA.The intensity of SOCS3 protein expression between different and tissues were compared.ResultsSOCS3 protein in all cases of premature delivery group were positive or strong positive,while weakly positive or negative in full term delivery group; SOCS3 protein expression was mainly in the nucleus and cytoplasm in premature delivery group,while was mainly expressed in the cytoplasm in full term delivery group; SOCS3 protein expression in the villi，umbilical cord and fetal membranes in the premature delivery group was stronger than full term delivery group;SOCS3 protein expression on fetal membrane was higher than villi，umbilical cord in the premature delivery group;SOCS3-mRNA expression in premature delivery group was significantly higher than the full term delivery group(allP<0.01).ConclusionThe intensity of SOCS3 protein expression has a certain correlation with occurrence and development of premature delivery,but it has no correlation with the way of delivery.

Key words：Premature delivery; Suppressors of cytokine signaling 3; Protein

收稿日期：2014-09-22修回日期：2015-01-17编辑：伊姗

基金项目：解放军第三〇九医院课题(2013MS-012)

doi：10.3969/j.issn.1006-2084.2015.15.051

中图分类号：R714.7

文献标识码：A

文章编号：1006-2084(2015)15-2828-03