survivin胞内定位表达在胸部肿瘤鉴别诊断中的意义

马建梅　李雅莉　陈　承(西安医学院临床医学院诊断学教研室，陕西　西安　70068)

survivin胞内定位表达在胸部肿瘤鉴别诊断中的意义

马建梅李雅莉1陈承2
(西安医学院临床医学院诊断学教研室，陕西西安710068)

〔摘要〕目的探讨survivin胞内定位表达在胸部肿瘤鉴别诊断中的意义。方法免疫组化检测肺癌、食管癌、乳腺癌标本(各50例)中survivin蛋白表达。结果①survivin在肺癌、食管癌、乳腺癌均为高表达。②survivin胞核表达率在肺癌、食管癌、乳腺癌无统计学差异(P＞0.05)。③survivin胞核表达率在不同分化的胸部肿瘤无统计学差异(P＞0.05)。④survivin胞核表达率在有淋巴结转移的肺癌、食管癌、乳腺癌分别为64.7％、75％、21.4％，其在有淋巴结转移的肺癌或食管癌与乳腺癌表达有统计学差异(P＜0.05)。⑤Kaplan-Meier生存分析:肺癌survivin胞核表达者生存率低于胞质表达者(P＜0.05)，食管癌、乳腺癌survivin胞核表达者生存率低于胞质表达者，但无统计学意义(P＞0.05)。结论①survivin及其胞核表达与胸部肿瘤的类别和分化程度无关。②survivin胞核表达与有淋巴结转移的肺癌、食管癌关系密切，与有淋巴结转移的乳腺癌关系不大。③survivin胞核或胞质表达与肺癌患者的预后有关。

〔关键词〕survivin;肺癌;食管癌;乳腺癌;胞核;胞质

1西安交通大学第二医院呼吸科2西安市第一医院眼科

第一作者:马建梅(1976-)，女，硕士，讲师，主要从事肺癌的防治研究。

Expression of survivin intracellular localization in thoracic neoplasms and its clinical significance

MA Jian-Mei，LI Ya-Li，CHEN Cheng．
Department of Diagnosis，Xi＇an Medical University Clinical Medicine College，Xi＇an 710068，Shaanxi，China

【Abstract】Objective To study the expression of survivin intracellular localization in thoracic neoplasms and its significance．Methods The expression of survivin protein was examined by immunohistochemical staining in specimens(50 cases each) from lung and esophageal and breast cancer．The data was analyzed by SPSS13．0 software．Results①The expression rate of survivin was high in thoracic neoplasms．②The expression rate of survivin in nuclear was similar in lung and esophageal and breast cancer．③The expression rate of survivin in nuclear was similar in various differentiation degree of thoracic neoplasms．④The expression rate of survivin in nuclear was 64．7％，75％ and 21．4％ in lymph node metastasis of lung and esophageal and breast cancer，the data of lung or esophageal cancer was significantly different from breast cancer(P＜0．05)．⑤Kaplan-Meier survival analysis showed: survival rate of expression survivin in nuclear was lower than that of cytoplasm in lung cancer patients，the difference was significant (P＜0．05)．Survival rate of expression survivin in nuclear was lower than that of cytoplasm in esophageal and breast cancer patients，the difference was no significant (P＞0．05)．Conclusions①The expression of survivin in cell and nuclear has nothing to do with category and differentiation degree of thoracic neoplasms．②The expression of survivin in nuclear is closely related to lymph node metastasis of lung cancer and esophageal cancer，but there is little correlation between the expression of survivin in nuclear and lymph node metastasis of breast cancer．③The expression of survivin in nuclear or cytoplasm may be served as a prognostic indicator of lung cancer．

【Key words】Survivin; Lung cancer; Esophageal cancer; Breast cancer; Nucleus; Cytoplasm

全国肿瘤登记中心发布的《2012中国肿瘤登记年报》表明，我国近20年来癌症呈现年轻化、发病率和死亡率走高的趋势，每年新发肿瘤病例约312万例。在我国，肺癌年发病率为35 /100 000，成为我国的第一大癌症，已被卫生部列为癌症防治的重中之重〔1〕;食管癌病死率占我国恶性肿瘤的第4位;乳腺癌发病率有逐年上升的趋势，已成为妇女因癌症死亡的第一位病因〔2〕。早期预测患病风险，及时有效干预，对肿瘤患者的生存至关重要。在肿瘤的发生发展过程中细胞增殖和凋亡失衡是重要因素，survivin就属于凋亡抑制蛋白(IAP)家族，具有明显的组织分布选择特性及强大的抗凋亡作用，在绝大部分人类肿瘤中高表达，而在正常终末分化的成人组织或细胞中不表达。目前有关survivin在单一肿瘤表达的研究较多，而其细胞内定位及在解剖位置相近的肿瘤表达未引起重视，本实验探讨survivin及其细胞内定位表达与肺癌、食管癌、乳腺癌的关系。

1　材料与方法

1.1研究对象西安交通大学第二医院2004年1月至2008 年5月手术获得的肺癌、食管癌、乳腺癌标本各50例，所选病例均进行标准的手术切除;平均年龄61.5岁;分化程度为肺癌:高分化20例、中低分化30例，有淋巴结转移27例、无淋巴结转移23例;食管癌:高分化22例、中低分化28例，有淋巴结转移26例、无淋巴结转移24例;乳腺癌:高分化26例、中低分化24例，有淋巴结转移22例、无淋巴结转移28例，患者既往均无肿瘤病史，术前均未行包括放、化疗在内的各种抗肿瘤治疗。

1.2主要试剂即用型survivin兔抗人多克隆抗体购自福州迈新生物工程有限公司，PicTureTM二步法免疫组化试剂盒(PV-6000)、PBS缓冲液、枸橼酸缓冲液、DAB显色试剂盒购自北京中山生物技术工程有限公司。

1.3survivin的检测组织标本均采用10％甲醛溶液固定、石蜡包埋，4 μm厚连续切片。免疫组化方法:①切片经二甲苯脱蜡，梯度乙醇返水;②用3％的H2O2孵育10 min以消除内源性过氧化物酶活性;③微波抗原修复(将切片置于0.01 mol/L柠檬酸缓冲液中) ;④正常血清封闭，室温20 min;⑤滴加survivin兔抗人多克隆抗体，37℃孵育1 h;⑥滴加PicTureTM，37℃孵育1 h;⑦DAB显色，蒸馏水水洗、苏木素复染2 min，分化、返蓝、脱水，二甲苯透明，封片，光镜下观察。用缓冲液代替一抗作为阴性对照。

1.4结果判定双盲阅片，survivin阳性染色为棕黄色颗粒，胞质和(或)胞核中均可出现表达。采用半定量结果判断，分别对镜下阳性细胞的百分比和染色强度给予评分。①阳性着色强度:无色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。②阳性着色细胞数:每张切片选取5个高倍镜(×400)视野，计数1 000个肿瘤细胞中阳性染色的细胞数，分为5个等级计分: 0分，＜5％; 1分，5％～25％; 2分，26％～50％; 3分，51％～75％; 4分，≥75％。以染色强度分值与阳性细胞数分值的乘积作为每一例的积分，积分为0者判定为表达阴性，积分≥1者为阳性。

1.5统计学处理采用SPSS13.0统计软件进行非参数检验、χ2检验，生存率计算采用Kaplan-Meier法，并进行log-rank检验。

2　结果

2.1survivin表达与胸部肿瘤类型的关系survivin阳性染色主要位于细胞质，部分位于胞核，部分胞核胞质均有表达，见图1。肿癌survivin积分为2.00±2.92;食管癌survivin积分为2.00±2.45;乳腺癌survivin积分为2.00±2.56;肺癌、食管癌及乳腺癌survivin总阳性率分别为76.0％，68.0％及66.0％三者无统计学差异(χ2= 1.23，P＞0.05)，分析显示: survivin表达与肿瘤类别无关，在肺癌、食管癌、乳腺癌中均为高表达。

图1　胸部肿瘤中survivin表达(DAB，×400)

2.2survivin胞核表达与胸部肿瘤类型的关系survivin胞核表达率在肺癌最高(34％)，食管癌次之为32％，乳腺癌最低，三者无统计学差异(χ2=0.14，P＞0.05)。因此，survivin胞核表达与肿瘤类别无关。

2.3survivin胞核表达与胸部肿瘤淋巴结转移的关系survivin胞核表达在有淋巴结转移的肺癌、食管癌、乳腺癌中分别占64.7％、75％、21.4％，survivin胞核表达在有淋巴结转移的肺癌、食管癌较高，无统计学差异(P = 0.708) ; survivin胞核表达在有淋巴结转移肺癌与乳腺癌的关系比较，有统计学差异(P= 0.029) ; survivin胞核表达在有淋巴结转移食管癌与乳腺癌的关系比较，有统计学差异(P= 0.009)。可见survivin胞核表达在有淋巴结转移的三类胸部肿瘤中与肺癌和食管癌关系密切。

2.4survivin胞核表达与胸部肿瘤分化程度的关系survivin胞核表达率在高分化的肺癌(29.4％)、食管癌(28.6％)、乳腺癌(31.3％)相似，在中低分化的肺癌(70.6％)、食管癌(68.7％)及乳腺癌(71.4％)也相似。survivin胞核表达在不同分化肺癌、食管癌、乳腺癌两两比较，无统计学差异(P = 1.000) ; survivin胞核表达与胸部肿瘤分化程度无关。

2.5survivin胞内定位表达与胸部肿瘤预后的关系肺癌随访结果显示: 17例胞核表达的肺癌患者中死亡13例，失访和存活4例，中位生存时间(13±2.57)个月、生存率23.53％，21例胞质表达的肺癌患者死亡11例，失访和存活10例，中位生存时间(23±5.03)个月、生存率47.62％; Kaplan-Meier生存分析显示肺癌胞核表达患者生存率低于胞质表达者(P= 0.023 4)。食管癌随访结果显示: 16例胞核表达的食管癌患者中死亡10例，失访和存活6例，生存率37.5％，中位生存时间(16± 2.95)个月，18例胞质表达的食管癌患者中死亡8例，失访和存活10例，中位生存时间(19±2.34)个月，生存率55.56％; Kaplan-Meier生存分析:食管癌胞核表达患者生存率低于胞质表达者，差异无统计学意义(P= 0.146)。乳腺癌随访结果显示: 14例胞核表达的乳腺癌患者中死亡9例，失访和存活5例，中位生存时间(12±2.95)个月，生存率35.71％，19例胞质表达的乳腺癌患者中死亡7例，失访和存活12例，中位生存时间(21± 2.29)个月、生存率63.16％。Kaplan-Meier生存分析显示乳腺癌胞核表达患者生存率低于胞质表达者，差异无统计学意义(P=0.094)。

3　讨论

survivin是1997年由耶鲁大学的Ambrosini等〔3〕利用效应细胞蛋白酶受体-1 cDNA在人类基因组库中筛选并分离出来，是迄今发现的最强的凋亡抑制因子。研究表明，survivin在人类肿瘤中均表达，但是表达比率不尽相同，孙建建等〔4〕研究显示:胰腺癌survivin蛋白的表达阳性率为85.2％，国内外报道多种肿瘤的survivin表达比率:胃癌为34.5％，乳腺癌为70.7％，非小细胞性肺癌为85.5％。桂影等〔5〕报道子宫内膜癌为76.7％，导致survivin表达比率不同是否和肿瘤类型有关? survivin在不同肿瘤表达有无相关性?本实验对恶性程度较高的食管癌、肺癌、乳腺癌标本对比，发现survivin在这三类肿瘤中均高表达，其中肺癌最高，乳腺癌最低，但表达阳性率与肿瘤类型无关。

近年survivin细胞内定位表达的研究受到关注，survivin在细胞核和细胞质表达，有报道: survivin在乳腺癌组织中定位于细胞核的占26％，细胞质染色阳性的占15％，细胞核和细胞质均染色阳性的占35％〔6〕; Grabowski等〔7〕报道的食管鳞癌细胞核阳性率80％，可见survivin细胞内定位表达的研究结果不同。本实验对肺癌、食管癌、乳腺癌survivin细胞内定位表达作研究，结果: survivin在肺癌、食管癌、乳腺癌中均主要在细胞质表达，部分在细胞核表达，部分胞核胞质均有表达，且胞核表达与肿瘤类型无关。方艳秋等〔8〕研究表明:肝癌组织survivin蛋白表达与肿瘤大小及病理分期无关，Sohn等〔9〕发现乳腺癌标本中survivin表达胞质阳性与临床分期、分化程度和淋巴结转移明确相关，本实验研究发现survivin细胞核表达与肿瘤类别、分化程度无关。有学者分析〔10〕，survivin胞核中表达可能与细胞有丝分裂的调控有关，而survivin在胞质中表达被认为具有细胞保护作用。Zhang等〔11〕证实survivin在放疗后晚期前列腺癌的患者中，survivin核染色强度评分＞191.2分的患者5年生存率及总体生存率明显比染色强度评分＜191.2分的高;在survivin与胃癌的研究中，Yao等〔12〕发现survivin表达于胞核和胞质，且多因素分析表明，细胞核内表达与较好预后有关，细胞质内survivin阳性提示预后差;亦有研究表明〔13〕survivin非小细胞肺癌的核阳性提示肿瘤的浸润和进展，提示预后不良; Fan等〔14〕综合了10份有关非小细胞肺癌的数据进行Meta分析: survivin胞核阳性与非小细胞肺癌患者术后总体生存率无关。可见，survivin亚细胞定位表达在不同肿瘤甚至同一肿瘤的预后存在不同的结论，导致这种差异与实验条件、操作方法、结果判读等有一定关系，因此本实验选取肺癌、食管癌、乳腺癌标本，避免可控的影响因素，发现survivin胞核与胞质表达与肺癌的发展、预后有密切关系，可能成为判断其恶性潜能、预测生存期的重要生物学指标。

4　参考文献

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4孙建建，李胜棉，赵松，等.survivin和caspase-3在胰腺癌组织中的表达及与预后的关系〔J〕．肿瘤防治研究，2012; 39(1) : 62-7.

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〔2014-06-20修回〕

(编辑安冉冉/曹梦园)

基金项目:国家自然科学基金项目(81100665) ;陕西省教育厅科学研究项目(2010JK805)

〔中图分类号〕R733

〔文献标识码〕A

〔文章编号〕1005-9202(2015) 16-4434-03;

doi:10.3969/j.issn.1005-9202.2015.16.007