生脉饮(党参方)的质量标准研究

杨 堃

(重庆市食品药品检验所，重庆401121)

生脉饮(党参方)是由党参、麦冬、五味子共3味药组成的复方制剂，收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第十册［1］。功能为益气复脉、养阴生津，用于气阴两亏、心悸气短、脉微自汗。原标准仅收载了药品的性状和常规检查，无处方中药物的定性鉴别和标示成分的含量测定。笔者在此对方中党参、五味子、麦冬进行了薄层色谱定性鉴别，并以高效液相色谱法制定了方中五味子(以五味子醇甲计)含量测定方法，为更好地控制生脉饮(党参方)质量提供了依据。

1 材料与方法

1．1 材料 生脉饮(党参方)(江西汇仁药业有限公司，批号130709;通化东宝永健制药有限公司，批号131011;江西南昌济生制药厂，批号130309)，党参、麦冬、五味子等处方中的各味药材由重庆桐君阁中药饮片有限公司提供。党参对照药材(批号121057－200805)、五味子对照药材(批号120922－201007)、五味子醇甲(批号110857－201211，含量测定用)、麦冬对照药材(批号121013－200908)，均购自中国药品生物制品检定所。

1．2 仪器 高效液相色谱仪Agilent HP1100(包括四元泵、柱温箱、自动进样器、二级管阵列检测器);KQ3200B型超声波清洗器(功率150 W，频率40 KHz);Sartorius Msu224s－100－du百万分之一电子分析天平;Sartorius Msa225s－100－du万分之一电子分析天平。

1．3 试药 硅胶G、硅胶GF254(化学纯，青岛海洋化工厂)、甲醇(安徽时联特种溶剂股份有限公司，HPLC级)，Milli－Q reference制备超纯水，其余试剂均为分析纯。

1．4 方法

1．4．1 党参的薄层色谱鉴别。取本品10 ml，用正丁醇振摇提取3次，每次10 ml，分取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇5 ml使溶解，作为供试品溶液。另取党参对照药材1 g，加正丁醇20 ml，加热回流1 h，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录ⅥB)试验，吸取上述2种溶液各1～2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇－乙醇－水(25∶3∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。

1．4．2 五味子的薄层色谱鉴别。取本品20 ml，用乙醚振摇提取3次，每次20 ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取五味子对照药材1 g，加水50 ml，煎煮30 min，放冷，滤过，滤液同法制成对照药材溶液。再取五味子醇甲对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录ⅥB)试验，吸取供试品溶液10μl、对照药材溶液5μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚(30～60℃)－甲酸乙酯－甲酸(13∶7∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254 nm)下检视［2］。

1．4．3 麦冬的薄层色谱鉴别。取本品10 ml，加水10 ml，盐酸2 ml，回流提取30 min，滤过，滤液用三氯甲烷振摇提取，分取三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液;另取麦冬照药材1 g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录ⅥB)试验，吸取供试品溶液5μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷－丙酮(4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰［2］。

1．4．4 五味子的含量测定。

1．4．4．1 对照品溶液的制备。精密称取五味子醇甲对照品适量，加甲醇制成每1 ml含23．06μg的溶液。

1．4．4．2 供试品溶液的制备。取“1．1”项下的批号为130709样品精密量取25 ml，置分液漏斗中，加乙醚振摇提取4次，每次25 ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，0．45 μm 孔滤膜滤过即得［2］。

1．4．4．3 色谱条件及系统适应性试验。色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇－水(55∶45)为流动相，检测波长为250 nm。流速1．0 ml/min，柱温30 ℃［2］。

1．4．4．4 标准曲线的绘制。精密吸取“1．4．4．1”项下制备的对照品溶液，各 5、10、15、20、25、30 μl分别注入液相色谱仪测定，以对照品浓度为横坐标、五味子醇甲峰峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线。

1．4．4．5 精密度试验。精密吸取“1．4．4．1”项下制备的对照品溶液10μl，重复进样5次，测定每次峰面积，计算峰面积积分值的相对标准偏差(RSD)，要求该值小于3%。

1．4．4．6 重复性试验。取“1．1”项下的样品(批号130709)，按“1．4．4．2”方法制备5 份供试品溶液，测定各份样品中五味子醇甲的含量，并计算RSD值，要求该值小于3%。

1．4．4．7 稳定性考察。取重复试验中的5份样品溶液，于常温条件放置0、4、8、12、24 h 后，各精密吸取 10 μl，测定五味子醇甲的含量，并计算RSD值。

1．4．4．8 加样回收率试验。精密量取已测定含量的同一批样品15 ml(批号130709，五味子醇甲含量为6．98μg/ml)6份，分别精密加入五味子醇甲对照品(0．092 72 mg)，按

“1．4．4．2”方法操作，测定五味子醇甲含量，计算加样回收率和RSD值。

1．4．4．9 样品含量测定。取“1．1”项下 3 批样品，按“1．4．4．2”方法制备供试品溶液，按照“1．4．4．3”的色谱条件，测定五味子醇甲含量。

2 结果与分析

2．1 薄层色谱鉴别 按“1．4．1”、“1．4．2”、“1．4．3”方法操作，所得样品薄层色谱图(图1)中的特征斑点明显，分离度好，重现性好，该方法可行。

2．2 五味子的含量测定

2．2．1 色谱条件及系统适应性试验。由对照品在200～400 nm的波长扫描结果(图2)可见，五味子醇甲在220和250 nm处有较大紫外吸收，鉴于有机化合物在230 nm以下干扰重的原因，在此选定最佳检测波长为250 nm。在该检测波长及相应色谱条件下，绘制对照品及供试样品色谱图，由图3b、c可见，对照品及供试样品中的五味子醇甲色谱峰的保留时间均为15．1 min，且色谱峰峰形尖锐，对称性好，样品所测定主峰旁边无明显杂峰，达到基线分离，经计算样品与其他组份峰的分离度＞1．5，理论塔板数按五味子醇甲峰计算不低于4 000，且阴性对照无干扰(图3a)，符合药典要求。

2．2．2 标准曲线的绘制。通过以上色谱条件定量测定对照品，绘制标准曲线，数据经过回归处理，得五味子醇甲的回归方程为 Y=1 745．6X+6．528 4(r=0．999 9)，表明五味子醇甲进样量在0．046 12～0．691 80μg范围内线性关系良好。

2．2．3 精密度试验。重复进样5次，测定每次峰面积，计算峰面积积分值的RSD为0．9%，表明精密度良好，符合含量测定要求。

2．2．4 重复性试验。取平行样5份，测定各份样品中五味子醇甲的含量，其平均含量为6．98μg/ml，RSD值为1．0%，表明用此方法测定五味子醇甲含量重现性良好。

2．2．5 稳定性考察。按“1．4．4．7”方法操作，测定五味子醇甲含量的RSD值为0．91%，表明供试品溶液在24 h基本稳定。

2．2．6 加样回收率试验。由表1可见，五味子醇甲的平均回收率为98．90%，RSD值为1．5%，表明该方法回收率较好，方法可行。

表1 五味子醇甲加样回收率试验结果

2．2．7 样品含量测定。方法确定并验证后，测定了3个厂家生脉饮(党参方)中五味子醇甲含量，平行测定3次，结果发现(表2)，3个厂家的样品用该方法均能检出五味子醇甲及其含量，表明该方法准确、可靠，可推广用于生脉饮(党参方)的质量控制。

表2 3个厂家样品测定结果(n=3)

3 讨论

生脉饮(党参方)是由党参、麦冬、五味子共3味药组成的复方制剂，方中的五味子具有益气生津、补肾宁心的作用，含有挥发油、有机酸、木脂素、三萜、倍半萜及多糖等化学成分［2］。木脂素成分中的五味子甲素、五味子乙素、五味子醇甲为五味子主要药理活性成分，在此选用五味子的特征成分五味子醇甲作含量测定来控制生脉饮(党参方)质量。

［1］卫生部药典委员会．《中华人民共和国卫生部药品标准》中药成方制剂第十册［S］．卫生部药典委员会，1995．

［2］药典委员会．中华人民共和国药典(一部)［S］．北京:中国医药科技出版社，2010．