四川省石棉县生猪胴体表面菌落总数的检测

黄 山，胡联章，杨先才，戈清强，陈雪峰，李玉霞

(1．四川省石棉县畜牧局，四川石棉625400 2．四川省石棉县科技局，四川石棉625400)

微生物的污染是影响猪肉品质的重要因素之一，肉及肉制品被微生物污染后细菌、细菌毒素常常引起人们食物中毒［1］。菌落总数是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量的每克(或毫升)检样中形成的微生物菌落总数，可反映食品是否符合卫生要求，菌落总数的多少在一定程度上反映着食品卫生质量的优劣。菌落总数越高，代表食品中细菌数量越多，食品腐败变质的速度就越快。通过检测菌落总数，可以了解屠宰生猪胴体被污染的程度(即肉品的清洁卫生状态)。基于此，笔者通过对石棉县畜禽定点屠宰场宰杀的生猪胴体进行菌落总数检测，以了解石棉县畜禽定点屠宰场的卫生质量状况，从而为改善石棉县生猪屠宰加工的卫生管理和提高产品品质提供可借鉴的科学依据。

1 材料与方法

1．1 试验材料

1．1．1 无菌生理盐水。在石棉县畜牧局实验室内按照以下步骤配制无菌生理盐水:称取8．5 g NaCl溶于1 000 ml蒸馏水中，于 121 ℃下高压灭菌 15 min［2］。

1．1．2 样品。2014年3月、5月和7月，分3次从石棉县畜禽定点屠宰场随机采集屠宰生猪胴体表面擦拭样品共计60份(每头猪采集1份样品)。每次采样20份，其中胴体经过清洁流水漂洗后的样品4份。

1．1．3 培养基。平板计数琼脂(plate count agar，PCA)，购自杭州微生物试剂有限公司。

1．1．4 仪器。超净工作台、高压灭菌器、无菌棉签、便携式采样箱、灭菌采样瓶、灭菌试管、恒温水浴锅(46±1℃)、电热恒温培养箱(36±1℃)、电子天平(感量0．1 g)、微生物显微镜、可调节移液器(配枪头)、振荡器、无菌锥形瓶(500 ml)、灭菌培养皿(直径 90 mm)、烧杯、量筒(10、50和 500 ml)、试管及试管架等。以上仪器设备均由石棉县畜牧局实验室提供。

1．2 试验方法

1．2．1 采样。用胴体体表棉拭采样法［3］，即用灭菌棉签蘸少量灭菌生理盐水略湿润后，在胴体表面约5 cm2的范围内横竖往返各擦拭5次，并随之转动棉签，然后立即剪断并投入盛有50 ml灭菌生理盐水的灭菌采样瓶中，充分摇匀，后作为样品原液。另选胴体，如此重复60次，完成60份采样。

1．2．2 菌落总数检测。依照 GB 4789．2 －2010［2］标准进行菌落总数检测。

1．2．2．1 不同稀释度样品匀液的制备。用量筒量取25 ml样品原液，置于盛有225 ml生理盐水的无菌锥形瓶，充分摇匀，制成1∶10的样品匀液。用可调节移液器吸取1∶10的样品匀液1 ml，沿管壁缓缓注入盛有9 ml生理盐水的无菌试管中，充分摇匀，制成1∶100的样品匀液。用可调节移液器吸取1∶100的样品匀液1 ml，沿管壁缓缓注入盛有9 ml生理盐水的无菌试管中，充分摇匀，制成1∶1 000的样品匀液。

1．2．2．2 接种。选择1∶100 和1∶1 000 稀释度，每个稀释度接种2个无菌平皿，每皿1 ml。同时，分别吸取1 ml生理盐水加入2个平皿作为空白对照(CK)。

及时将20 ml冷却至46℃的平板计数琼脂培养基(PCA)倾注平皿，并且小心转动平皿使其混合均匀。

1．2．2．3 培养。待琼脂凝固后，将平皿翻转，置于(36±1)℃培养箱中培养(48±2)h。

1．2．2．4 计数。菌落计数以菌落形成单位(Colony-forming units，CFU)表示。选取菌落数在30～300 CFU、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。每个稀释度的菌落数采用2个平板的平均值。出抗寒家系。由于家系内不同的单株间亦存在显著差异，仅进行家系筛选是不够的，家系间和家系内联合进行配合选择［17］是筛选优良抗寒单株的最佳方法。

(2)该试验是在一年生苗冬季假植的二年生实生苗群体中进行的评定与筛选，而进行一年生苗的假植费工费事，在生产中无法大规模实施。为结合北方大叶女贞的生产育苗，家系及单株的抗寒性筛选可在一年生苗及经平茬后再生长的“二年生根一年生干”的苗木群体中进行。此外，大叶女贞苗木的抗寒性受环境的影响很大，田间试验的边缘效应十分明显，试验中应尽可能地保持环境条件的一致性，才能得到可靠的结果。

(3)由于苗木的抗寒性和生长量不存在相关性，所以抗寒性的筛选必须在经过冬天后春季进行，一年生苗时的早期筛选没有意义。而在生产实践中，通常是抗寒性强且生长量大的单株更具有应用价值，所以生长量的选择应在抗寒单株的基础上进行。

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