过瘤胃蛋氨酸和赖氨酸对越冬期梅花鹿幼鹿生长性能、养分消化率及血清生化指标的影响

黄 健，鲍 坤，张铁涛，崔学哲，李光玉，杨福合，张 婷，王凯英

(中国农业科学院特产研究所 特种经济动物分子生物学国家重点实验室，长春 130112)

过瘤胃蛋氨酸和赖氨酸对越冬期梅花鹿幼鹿生长性能、养分消化率及血清生化指标的影响

黄 健，鲍 坤，张铁涛，崔学哲，李光玉，杨福合，张 婷，王凯英*

(中国农业科学院特产研究所 特种经济动物分子生物学国家重点实验室，长春 130112)

本试验旨在研究低蛋白质饲粮中添加过瘤胃蛋氨酸(RPM)和过瘤胃赖氨酸(RPL)对越冬期梅花鹿幼鹿生长性能、消化代谢和血清生化指标的影响。16只健康8月龄遗传背景相近的雄性梅花鹿，随机分为4个组，组间体重无显著差异(每个组4个重复，每个重复1只)，饲喂4种不同饲粮：对照组(Ⅰ组)饲喂粗蛋白质(CP)16.52%的高蛋白质饲粮，试验组饲喂CP13.70%添加0.30%RPL并分别添加0(Ⅱ组)、0.08%(Ⅲ组)、0.16%(Ⅳ组)RPM的低蛋白质饲粮，试验期为70 d。结果表明，对照组和Ⅳ组平均日增重(ADG)显著高于Ⅱ组(P<0.05)，平均日采食量(ADFI)显著高于Ⅲ组(P<0.05)，Ⅱ组料重比(F/G)显著高于其余各组(P<0.05)；对照组磷消化率极显著低于试验组(P<0.01)，且Ⅱ组显著低于Ⅲ组(P<0.05)，Ⅱ组CP和粗脂肪(EE)的消化率显著低于Ⅳ组(P<0.05)；对照组血清尿素氮(BUN)含量显著高于Ⅲ(P<0.01)组和Ⅳ组(P<0.05)，葡萄糖(GLU)和尿酸(UA)含量极显著高于其余各组(P<0.01)；其余各项指标差异不显著(P>0.05)。由此可见，饲粮CP水平从16.52%降至13.70%直接降低氮、磷排放，幼鹿生长相应延缓，添加0.16%RPM和0.30%RPL能改善幼鹿生长发育、促进物质消化、提高代谢平衡。

梅花鹿；过瘤胃蛋氨酸；过瘤胃赖氨酸；低蛋白质

梅花鹿是我国的主要鹿种之一，鹿产品药用和经济价值极高。近年来蛋白质饲料短缺不断加剧，饲料成本居高不下，调整饲粮蛋白质水平，提高蛋白质利用率，可降低饲养成本。但降低饲料蛋白质水平又难以满足动物生长需求[1-2]，低蛋白质饲料添加限制性氨基酸是解决问题的有效方法之一。反刍动物瘤胃微生物能降解游离氨基酸，添加氨基酸作用有限，过瘤胃氨基酸技术克服了这一缺点。大量研究证明，降低饲粮蛋白质水平，添加过瘤胃氨基酸不影响生产性能[3-4]，甚至提高生长性能[5-6]，氮利用率得到提高[7-8]，氮排放明显降低。低蛋白质氨基酸平衡饲粮在梅花鹿养殖是否拥有高蛋白质饲粮相同的价值，尚未见报道。

本试验旨在研究低蛋白质饲粮中添加RPM和RPL对越冬期幼鹿生长发育、消化代谢和血清生化指标的影响，为幼鹿氨基酸营养研究提供依据，并进一步探索低蛋白质平衡日粮替代高蛋白质日粮在梅花鹿运用的可能性。

1 材料与方法

1.1 试验设计

选取平均体重40 kg的8月龄健康梅花鹿幼鹿16只随机分为4个组(每组4个重复，每个重复1只)，分别饲喂 4 种不同饲粮：对照组饲喂CP16.52%的高蛋白质饲粮，试验组在CP13.70%基础饲粮添加0.30%RPL的基础上分别添加0、0.08%、0.16%RPM配制Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组饲粮。以玉米、豆粕、玉米纤维、酒糟蛋白、玉米胚芽、苜蓿草粉、糖蜜、食盐、预混料等按不同比例配制成直径0.4 cm，长度1.2～1.5 cm的全混合饲粮(TMR)颗粒料，配方及营养水平见表1，基础饲粮和试验饲粮中 Lys 和 Met 含量见表 2。试验于2014年1月16日-3月25日在中国农业科学院特产研究所茸鹿实验基地进行，在每日08∶00和16∶00饲喂两次，保证饲料充足，自由饮水。

1.2 样品采集

1.2.1 血样采集 试验第35及70天早晨饲喂前对幼鹿进行麻醉，颈静脉采血10 mL，放置至血清析出，4 000 r·min-1离心10 min，收集血清于1.5 mL EP管中，-20 ℃低温保存，待测。

1.2.2 粪样采集 试验于2月20日～2月23日连续4 d于早饲前进行粪样采集，每圈选取6个点按部分收粪法采集当天新鲜粪便。其中一份先在80 ℃下杀菌2 h，然后在65 ℃烘箱中烘干至恒重，测定干物质含量，烘干后粉碎过40目筛制成样品，测定样品中的钙和磷；另一份加10%硫酸处理后，置于65 ℃烘箱中，烘干后粉碎，过40目筛，测定粗蛋白质。

1.3 指标测定及方法

1.3.1 生长性能测定 试验第1及70天早晨饲喂前对幼鹿进行麻醉并空腹称重(精确到g)，记录体重(BW)，计算平均日增重(ADG)。于1月20日-1月23日及2月20日-2月23日记录每天采食量，计算平均日采食量(ADFI)与料重比(F/G)。

1.3.2 消化代谢指标测定 营养物质消化率采用2N盐酸不溶灰法测定，饲料及粪样干物质含量105 ℃烘干测定(GB/T6435-2006)；粗蛋白质含量采用凯氏定氮法测定(GB/T6432-94)；粗脂肪含量采用索氏抽提法测定(GB/T6433-94)；粗灰分含量采用550 ℃灼烧法测定(GB/T6438-92)；钙含量采用乙二胺四乙酸(EDTA)络合滴定法测定(GB/T6436-92)；磷含量采用钒钼酸铵比色法测定(GB/T6437-92)；ADF和NDF采用范氏洗涤纤维分析法测定(GB/T20806-2006)。均参考《饲料分析与饲料质量分析检测技术》[9]。

1.3.3 血清生化指标测定 BUN采用酶偶联法测定，TP采用双缩脲法测定，ALB采用溴甲酚绿法测定，GLOB采用总蛋白与白蛋白的差值表示，GLU采用葡萄糖氧化酶法测定，UA采用尿酸酶法测定，各试剂盒购于中生北控生物科技有限公司，采用威图-E全自动生化仪测定。

表1 基础饲粮组成及营养成分(风干基础)

Table 1 Composition and nutrient levels of basal diets (air-dry basis) %

1).每千克添加剂含有：MgO 0.076 g；ZnSO4·H2O 0.036 g；MnSO4·H2O 0.043 g；FeSO4·H2O 0.053 g；NaSeO30.031 g；VA 2 484 IU；VD3496.8 IU；VE 0.828 IU；VK30.23 mg；VB10.092 mg；VB20.69 mg；VB120.001 38 mg；叶酸 0.023 mg；烟酸/烟酰胺1.62 mg；泛酸钙1.15 mg；CaHPO45.17 g；CaCO34.57 g；2).ME为计算值，其余为实测值

1).One kilogram of premix contained the following：MgO 0.076 g；ZnSO4·H2O 0.036 g；MnSO4·H2O 0.043 g；FeSO4·H2O 0.053 g；NaSeO30.031 g；VA 2 484 IU；VD3496.8 IU；VE 0.828 IU；VK30.23 mg；VB10.092 mg；VB20.69 mg；VB120.001 38 mg；Folic acid 0.023 mg；Niacin 1.62 mg；Calcium pantothenate 1.15 mg；CaHPO45.17 g；CaCO34.57 g；2).ME was calculated value，while others were measured values

表2 基础与试验饲粮中 Lys 和 Met 含量(风干物质基础)

Table 2 Content of Lys and Met in basal diet and test diet (air dry basis) %

项目Item组别GroupⅠ组Ⅱ组Ⅲ组Ⅳ组基础饲粮中Lys水平Lyslevelinbasaldiet0.920.590.590.59基础饲粮中Met水平Metlevelinbasaldiet0.290.220.220.22赖氨酸添加量AdditionofLys0.000.300.300.30蛋氨酸添加量AdditionofMet0.000.000.080.16饲粮中Lys水平Lyslevelintestdiet0.920.890.890.89饲粮中Met水平Metlevelintestdiet0.290.220.300.38

1.4 统计方法

应用SAS9.1.3的ANOVA进程进行单因素方差分析，运用DUNCAN法进行多重比较，P<0.05为差异显著，P<0.01为差异极显著。

2 结 果

2.1 RPM和RPL对梅花鹿幼鹿生长性能的影响

如表3所示。幼鹿各组各时期BW差异不显著(P>0.05)；与对照组相比，将饲粮CP水平从16.52%降低至13.70%，Ⅱ组幼鹿BWG和ADG显著低于对照组(P<0.05)，F/G显著高于对照组(P<0.05)，Ⅲ组ADFI极显著低于对照组(P<0.01)，其余各项差异不显著(P>0.05)；各试验组之间，在低CP饲粮中添加RPM后，BWG和ADG随饲粮RPM添加水平增加而增加，Ⅳ组显著高于Ⅱ组(P<0.05)，ADFI随饲粮RPM添加水平增加先降低后增加，Ⅲ组显著低于Ⅳ组(P<0.05)，而F/G随饲粮RPM添加水平增加而降低，Ⅲ组和Ⅳ组显著低于Ⅱ组(P<0.05)。

表3 过瘤胃蛋氨酸和赖氨酸对越冬期梅花鹿幼鹿生长性能的影响

Table 3 Effects of rumen-protected methionine and lysine on growth performance in sika deer

项目Item组别Group对照组Ⅱ组Ⅲ组Ⅳ组始重/kgInitialBW38.25±4.0937.58±3.0738.75±2.0138.15±3.57末重/kgFinalBW44.85±4.2742.65±2.2444.85±2.6344.85±4.01增重/kgBWG6.60±0.71a5.08±0.88b6.10±0.72ab6.70±0.74a平均日增重/(g·d-1)ADG94.27±10.17a72.50±12.53b87.14±10.24ab95.71±7.19a平均日采食量/(kg·d-1)ADFI1.81±0.06Aa1.76±0.02ABab1.70±0.03Bb1.78±0.07ABa料重比F/G19.44±2.27b24.89±4.25a19.79±2.19b18.66±1.35b

2.2 RPM和RPL对梅花鹿幼鹿营养物质消化率的影响

越冬期梅花鹿幼鹿低蛋白质添加RPM和RPL对营养物质消化率的影响如表4所示。与对照组相比，试验组幼鹿P消化率极显著升高(P<0.01)，CP、EE和Ca消化率有降低趋势，而ADF消化率有一定降低，DM、OM和NDF消化率有一定升高，但差异不显著(P>0.05)；各试验组之间，CP和EE消化率Ⅳ组最高，Ⅱ组最低，Ⅳ组显著高于Ⅱ组(P<0.05)，DM、OM、NDF和P消化率均为Ⅲ组最高，且Ⅲ组P消化率显著高于Ⅱ组(P<0.05)，其余各项差异不显著(P>0.05)。

表4 过瘤胃蛋氨酸和赖氨酸对越冬期梅花鹿幼鹿养分消化率的影响

Table 4 Effects of rumen-protected methionine and lysine on nutrient apparent digestibility in sika deer %

项目Item组别Group对照组Ⅱ组Ⅲ组Ⅳ组干物质DM59.18±2.6460.86±1.6961.51±3.5860.94±3.07有机物OM61.34±2.4062.87±1.6763.30±3.5962.61±3.20粗蛋白质CP71.34±2.94ab68.30±1.45b71.22±2.57ab71.99±1.54a粗脂肪EE74.02±4.75ab69.44±1.71b73.59±3.16ab76.24±1.53a中性洗涤纤维NDF50.27±2.2652.20±1.8353.21±3.6552.76±3.53酸性洗涤纤维ADF41.08±1.6240.22±2.0739.33±2.8139.21±4.12钙Ca35.20±2.5231.95±4.8429.71±5.6631.24±5.15磷P50.37±1.35Bc59.13±4.82Ab65.30±2.75Aa61.36±3.06Aab

2.3 RPM和RPL对梅花鹿幼鹿血清生化指标的影响

如表5所示。各组血清TP、ALB、GLOB含量差异不显著(P>0.05)；对照组BUN显著高于Ⅲ(P<0.01)组和Ⅳ组(P<0.05)，比Ⅱ组高7.3%(P>0.05)，对照组GLU和UA含量极显著高于其他各组(P<0.01)；试验组间，血清BUN和UA含量随RPM添加量的增加先降低后增加，Ⅲ组含量最低，血清GLU含量随RPM添加量的增加先增加后降低，Ⅲ组含量最高，但差异不显著(P>0.05)。

表5 过瘤胃蛋氨酸和赖氨酸对越冬期梅花鹿幼鹿血清生化指标的影响

Table 5 Effects of rumen-protected methionine and lysine on serum biochemical indices in sika deer

项目Item组别Group对照组Ⅱ组Ⅲ组Ⅳ组总蛋白/(g·L-1)TP61.06±1.9161.28±1.8461.10±2.3661.49±2.23白蛋白/(g·L-1)ALB34.32±1.2434.24±1.4834.88±0.9334.76±2.36球蛋白/(g·L-1)GLOB26.53±1.6727.05±2.3426.23±2.6326.74±1.98尿素氮/(mmol·L-1)BUN10.97±0.29Aa10.22±0.66ABab9.8±0.95Bb9.9±0.93ABb葡萄糖/(mmol·L-1)GLU15.2±1.25A11.84±2.13B12.81±0.79B11.44±1.13B尿酸/(μmol·L-1)UA8.15±0.68A5.49±1.11B4.79±1.23B5.6±0.62B

3 讨 论

3.1 低CP饲粮添加RPM和RPL对越冬期梅花鹿幼鹿生长性能的影响

蛋白质和氨基酸是影响动物生长的主要因素[10-11]。云强等[6]发现，在CP为12.02%的饲粮中添加RPL和RPM，犊牛的ADG可超过14.67%CP的饲粮。本试验通过降低饲粮豆粕含量升高玉米含量，将饲粮CP水平从16.52%降低至13.70%，导致适口性下降，蛋白质缺乏抑制了瘤胃微生物活性和营养物质消化吸收，幼鹿采食量降低，ADG和BWG相应降低，料重比升高。王欣等[12]研究表明，幼鹿采食量和饲粮CP水平高度相关，ADG随饲粮CP增加而增加。R.M.Blome等[2]和K.S.Bartlett等[10]发现，犊牛采食量和ADG随饲粮CP提高而线性增加，与本试验结果一致。同时，本试验添加RPL和RPM后，幼鹿的氨基酸吸收能力和利用率增强，ADG和BWG随RPM增加而增加，甚至超过正常水平饲粮，与M.N.Paula等[13]在赤鹿的研究结果一致，而本试验采食量却随RPM的增加先降低后升高，料重比逐渐降低，可能是因为饲粮中添加RPM后，氨基酸平衡性得到调节，Met满足机体需要，采食相关神经及消化酶活性降低进而影响采食量，与周晓容等[14]的结果一致。可见降低饲粮CP水平，添加一定限制性氨基酸，可以缓解由于CP降低对幼鹿产生的影响。本试验中，Ⅳ组幼鹿的增重要高于对照组，这可能是由于试验组饲粮添加RPL和RPM后CP水平仅比对照组低2.62%，大多数试验研究认为，降低饲粮CP水平在4%以内和添加限制性氨基酸均不影响动物的生产性能[5，15]，这也说明，研究中所用的试验组饲粮有进一步降低CP水平的潜能。

3.2 低CP饲粮添加RPM和RPL对越冬期梅花鹿幼鹿营养物质消化率的影响

营养物质消化率在适宜蛋白质水平和氨基酸比例发挥最大潜力，偏离最适营养水平就会降低其消化率，并影响其他营养物质的消化利用。S.Y.Yang等[16]报道，梅花鹿适宜的蛋白质水平为17%。本试验将饲粮CP从16.52%降低至13.70%，CP、EE和Ca消化率有降低趋势，与于丽伟[17]和C.Lee等[18]对梅花鹿、奶牛研究结果一致，但也不尽相同，其研究认为，DM、OM、NDF和ADF消化率随饲粮CP降低而降低，本试验有一定升高，与云强等[6]和J.B.Holter等[19]结果相似，本试验仅改变了饲粮中豆粕与玉米含量，豆粕和玉米均是优质蛋白质，而于丽伟[17]和C.Lee等[18]的试验饲粮中多种成分均发生了改变，不同来源蛋白质影响了瘤胃微生物代谢和小肠吸收能力，进而影响营养物质消化[20-21]。本试验发现，幼鹿CP和EE消化率随饲粮RPM增加而增加，P消化率先增加后降低。Met和Lys作为反刍动物第一和第二限制性氨基酸，能够调节氨基酸的平衡性和协同性[22]，Met是肉毒碱和脂载体蛋白合成的必要基团[23]，也是碱性磷酸酶和钠磷协同转运蛋白的组成成分，饲粮中添加RPM能提高CP、EE和P消化率，而P消化率也会受机体代谢及酶活性改变而受到影响，为满足机体对P的需要，必须提高消化率来降低由于采食量降低带来的影响，而DM、OM、NDF消化率在中间组最高也有可能是采食量降低的结果[24]。ADF和NDF受过瘤胃氨基酸添加量的影响较小，可能是因为ADF和NDF主要是在瘤胃中消化，而添加过瘤胃氨基酸对瘤胃微生物的影响甚微，甚至有可能受氨基酸包被物的影响而有所降低。

3.3 低CP饲粮添加RPM和RPL对越冬期梅花鹿幼鹿血清生化指标的影响

优化动物饲粮中蛋白质水平和氨基酸的比例可以提高畜产品品质和蛋白质饲料的利用率，动物对蛋白质和氨基酸摄入不足或吸收障碍最直接的表现就是血清蛋白质含量降低，在蛋白质摄入过多的情况下，为保持氨基酸的平衡性，富余氨基酸分解代谢加强，不足氨基酸合成增多，血清BUN和UA等代谢产物增多，同时在蛋白质分解的过程中会相应降低由糖代谢供能的过程，提高血清GLU含量[25-26]。K.S.Bartlett等[10]研究表明，犊牛血清TP、BUN、GLU随饲粮CP增加而增加。K.M.Daniels等[27]报道，降低饲粮CP水平会显著降低犊牛血清GLU浓度。本研究表明，降低饲粮CP水平可以降低血清BUN、GLU、UA含量，而血清TP、ALB、GLOB含量并没有降低，李辉等[25]研究表明，只有部分血清蛋白质指标有差异，可能是由于试验组添加了RPL和RPM，改善机体对蛋白质和氨基酸的吸收能力，提高血清蛋白质含量，并降低蛋白质分解代谢，提高氨基酸的利用率，促进正常的糖代谢，能够基本满足能量需要，不需要动员机体过多的蛋白质。试验组间血清指标均没有显著差异，仅有BUN和UA降低和GLU升高的微弱变化，与M.N.Paula等[13]和李福昌等[28]对赤鹿和安哥拉兔研究的结果一致，而G.F.Schroeder等[29]报道，Met含量对其有显著影响，与本试验不尽相同，但变化规律是一致的，可能是因为幼鹿采食量低，组间采食RPM差异较大，甚至出现过量现象，而本试验对幼鹿补充RPM量是合理的，同时鹿科动物适应力强，能够通过部分机体调节改善营养缺陷。

4 结 论

将饲粮CP水平从16.52%降低至13.70%会延缓幼鹿生长，降低部分营养物质消化率，但可以提高磷消化率，降低血清BUN和UA含量，降低氮、磷排放，补充0.16%RPM和0.30%RPL有利于幼鹿代谢平衡，改善生长发育，提高饲料转化率，进一步降低氮、磷排放，有力的促进了茸鹿养殖业与环境的和谐发展。

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(编辑 郭云雁)

Effects of Rumen-Protected Methionine and Lysine on Growth Performance,Nutrient Digestibility and Serum Biochemical Indices in Sika Deer during the Wintering Season

HUANG Jian，BAO Kun，ZHANG Tie-tao，CUI Xue-zhe，LI Guang-yu，YANG Fu-he，ZHANG Ting，WANG Kai-ying*

(StateKeyLaboratoryforMolecularBiologyofSpecialEconomicAnimals,InstituteofSpecialWildEconomicAnimalandPlantSciences，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Changchun130112，China)

This experiment was conducted to investigate the effects of low crude protein diet supplemented rumen-protected methionine (RPM) and lysine (RPL) on growth performance，nutrient digesitibility and serum biochemical indices in sika deer during the wintering season.Sixteen healthy 8-month-old sika deer were randomly divided into 4 groups with 4 replicates per group and 1 sika deer per replicate.Sika deers were fed 4 diets：Control group (GroupⅠ) fed 16.52% crude protein (CP) basal diet，tests group fed 13.70% CP diet with 0.30% RPL and 0 (Group Ⅱ)，0.08% (Group Ⅲ)，0.16%(Group Ⅳ) RPM.The results showed that average daily gain (ADG) of control group and group Ⅳ were higher than group Ⅱ，and average daily feed intake (ADFI) of group Ⅲ was lower than control group and group Ⅳ，and feed to gain ratio (F/G) of group Ⅱ was higher than other groups(P<0.05)；digestibility of phosphorus (P) of control group was lower than other groups (P<0.01) and group Ⅱ was lower than group Ⅲ (P<0.05)，CP and ether extract(EE) digestibility of group Ⅱ were lower than group Ⅳ；serum urea nitrogen content of control group was higher than group Ⅲ (P<0.05) and group Ⅳ (P<0.01)，glucose and uric acid content of control group were higher than other groups (P<0.01)；other index had no significant influence (P>0.05).It is concluded that reducing diet CP level from 16.52% to 13.70% reduced nitrogen and phosphorus emission，slowed fawn growth，however，0.16% RPM and 0.30% RPL supplementation would enhance fawn growth，promoted nutrient digestion and metabolism balance.

sika deer；RPM；RPL；low crude protein

10.11843/j.issn.0366-6964.2015.06.013

2014-08-04

吉林省重大科技攻关专项(20140203018NY)；长春市科技支撑计划(13NK07)

黄 健(1989-)，男，四川德阳人，硕士生，主要从事特种经济动物营养与饲养研究，E-mail：hj6503310@vip.qq.com

*通信作者：王凯英，副研究员，E-mail：tcswky@126.com

S825；S815

A

0366-6964(2015)06-0974-07