TP-IgM-WB法诊断早期先天梅毒的价值

付金玲，曹玉忠，梁 军

(东莞市妇幼保健院皮肤科1、检验科2，广东 东莞 523000)

TP-IgM-WB法诊断早期先天梅毒的价值

付金玲1，曹玉忠1，梁 军2

(东莞市妇幼保健院皮肤科1、检验科2，广东 东莞 523000)

目的 评价梅毒螺旋体蛋白印迹试验(TP-IgM-WB)在诊断早期先天梅毒中的作用。方法对92例梅毒孕妇及其所产93例(1例双胞胎)新生儿血标本行梅毒螺旋体明胶凝聚实验(TPPA)、快速血浆反应素环状卡片试验（RPR）检测和TP-IgM-WB检测，探讨TP-IgM-WB在先天梅毒早期诊断中的价值。结果在梅毒孕妇所生的93例新生儿中，常规综合方法早期诊断先天梅毒26例，TP-IgM-WB法诊断先天梅毒32例，6例TP-IgM-WB血清试验阳性但常规综合方法疑似病例经18个月随访后最终确诊为先天梅毒，两种方法诊断率比较差异具有统计学意义(χ2=0.031)。结论TP-IgM-WB用于诊断早期先天梅毒优于常规综合诊断法，值得临床推广。

先天梅毒；梅毒螺旋体蛋白印迹试验；早期诊断

先天梅毒(Congenital syphilis)是指梅毒螺旋体(Treponema pallidum，TP)由母体经过胎盘进入胎儿血循环使胎儿感染而发生的梅毒，可引起胎儿流产、早产、死胎或新生儿全身性感染。先天性梅毒大多症状不明显，多为隐匿感染，更因母体内抗体因素的影响与干扰，其临床诊断缺乏准确性，难度较大，常延误治疗时机。近年来，其发病率持续增高，逐年攀升，严重影响婴幼儿身心健康，必须引起高度重视。早期诊断、及时治疗，对改善新生儿先天性梅毒的预后具有极其重要的意义。目前国内检测先天梅毒方法很多，除常规诊断方法梅毒螺旋体明胶凝聚实验(TPPA)、快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)外，梅毒螺旋体蛋白印迹试验(Treponema pallidum IgM Western blot，TP-IgM-WB)已有报道[1-2]，并显示出较高的特异性和敏感性。本文对92例梅毒孕妇及其所产93例(1例双胞胎)新生儿血标本分别行TPPA、RPR检测和TP-IgM-WB检测，现将结果报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料 在知情同意的前提下，连续性收集2010年6月至2013年12月东莞市妇幼保健院产科门诊确诊的110例梅毒孕妇，其中15例梅毒孕妇因胎儿宫内停止发育、流产、胎儿畸形等而终止妊娠，3例失访，完成随访的共有92例梅毒孕妇及其所产93例新生儿(1例双胞胎)。

1.2 梅毒诊断标准 参照美国疾病预防与控制中心(CDC)诊断标准[3]。符合下列之一者即可诊断：如母亲患有梅毒，患儿有早期先天梅毒的临床表现或者血清快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)滴度高于母亲4倍以上；或者符合可疑诊断标准者，虽然患儿血清学阳性，RPR滴度高于母亲，但增高小于2倍或以下，孕母确诊为梅毒且妊娠期间未接受过正规治疗或未治疗或口服红霉素治疗的孕母所生婴儿梅毒血清学阳性并伴有梅毒临床表现者。

1.3 标本采集 抽取梅毒孕妇产前静脉血及梅毒孕妇所生新生儿(1～30 d内)静脉血，并分离血清送检，血清标本置于-20℃冰箱低温保存。

1.4 试剂与检验方法 TPPA试剂由日本富士瑞必欧株式会社生产。RPR试剂由上海荣盛生物技术有限公司生产。TP抗体蛋白印迹试剂盒由德国欧蒙医学实验室诊断试剂有限公司生产。以上试剂均在有效期内使用并严格按试剂说明书操作。

1.5 统计学方法 应用SPSS16.0软件包进行数据汇总与统计分析。两组间诊断先天梅毒阳性例数经配对四格表资料的χ2检验(McNemar)，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 常规方法检测结果 在梅毒孕妇所产93例新生儿中，用TPPA、RPR检测确诊的早期先天梅毒为26例，其中7例有先天梅毒典型临床表现，全身皮肤出现皱褶，四肢躯干鳞屑性斑丘疹、水疱，掌跖轻度脱皮，口周皲裂等皮肤症状；2例出现肝脾肿大及骨膜炎。18例新生儿RPR滴度≥母亲RPR滴度的4倍。

2.2 TP-IgM-WB检测结果 在梅毒孕妇所产93例新生儿中，用TP-IgM-WB诊断阳性例数为32例。6例TP-IgM-WB血清试验阳性但常规综合方法疑似患者经18个月随访后最终确诊为先天梅毒。TP-IgM-WB显色条带分析显示，19例IgM抗体47 kD和17 kD条带均为阳性，13例47 kD和15 kD条带为阳性。32例TP-IgM-WB阳性患儿RPR试验滴度＞1:8者占81.25%(26/32)，见表1。

表1 32例TP-IgM-WB阳性血清RPR滴度

2.3 TP-IgM-WB与常规综合诊断比较 常规综合方法早期诊断先天梅毒26例，TP-IgM-WB法诊断先天梅毒32例，两组间诊断先天梅毒阳性例数经配对四格表资料的χ2检验(McNemar)，差异有统计学意义(χ2=0.031，P＜0.05)，TP-IgM-WB对先天梅毒的早期诊断优于常规综合诊断方法。

3 讨论

先天梅毒的诊断目前主要还是依靠患儿的病史、临床表现及实验室检查来综合判断。对于有早期胎传梅毒的临床表现或血清RPR滴度高于母亲4倍以上的患儿诊断不难，但在临床上很多梅毒患儿出生时并无早期胎传梅毒的临床表现，且梅毒血清学检查RPR滴度与产妇分娩时相同或更低，确定诊断比较困难，容易导致漏诊。与此同时，常规梅毒血清抗体检测方法如TPPA、RPR均检测IgG抗体，此类抗体能通过胎盘，进入胎儿体内，因此在新生儿检测到RPR及TPPA阳性还不能确认是否患有先天梅毒。对这些可疑病例，在生后0、2、4和6个月监测血清学变化，6个月时如呈阴性，且无先天梅毒的临床表现，可除外梅毒感染；6个月后若RPR未转阴，始终维持在低滴度水平，应每3个月检测TPPA至产后18个月，若TPPA转阴，可排除感染。这一漫长的随访过程容易导致先天梅毒患儿错失最佳的治疗时间，部分失访患儿也错失了正规的梅毒治疗。所以对无症状新生儿先天梅毒的早期诊断方法的研究尤为重要。

梅毒螺旋体像其他微生物一样，进入机体后首先刺激淋巴细胞产生IgM抗体，然后是IgG和IgA抗体。IgM相对分子质量为900 000，一般不能通过胎盘等生理屏障组织，只有胎儿在宫内受到梅毒感染，在新生儿血清中才会出现特异性TP-IgM抗体，且TP-IgM抗体治愈后可逐渐消退。治疗后血清TP-IgM抗体仍为阳性，则提示体内可能残存梅毒螺旋体；治疗后血清TP-IgM抗体阴性的患者，随访时TP-IgM抗体转为阳性，表明患者再次感染梅毒[4]。梅毒孕妇的IgG抗体可穿透胎盘滋养层，进入到胎儿的血液循环中去。因此，对常规梅毒血清学检测法TPPA及RPR检测出的抗体很难判定是否来自胎儿本身。故患儿特异性TP-IgM抗体阳性是诊断先天梅毒的有力证据[5-6]。

蛋白印迹是20世纪80年代发展起来的一种先进的检测技术，根据抗原抗体的特异性结合来检测复杂样品中某种蛋白的免疫生化技术。试验中，血清抗体与固相分离的天然或重组抗原结合后，通过与酶标记的IgG/IgM二抗结合以及酶标二抗与底物的显色反应而显示抗原特异性条带，特异性条带的数目和深浅作为判断检测结果，检测梅毒特异性多肽抗原不需特殊的仪器设备，观察结果不带有主观性。其他的IgM检测法需先分离血清IgG抗体，以防止IgG与IgM抗体竞争特异性抗原结合位点，导致IgM抗体的假阳性，WB法则不受IgG抗体存在的影响，对其他非梅毒螺旋体标本没有生物假阳性[7-8]。因此使用蛋白印迹试验检测TP-IgM抗体，具有较高的敏感度和特异度。

本研究中笔者分别对92例梅毒孕妇及其所产93例(1例双胞胎)新生儿血标本行TPPA、RPR检测和TP-IgM-WB检测，结果显示，常规综合方法早期诊断先天梅毒26例，TP-IgM-WB早期诊断先天梅毒32例，6例TP-IgM-WB血清试验阳性但常规综合方法疑似病例经18个月随访后最终确诊为先天梅毒。结果表明,TP-IgM-WB法用于先天梅毒诊断有较高的敏感性和特异性；与常规TPPA及RPR检测方法相比，TP-IgM-WB方法假阳性率和误诊率更低，准确率更高。提示在早期诊断先天梅毒中，TP-IgM-WB法具有高于常规诊断方法的价值，值得临床上大力推广应用。新生儿先天梅毒TP-IgM-WB显色条带分析显示，19例IgM抗体47 kD和17 kD条带均为阳性，13例47kD和15 kD条带为阳性。证明天然螺旋体抗原中47 kD和17 kD抗原量和免疫原性可能最强，提示在TP-IgM-WB诊断试剂的开发中，可选择47 kD和17 kD抗原用于临床诊断。

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Diagnostic value of TP-IgM-WB for early congenital syphilis.

FU Jin-ling1,CAO Yu-zhong1,LIANG Jun2. Department of Dermatology1,Department of Clinical Laboratory2,Maternal and Child Health Hospital of Dongguan City,Dongguan 523000,Guangdong,CHINA

ObjectiveTo evaluate the role of TP-IgM-WB for the diagnosis of early congenital syphilis.MethodsTraditional comprehensive approach(TPPA and RPR)and TP-IgM-WB were used to test the sera of 93 neonates born by 92 pregnant women with syphilis.The value of TP-IgM-WB in the diagnosis of early congenital syphilis was investigated.ResultsIn the 93 neonates,26 were diagnosed as early congenital syphilis by traditional comprehensive approach(TPPA and RPR),and 32 were diagnosed as early congenital syphilis by TP-IgM-WB.The 6 suspected cases by traditional comprehensive approach with positive serological response to TP-IgM-WB were confirmed as early congenital syphilis finally after 18 months of follow-up.There was a significant difference between the two methods(χ2=0.031).ConclusionThe TP-IgM-WB as a diagnostic method for early congenital syphilis is superior to traditional comprehensive approach,which deserves clinical expansion.

Congenital syphilis;TP-IgM-WB;Early diagnosis

R759.1

A

1003—6350（2015）05—0682—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.05.0244

2014-08-03)

东莞市科技局资助项目（编号：201310515000105）

付金玲。E-mail：fujl589@163.com