非线性化学指纹图谱法测定软膏剂含量①

董 宇，蔡 雨，方 丹，刘 丽，彭玉生，王东艳，李守君*

(1.佳木斯大学药学院，黑龙江 佳木斯154007;2.佳木斯中心医院，黑龙江 佳木斯154007)

0 引 言

中药复方祛痘软膏剂是由黄芩、苦参和芦荟三种药材按比例混合提取所得浸膏，与基质配制成O/W 型膏剂.基质成分主要为有机试剂，与主药分离非常困难，对含量测定产生干扰，因此，为了准确测得软膏剂含量，而主药与基质的分离技术要求高，从而增加了软膏剂分析的难度［1～3］.非线性化学指纹图谱技术在中药分析领域被广泛应用，是一种方便有效分析中药的方法［4，5］.李守君等人采用非线性化学指纹图谱技术优化大黄最佳提取工艺及鉴别黄连［6，7］，张海珍等人采用非线性化学指纹图谱技术测定蜂蜜中糖含量［8］.本文利用中药有效活性成分参与化学振荡反应而软膏基质不参与反应这一特点，对中药祛痘软膏剂浸膏含量进行测定.该方法不需要进行主药和基质分离的前处理［9］，具有操作简便，结果准确等特点，为中药软膏剂质量评价研究开拓新思路.

1 材 料

超声波清洗器(KQ－500DE 型，昆山市超声仪器有限公司);超级恒温器(SC－15 型，宁波海曙天恒仪器厂);电化学工作站(LK2005 型，天津兰力克科技有限公司);铂电极(213 型，上海精密科学仪器有限公司);甘汞电极(217 型，上海精密科学仪器有限公司);天平(BP211D，德国Sartorius);硫酸、硫酸锰、丙酮、溴酸钾等试剂均为分析纯，水均为二次蒸馏水;苦参、黄芩、芦荟购于药材市场(由黑龙江中医药大学佳木斯学院陈效忠鉴定).

2 实验方法与结果

2.1 样品的制备

2.1.1 对照样品溶液的制备

取中药浸膏1.0031g，用20mL 蒸馏水45℃超声溶解15min，置于容量瓶中定容，作为原液，在原液中取1，2，3，4，5mL 分别置于25mL 容量瓶中定容，即为对照品溶液.

取空白基质5g，用10mL 蒸馏水稀释，30℃超声分散20min，置于容量瓶中定容，即为空白对照品溶液.

2.1.2 供试品溶液的制备

取中药复方祛痘软膏5g，用10mL 蒸馏水稀释，30℃超声分散20min，置于容量瓶中定容，即为供试品溶液.

2.2 非线性化学指纹图谱测定方法

开启电化学工作站，设定实验参数.当温度达到37±0.02℃时，依次加入一定浓度的硫酸溶液、硫酸锰溶液、丙酮溶液各10mL，加入待测溶液4mL，600r/min 搅 拌20min，加 入 KBrO3溶 液10mL，计时开始.以铂电极作指示电极，以217 型饱和甘汞电极为参比电极，记录电势(E)随时间(t)的变化，获得非线性化学指纹图谱，以诱导时间为技术考察指标，对待测样品进行测量.

2.3 空白对照品与供试品的非线性化学指纹图谱比较

精密移取空白对照品溶液和供试样品溶液，按照2.2 实验方法检测.由图1 可知，在0 ～8000s 内空白基质的非线性化学指纹图谱没有产生振荡波形，是一条平滑曲线，而供试样品在5000 ～7000s产生化学振荡图谱，表明空白基质在软膏剂检测计量范围内不产生化学振荡，对中药复方软膏剂含量测定没有影响.

图1 空白对照品与供试品的非线性化学指纹图谱比较

2.4 单味药材提取物软膏剂与供试样品的非线性化学指纹图谱比较

精密称取苦参、黄芩、芦荟提取物与空白基质，分别配制成苦参、黄芩、芦荟提取物含量为50mg/g 的软膏剂，按照2.1 方法制备苦参、黄芩、芦荟软膏供试品溶液，按照2.2 方法，分别以苦参、黄芩、芦荟软膏供试品溶液为耗散底物进行检测，作非线性化学振荡指纹图谱，比较苦参、黄芩、芦荟软膏剂与供试样品图谱的变化.如图2 可以看出，同一实验条件下，苦参、黄芪、芦荟单味药提取物软膏剂与供试样品在非线性化学指纹图谱的特征参数诱导时间、起振电压、最大振幅和振荡寿命有明显的差别.因此，通过非线性化学指纹图谱可以明显看出本复方软膏剂中药是否全被加入.

图2 单味药提取物软膏剂与供试品的非线性化学指纹图谱比较

2.5 标准曲线的绘制

精密移取2.1 的5 个对照品溶液，按2.2 方法进行检测，以诱导时间为指标，绘制诱导时间(t)与浓度(c)的曲线，获得回归方程:t=6898－183.6c，R=0.9972，由图3 可知，不同含量中药复方祛痘软膏剂的诱导时间随含量增大而减小，中药浸膏浓度在6 ～34 mg·mL－1范围内线性相关良好.

图3 中药复方软膏剂标准曲线

2.6 精密度考察

精密称取浓度为70mg/g 中药复方祛痘软膏剂10g，按照2.1 制备待测溶液，按照2.2 方法测量，重复5 次，隔日同法测量5 次，参照标准曲线，测得日内RSD 为1.08%，日间RSD 为1.69%.

2.7 加样回收率考察

精密称取浸膏及空白基质，配成含量为50mg/g，70mg/g，90mg/g 软膏，每种软膏精密称取5g，按照2.1 方法配成溶液，按照2.2 方法测量，每个样品平行测量3 次，参照标准曲线，测得回收率在99 ～102%之间，平均回收率在99 ～101%之间，RSD ＜1%.

2.8 复方中药祛痘软膏剂中药浸膏含量测定

按照2.2 方法，对三批样品进行测量，每批样品平行测量3 次，参照《中国药典》2010 版，软膏剂含量限度制定为标示量的90 ～110%.由表1 可知，三批样品含量平均值依次为:5.07%、4.93%、4.97%，三批样品的含量检测限度在98.6 ～101.4%，均在90 ～110%之间，符合药典软膏剂含量限度的规定，达到试验设计要求.

表1 样品测定结果(n=3)

3 讨 论

3.1 搅拌速度对复方中药软膏剂非线性化学指纹图谱的影响

搅拌速度主要影响体系物质混合的均匀程度.由于软膏剂制备时原料大多为油脂类，具有粘稠性，当被加入反应溶液体系时，提高了体系溶液的黏度，增加溶液混合难度.因此采用非线性化学指纹图谱测量软膏剂时，搅拌速度的选择较为重要，搅拌速度过快或过慢，导致混合不均匀现象，获得的非线性化学指纹图谱不理想.本实验通过实验测定，搅拌转数为600r/min 时，获得指纹图谱较理想.

3.2 非线性化学指纹图谱鉴别中药复方软膏剂真伪的探讨

含量测定的难点在于基质的干扰，采用高效液相色谱测定时，需要选择适当的溶媒溶解基质或主药［1］，应该将主药与基质分离.非线性化学指纹图谱技术的特点是对中药群集信息的研究［10］，不必对样品有效部位分离，尤其在中药复方分析研究时，这一特点表现出极大的优势.本文综合考虑上述因素，利用非线性化学指纹图谱技术具有解决上述问题的特点.通过对比基质、单味药和成品指纹图谱的比较区别，可以用来鉴别中药复方软膏剂是否含有处方药材，从而，可建立一种简单鉴别中药复方软膏剂真伪的新方法.

4 结 论

在主药与基质不分离的前提下，采用非线性化学指纹图谱技术，对中药复方软膏剂含量进行测定，获得重现性良好的中药复方软膏剂非线性化学指纹图谱，此图谱能够很好地表征中药复方软膏剂的中药有效成分.以诱导时间和中药加样量为指标建立标准曲线，呈现良好的线性关系.应用非线性化学指纹图谱技术，以诱导时间为技术指标检测中药复方软膏剂含量的方法可行，该方法科学合理、操作简便快捷、重现性良好，可作为中药复方软膏剂含量检测的新方法.

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