马立克氏病与禽白血病的鉴别诊断方法

张文全　福建省永春县农业局蓬壶畜牧兽医站　362609

马立克氏病与禽白血病的鉴别诊断方法

张文全福建省永春县农业局蓬壶畜牧兽医站362609

介绍当前马立克氏病与禽白血病的常用鉴别诊断方法，分析各种方法的优势和不足，同时提出自己的看法。

马立克氏病禽白血病鉴别诊断方法

马立克氏病（Marek'd isease，MD）是由马立克氏病毒 （Marek'disease viruse，MDV）引发的肿瘤性疾病，该病毒属疱疹病毒科α病毒亚科成员，其3个血清型中只有血清Ⅰ型的毒株具有致瘤性，主要侵害外周神经系统，以周围神经、性腺、虹膜、内脏器官、肌肉和皮肤的单独或多发的单核细胞浸润为特征，引起鸡淋巴组织增生。

禽白血病是由禽白血病病毒 （avian leucosis virus，ALV）引起的家禽多种肿瘤性疾病的总称，主要以造血细胞恶性增生为特征，包括淋巴细胞性白血病、成红细胞性白血病、成髓细胞性白血病、骨髓细胞瘤病等［1］。禽白血病不感染人，我国将其列为二类动物疫病，到目前为止，该病在全国已有报道，其范围不断扩大，给养鸡业带来了严重的损失。

临床上，除了血管瘤型白血病具有较为典型的临床症状外，马立克氏病与禽白血病临床症状较为相似，现在介绍两种疾病的鉴别诊断常见方法。

1　组织病理学变化

通常人们通过发病日龄、法氏囊的萎缩情况以及病理组织学观察来进行区分内脏型马立克氏病与淋巴性白血病［2］。有学者认为马立克氏病常侵害外周神经、皮肤和肌肉、眼的虹膜，法氏囊被侵害时常出现萎缩，而淋巴性白血病较少如此。另外，马立克氏病的肿瘤组织是由小到大的淋巴细胞成淋巴细胞浆细胞等混合组成而，淋巴性白血病的肿瘤细胞常为成淋巴细胞组成，这点有重要的诊断意义［3］。但是这类方式受主观和经验影响判断，并且对于临床特征不明显者进行鉴别诊断较为困难。

2　血清学方法

琼脂双向扩散试验（AGIP）是抗原和抗体在凝胶内发生结合形成沉淀线的反应。用羽囊浸液或直接用羽囊作琼脂扩散试验检查马立克氏病和禽白血病是一种简单易行的方法，在基层兽医单位和鸡场内均可进行。该方法的缺点是，敏感性较差，出现一定的假阳性。试验证明，用羽囊琼扩法不能检出全部马立克氏病感染的鸡［4］。并且这一试验过程需要逐只拔羽取髓，易使鸡产生应激反应，通常AGIP的反应过程需2 d左右。耗时较长。

使用ELISA方法对禽白血病进行检测，目前有禽白血病A、B亚群和J亚群抗体检测试剂盒，而对其他亚群的检测则缺少成型试剂盒。由于在ALV感染的鸡中有4种血清学类型：无病毒血症又无抗体（V-A-）；无病毒血症，而有抗体（V-A+）；有病毒血症又有抗体（V+A+）；有病毒血症而无抗体（V+A-）。因此使用ELISA检测易出现假阳性。有一些ELISA方法是通过检测p27抗原确立禽白血病的，该抗原在内源性病毒和外源性病毒中均属保守的一种蛋白质，利用ELISA所检测出的阳性结果并不能证实这种蛋白来源于外源性病毒。

3　分子生物学方法

建立特异性的PCR和RT-PCR诊断方法，可检测病毒感染鸡多种组织中的前病毒和病毒RNA。与传统的诊断方法相比，PCR方法优点明显，特异性强，灵敏度高，可以检测出样品中微量DNA（Ifg），而RT-PCR可以通过对病毒感染组织或细胞培养物等样本进行反转录，检测到病毒的RNA。国外学者Fonseca K等在LTR的ALV基因组的U3和U5区分别合成内外两对引物，以单管巢式PCR方法检测病料样本，可直接检测外源性白血病病毒；国内金志强等［5］、陈乙娥［6］使用该方法对具有致病致病性的外源性ALV进行了检测，取得了良好的效果。Silva R F设计出用于扩增MDV-l特异的l32 bpr序列的引物［7］，它可用于鉴别致弱株和野毒株以及肿瘤中的病毒DNA，也可用PCR来鉴别引起鸡淋巴白血病病毒。汪德生等［8］用该方法对马立克病病毒强毒株SB-08、马立克氏病CVI988/Rispens致弱疫苗、鸡产蛋下降综合征病毒、火鸡疱疹病毒，鸡痘病毒、ALVJ亚群和ALV-A亚群前病毒进行PCR检测。结果扩增图谱显示MDV强毒株SB-08扩增出预期314 bp条带；而CVI988弱毒疫苗显现182、314、446、578、710 bp等多个条带；而HVT疫苗毒株、鸡产蛋下降综合征病毒HS-1分离毒株、鸡痘疫苗毒株、禽白血病ALV-J亚群和ALV-A亚群前病毒DNA样本均无扩增条带出现。说明利用PCR检测方法对区分马立克氏病和禽白血病具有敏感、快捷、准确的特点。

4　经验总结

随着非典型症状的出现，通过临床鉴别MDV 及ALV感染具有较强的局限性，通过病理组织学方式进行鉴别诊断，则受限于诊断者的经验和水平，往往不能做出正确的判断。血清学诊断技术相对容易，准确，可检测样本较大，但ELISA方法往往受限于市场检测试剂盒的供应，AGIP会出现假阳性情况；分子生物学方法准确，但不足之处在于需要技术员掌握较高的分子生物学技术，并且要求的实验室环境条件较高，不便于大量样本的检测［9］。因此，在实际工作中，选择何种方式进行两种疾病的鉴别诊断，还需要因地制宜，并在实践中探索出更为有效的诊断方法。

［1］辛朝安.禽病学［M］.2版.北京：中国农业出版社，2003：113-114.

［2］费强.如何防治鸡马立克氏病［J］.家禽科学，2014（1）：37-38.

［3］屈亚锦，刘思当.禽白血病的防控［J］.北方牧业，2013（4）：15.

［4］骆春阳，林在尧，张如宽.应用羽囊琼脂扩散法检查鸡马立克氏病的试验报告［J］.江苏农学院学报，1980（1）：8-13.

［5］金志强，罗明星，李永明，等.单管套式PCR检测外源性禽白血病病毒［J］.动物医学进展，2009（11）：41-45.

［6］陈乙娥.一例血管瘤型白血病的诊断 ［J］.福建畜牧兽医，2014，36（5）：17-18.

［7］Silva R F.Differentiation of pathogenic and non-pathogenic se-rotype 1 Marek's disease viruses（MDVs）by the polymerasechain reaction amplification of the tandem direct repeat w ith the MDV genome［J］.Avian Dis，1992，36（3）：521-528.

［8］汪德生，李永明，史开志，等.鸡马立克病病毒强毒与疫苗毒PCR鉴别检测方法的建立［J］.动物医学进展，2010，31（7）：26-30.

［9］奚德华，梁有志，尹丽萍，等.规模化种禽场禽白血病检测方法的比较及初步应用［J］.中国家禽，2014，36（4）：14-17.

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1003-4331（2015）03-0016-02