复方金铃四逆四物失笑散对小鼠急性毒性实验研究

白春霞，孙国娟，谢 萍*，冯 俭*，蒋 川，李 倩，崔静怡

(1. 成都中医药大学，四川 成都 610032；2.成都中医药大学附属医院，四川 成都 610032)



复方金铃四逆四物失笑散对小鼠急性毒性实验研究

白春霞1，孙国娟2，谢 萍2*，冯 俭2*，蒋 川1，李 倩1，崔静怡1

(1. 成都中医药大学，四川 成都 610032；2.成都中医药大学附属医院，四川 成都 610032)

目的：研究复方金铃四逆四物失笑散对小鼠的急性毒性，为临床安全用药提供科学依据。方法：小鼠单次灌胃给药进行急性毒性预实验，确定半数致死剂量(LD50)。采用24 h内以药液最大浓度和最大给药容积灌胃小鼠3次，连续14天观察受试药物对小鼠指标影响，测定最大给药量。结果：小鼠1 天内最大给药量为192g(生药)/kg，相当于成人临床推荐日用量的217.4倍。结论：复方金铃四逆四物失笑散对小鼠无明显毒性反应，临床常用剂量安全性高。

复方金铃四逆四物失笑散；KM小鼠；半数致死剂量；最大给药量

复方金铃四逆四物失笑散(以下简称复方失笑散)为我院名老中医针对原发性痛经实证病机“不通则痛”，在古方基础上加减而得，处方主要由延胡索、白芍、枳壳、当归、五灵脂等药材组成，具有理气活血、化瘀止痛之效。此方临床应用已有数十年，疗效确切，在长期临床应用中尚未发现毒性和不良反应报道，但缺乏有力依据。本实验通过复方失笑散对小鼠的急性毒性实验研究，为该处方的安全性进行科学、客观评估，为本课题的进一步研究提供依据。

1 材料

1.1 试药与仪器

复方失笑散主要由川楝子、延胡索、白芍、枳壳、当归、五灵脂等11味药材组成，均购于成都中医药大学附属医院中药房；采用水提法将药材浸泡，热回流提取3次，去渣合并，药液浓缩至1.6 g(生药)/mL，装瓶，4℃冰箱保存备用。HZT-A+200 型电子天平(福州华志科学仪器有限公司)；LMQ-R-3260B高压蒸汽灭菌器(山东新华)。

1.2 实验动物

昆明种小鼠，雌雄各半，SPF级别，体重18～22g，由四川省中医药研究所实验动物中心提供，动物合格许可证号：SCXK(川)2013-19。

1.3 饲养条件

室内温度为23～27℃，相对湿度为45%～55%，明暗周期为12/12h，分笼饲养，试验期间自由饮用灭菌纯化水(灭菌方法：经121℃灭菌30min，有效期为14天)，食用标准：普通柱状饲料。

2 方法[1-5]与结果

2.1 半数致死量(LD50)预实验

2.1.1 药物剂量与配制 复方失笑散流浸膏，深棕色，最大剂量浓度为1.6g(生药)/mL，临用前用灭菌纯化水配制药液，预实验设三个剂量组，组间剂量比为1∶ 0.7，给药剂量分别为生药64.00g(生药)/kg、44.80g(生药)/kg、31.36g(生药)/kg，等容积不等浓度灌胃小鼠，给药容积为0.4mL/10g。

2.1.2 分组与给药 KM小鼠24只，预先适应性饲养4天，按体重随机分为三组，每组8只，雌雄各半，给药前禁食不禁水14h。按照实验剂量设计单次灌胃小鼠，给药后严密观察并记录小鼠的一般情况(行为、皮毛、摄食量、分泌物、排泄物、体重变化等)及中毒、死亡情况，2h后自由饮水和进食，对濒死及死亡动物及时进行尸检，肉眼观察主要脏器心、肝、脾、肺、肾有无病理变化，若发现异样，及时进行病理组织学检查，连续观察14天。

2.1.3 结果 给药后，小鼠喜静卧，活动量减少，大便稍湿，于第2 天恢复正常，实验期间小鼠均无明显中毒现象，无死亡，皮毛光泽，眼、鼻、口、耳无异常分泌物，饮食与排泄物均正常，未见其他异常行为发生，结果见表1。预实验结果表明，本品的半数致死量(LD50)无法测出。

表1 复方失笑散LD50测定结果

2.2 最大给药量试验

2.2.1 分组与给药 KM小鼠40只，标记，称重，按体重随机分为给药组和空白对照组，每组雌、雄各半，给药前禁食不禁水14h，给药组以本品可供灌胃小鼠的最大浓度1.6g/mL，最大给药容积0.4mL/10g，24h内灌胃给药3次(相当于临床成人用量的217.4倍)，间隔时间为4h。空白对照组给予等容积的灭菌水，给药2h后自由饮水和进食，观察期14天。

2.2.2 观察指标 给药前及给药后每天固定时间，测量小鼠体重、饲料和水加入量与剩余量。观察给药后所有小鼠一般状态，包括行为活动、皮毛色泽、鼻眼和口耳有无异常分泌物及瞳孔扩大或缩小，腹部胀气或收缩，大便性状与颜色，并记录各组小鼠毒性反应及死亡情况等。观察期结束后，脱颈椎处死小鼠，剖检各组小鼠主要脏器是否病变，并测定肝、心、脾、肺、肾、雌鼠卵巢、子宫及雄鼠睾丸的湿重，计算脏器系数。

2.2.4 结果 对小鼠一般情况的影响：每次给药后及每天进行一次观察统计。①运动指标：一次给药后，部分动物2min后出现整理毛发、自主活动减少，喜静卧不动；第2次给药后，部分小鼠1min后出现探究、整理毛发，自主活动减少；第3次给药后情况同第2次，第2天小鼠基本恢复正常。②胃肠指标：一次给药约2h后，个别小鼠大便稍稀，第2次给药约1.5h后，个别小鼠出现大便稀，肛周有污黑现象，第3次给药后同第2次，第2天，症状缓解，大便成形但稍湿，第3 天基本恢复正常。③其他指标：三次给药后及观察期内，小鼠均未出现抽搐、肌颤、麻痹，对外界反应灵敏，瞳孔无扩大或缩小，眼睑无下垂，分泌物未见异常，呼吸正常。试验期间，小鼠无明显毒性反应，无死亡。对小鼠体重的影响： 给药前禁食14h，各组小鼠体重均有下降，给药后恢复正常进食饮水，各组动物体重呈增长趋势。雌性小鼠，给药组与对照组均数比较，体重均无显著性差异(P>0.05)；雄性小鼠，两组均数比较，除第3 天有显著性差异(P<0.05)，其它均无明显差异，结果见表2、图1。对小鼠进食量的影响： 灌胃后恢复进食，各组小鼠进食量均有所降低，且给药组小鼠进食量显著降低，于第3天后均恢复正常，并呈增长趋势。雌性小鼠，与对照组比较，除了给药当天进食量有显著差异(P<0.05)，其它均未见明显差异；雄性小鼠的进食量，与对照组比较，均未见显著性差异，结果见表3、图2。对小鼠饮水量的影响： 灌胃后各组小鼠恢复正常饮水，给药组的动物饮水量显著增加，对照组增加不明显，之后均呈正常增长趋势，给药组与对照组饮水量均数比较，均未见明显差异，结果见表4、图3。对小鼠主要脏器的影响： 剖检小鼠，肉眼观察结果显示，各组动物主要脏器心、肝、脾、肺、肾、子宫、卵巢/睾丸均未见病变等异常。与对照组比较，给药组脏器系数均无显著性差异(P>0.05)，结果见表5。

表2 复方失笑散急性毒性实验对小鼠体重的影响 ±s，g)

图1 复方失笑散急性毒性实验对小鼠体重的影响

图2 复方失笑散急性毒性实验对小鼠进食量的影响

表3 复方失笑散急性毒性实验对小鼠进食量的影响±s，g)

表4 复方失笑散急性毒性实验对小鼠饮水量的影响 ±s,mL)

图3 复方失笑散急性毒性实验对小鼠饮水量的影响

表5 复方失笑散急性毒性实验对小鼠主要脏器系数的影响±s,n =10)

注：脏器系数 = 脏器重量(g) /动物体重(g) ×100。

3 讨论

本方在半数致死剂量(LD50)实验中未发现动物死亡，说明复方失笑散的毒性较低，以本品最大给药浓度和最大给药体积在24h内灌胃小鼠3次，给药后，部分动物表现为多聚少动，且个别小鼠出现大便稀，肛周有污黑现象，分析原因可能与大剂量灌胃给药有关，肛周污黑是由稀便引起，并于第2～3天逐渐恢复正常。

连续观察14天发现，雄性小鼠，给药组体质量与对照组比较，第3天有统计学差异(P<0.05)，分析是由药效引起稀便造成，未发现有关毒理信息，从均数上可见给药组动物体重总体呈逐日增长趋势。给药当天，各组小鼠进食量均有所减少，且雌性小鼠进食量与对照组比较有显著性差异(P<0.05)，可能是在满负荷灌胃刺激下，小鼠产生一定的胀腹感和不适感而引起，之后呈正常增长趋势,均未见统计学差异。小鼠饮水量的变化，与空白组比较无显著性差异，肉眼观察动物各主要脏器，未发现明显异常，且各脏器系数均在同一水平。

复方失笑散的临床常用生药剂量为0.88g·kg-1·d-1(按照成人体重的 60kg换算)，本品小鼠急性毒性实验的最大给药浓度64g(生药)·kg-1、最大给药体积 40mL·kg-1在24 h内灌胃小鼠3次，则小鼠1 天累计最大给药量为 192g(生药)·kg-1，相当于成人临床推荐剂量的 217.4倍。结合对动物一般状态、体质量、进食量、饮水量及主要脏器系数的影响结果，均表明复方失笑散的毒性较低，临床常用剂量安全性高。

[1] 陈奇.中药药理研究方法学[M] .第3版.北京:人民卫生出版社,2011:107-132.

[2] 《中药、天然药物急性毒性研究技术指导原则》课题研究组.中药、天然药物急性毒性研究技术指导原则[S].2005:1-8.

[3] 陈淑云,卞如濂,陈修,等.药理实验方法学[M].第3版.北京:人民卫生出版社,2002:227-231.

[4] 周继刚,贺海波,周创,等.益贞颗粒急性毒性实验研究[J].三峡大学学报：自然科学版,2013,35(5):110-113.

[5] 蒋平,杨阳,孙阳,等.养胃颗粒灌胃给药对小鼠的急性毒性实验[J].时珍国医国药,2014,25(4):841-843.

(责任编辑：宋勇刚)

Experimental Study on Acute Toxicity of Formula Jinlingsinisiwushixiao Powder on Mice

Bai Chunxia1，Sun Guojuan2，Xie Ping2*，Feng Jian2*，Jiang Chuan1，Li Qian1，Cui Jingyi1

(1.Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 610032, China; 2.The Affiliated Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 610032, China)

Objective:The acute toxicity study of Formula Jinlingsinisiwushixiao Powder on mice was investigated to guide the clinical applications.Methods:The median lethal doses(LD50) was determined by the pre-experiment of acute toxicity with single taking gavage different dosage to the mice.To measure the maximum dosage,the mice were given the highest concentration and largest volume drug 3 times a day,and were observed for successive 14 days.Results:The maximum dosage was 192g(crude drug) /kg,which is equivalent to 217.4 times of the clinical dose,and did not cause any acute toxicity.Conclusion:Formula Jinlingsinisiwushixiao Powder is of low toxicity,which are relatively safe and reliable to be taken at the prescribed dosage.

Formula Jinlingsinisiwushixiao Powder; KM mice; LD50; The Maximum Dosage

2014-10-20

国家自然科学基金资助项目(81373680)

白春霞(1988-)，女，成都中医药大学硕士研究生，研究方向为中药化学成分及中药质量标准。

谢萍(1965-)，女，成都中医药大学教授，主任医师，硕士生导师，研究方向为中医妇科肿瘤，E-mail:fxp2410@126.com；冯俭(1963-)，男，成都中医药大学教授，硕士生导师，研究方向为中药化学成分及中药制剂，E-mail:fengjan222@tom.com

R285.5

A

1673-2197(2015)05-0005-03

10.11954/ytctyy.201505003