食管癌患者P21、P53、HSP70的表达及临床意义探讨

顾祥仕

食管癌是临床常见恶性肿瘤，其发病率较高，居恶性肿瘤发病率前3位，病情发展迅速，且预后较差，对患者生命安全造成极大威胁。我国是食管癌高发国家，据相关文献报道，我国每年死于食管癌的患者高达15万[1]。食管癌的发生与微量元素、维生素的缺乏、化学刺激，经常食用温度较高的食物、吸烟、喝酒等不良生活习惯有关。从分子水平上来说，食管癌的发生、发展与其他癌症相同，均与原癌基因被激活，抗凋亡基因被抑制有关。P21和P53是机体重要的两个原癌基因，而HSP70对细胞的凋亡具有抑制的作用。本次研究对三者与食管癌发生的关系进行分析，取得较好结果，现报道如下。

资料与方法

一、一般资料

收集我院2011年1月至2014年1月间的80例食管石蜡标本为研究对象，所有患者均符合食管癌诊断标准[2]。其中60例为食管癌患者的石蜡标本 （食管癌组），60例为正常食管的石蜡标本（对照组）。食管癌组中48例男性，12例女性，年龄45～79岁，平均年龄（65.8±9.6）岁；分化程度：32例高分化癌，18例中分化癌，10例低分化癌；食管癌病理分型：21例慢性鳞状上皮典型性增生，17例慢性鳞状上皮非典型性增生，13例鳞状上皮乳头状增生，9例腺体增生活跃。对照组中32例男性，28例女性，年龄43～78岁，平均年龄（64.9±9.1）岁。两组性别、年龄等一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

二、方法

1.切片制作

组织蜡块用切片机进行切片处理，取3片进行烤片。蜡去除后，将切片放于室温下30 mL/L的双氧水中密闭封存10 min。微波修复抗原10 min，然后冷却至室温，用PBS缓冲液连续冲洗2 min，室温条件下加入山羊血清工作液密闭封存，孵育15 min，倒掉工作液，在每个切片上加入P21、P53、HSP70单克隆抗体，在4.0℃环境中过夜。次日清晨取出切片，放于37.0℃的恒温箱中孵育1 h，加入50 μL的素-生物素和链亲双氧水，室温条件下孵育40 min，PBS缓冲液洗涤3次，每次洗涤5 min[3-4]。然后加入二氨基联苯胺双氧水溶液进行显色5 min，苏木精衬染处理，脱水透明后使用DPX密封固定。

2.切片筛选

由我院3位病理专家采用双盲分析法对所有病理切片进行分析、选择，每张切片选择10个高倍、典型的视野，保证计数细胞高于1 000个[5]，使用北京航空航天大学真彩色图像分析系统体视力学分析软件计算阳性细胞数量。

三、细胞着色评价标准

着色细胞数：0分=着色细胞数＜10%，1分=10%≤着色细胞数≤25%，2分=26%≤着色细胞数≤50%，3分=51%≤着色细胞数≤75%，4分=着色细胞数≥76%；着色程度：0分=无色，1分=浅黄色，2分=橘黄色，3分=棕褐色。统计着色细胞数与着色程度的总分，评价P21、P53、HSP70的表达情况。

四、统计学处理

本次研究统计数据录入EXCEL（03版）行逻辑校对，数值变量采用标准差、均数表示。计量资料行t检验，等级分类资料行Ridit检验。P<0.05为差异具有统计学意义。

结 果

一、两组P21、P53、HSP70的表达情况比较

食管癌组P21、P53的表达量明显高于对照组，而HSP70的表达明显低于对照组，见表1。

表1 两组P21、P53、HSP70的表达情况比较 （±s）

表1 两组P21、P53、HSP70的表达情况比较 （±s）

注：*与对照组相比，P＜0.05。

组别 n P21 P53 HSP70食管癌组 60 4.67±1.33* 4.95±0.54* 1.91±0.62*对照组 60 1.64±0.71 0.97±0.51 4.23±0.99 t值 - 15.56 41.50 15.38 P值 - 0.0000 0.0000 0.0000

二、不同分化程度食管癌中P21、P53、HSP70表达情况的比较

P21、P53的表达水平，高分化癌＞中分化癌＞低分化癌；而HSP70的表达则为高分化癌＜中分化癌＜低分化癌。见表2。

表2 不同分化程度食管癌中P21、P53、HSP70的表达情况比较 （±s）

表2 不同分化程度食管癌中P21、P53、HSP70的表达情况比较 （±s）

注：*与其他两组相比，P＜0.05。

食管癌分化程度 n P21 P53 HSP70高分化癌 32 5.69±0.86* 5.96±0.54* 1.04±0.20*中分化癌低分化癌18 10 4.22±0.75 2.31±0.54 4.07±0.68 3.40±0.53 1.97±0.46 4.31±0.92 F值 - 75.17 103.55 187.09 P值 - 0.0000 0.0000 0.0000

三、免疫组化染色结果，见图1。

图1 食管癌免疫组化染色结果 （A可见HSP70微弱表达；B 4 h免疫组化染色，显示食管癌细胞胞浆内HSP70表达较高；C可见食管癌细胞胞浆内P21表达较高；D可见食管癌细胞胞浆内P53基因表达与局部体液免疫的关系）

讨 论

食管癌发病率高，起病隐匿，难以在早期被发现，就诊时常处于中晚期，严重影响预后。食管癌患者预后与年龄、肿瘤分化程度、临床分期、肿瘤类型等多种因素有关[6]。细胞核内遗传物质DNA分子发生增殖，分裂的质与量异常改变是导致肿瘤发病的物质基础，而机体抑癌基因被抑制或者发生缺失，以及原癌基因被激活是DNA分子增殖，是异常分裂的基础[7]。由于对癌基因的深入研究，对恶性肿瘤发生、发展的机制也有了进一步的了解，为恶性肿瘤的诊治提供了新的方法。P21和P53是机体重要的两个原癌基因，而HSP70对细胞的凋亡具有抑制作用，P21蛋白属于一种高度保守性蛋白，存在于细胞膜表面，该类蛋白与鸟苷酸调节蛋白具有类似的作用[8-9]。当位于细胞膜表面的P21蛋白接受到信号后，与鸟苷酸调节蛋白发生结合，形成P21-鸟苷酸结合调节蛋白复合物，并具有GTP酶活性，起到传递细胞内信号的作用，从而对细胞的正常生长与增值发挥调节作用，如果P21蛋白表达量过高，可长时间刺激细胞生长，使细胞增值失去控制，从而形成肿瘤。研究表明，食管癌、肺癌、胃肠道癌等癌症患者机体中均存在P21蛋白表达量过高的现象[10]。此次研究结果显示，食管癌组P21蛋白表达量明显高于正常食管，且高分化癌＞中分化癌＞低分化癌，由此可见P21蛋白与食管癌的发生、发展有关，且控制着食管癌的癌变过程与恶性维持。

P53基因属于抑癌基因，对调控细胞周期、诱导细胞凋亡以及DNA修复有着重要作用。肿瘤组织中的P53基因突变时，野生型P53的转录、调控作用丧失，获得诱导原癌基因异常表达，抑制野生型P53转录活性等新功能，诱导、促进肿瘤的发生[11]。P53基因突变发生于大多数恶性肿瘤患者中，也有研究表明P53基因突变的癌症患者存活率低于P53基因未突变患者。通过此次研究发现，食管癌组P53基因的表达量明显高于正常食管，且高分化癌＞中分化癌＞低分化癌，再一次证明突变型P53基因影响着肿瘤的发生与发展。

HSP70属于热休克蛋白，几乎所有生物应激细胞中均存在HSP70高度诱导现象，发挥保护机体与细胞的作用。肿瘤形成过程中，HSP70蛋白以一种分子伴侣的形式参与到细胞多肽合成的过程中，与多肽的折叠、组装、运输有密切关系。盛晓玲[12]在其研究报道中提出食管鳞状细胞癌中的HSP70蛋白表达量较高，但食管鳞状细胞癌分化程度越高，HSP70蛋白表达量越低。本次研究中食管癌组HSP70蛋白的表达量明显低于正常食管，且高分化癌＜中分化癌＜低分化癌，与盛晓玲的报道一致。

综上所述，癌症的发生与多种因素有关，而细胞增殖失控和细胞凋亡遭受抑制是引发癌症的基础条件。P21和P53是机体重要的原癌基因，而HSP70对细胞的凋亡具有抑制的作用，三者表达水平的变化与癌症的发生有密切关系，食管癌中P21和P53表达量上升，HSP70表达量下降，有助于提高食管癌的诊断，评价预后，值得临床应用。

1 曹友红,马平,王福根,等.CDK4在胃癌中的表达及临床意义.现代消化及介入诊疗,2014,(5):281-284.

2 王世鑫.食管癌诊断标准与治疗方案.中国临床医生,1999,08:24.

3 杜国亮,张正坤,田君才,等.p21WAF1/CIP1与大肠癌的相关性研究概况.现代消化及介入诊疗,2009,14(2):128-129.

4 宫宁宁,李登欣,陈文娟,等.Snail,E-cadherin在食管癌中的表达及意义.潍坊医学院学报,2011,33(4):249-251.

5 杜日昌,陈玉英,谭丽珊,等.食管癌中Caveolin-1与P53的表达及临床意义.中外医学研究,2011,09(14):7-10.

6Novakovi′c Zorica,Kati′c-Radivojevi′cSofija,Todorovi′cVera,et al.Implementation of immunohistochemical methods in diagnostics of bovine sarcocystosis.Veterinarski Glasnik,2006,60(3-4):175-186.

7 朱慧利,解平.胃镜下瘤内注射重组人p53腺病毒治疗晚期食道癌的安全性及短期疗效观察.实用医院临床杂志,2012,09(4):79-80.

8 陈渭,智发朝.survivin、p53蛋白在结直肠肿瘤中的表达及其临床意义.现代消化及介入诊疗,2011,16(4):231-234.

9 张彤,王佩,张振海,等.紫杉醇顺铂方案联合自体CIK细胞输注治疗晚期食道癌的临床分析.中国免疫学杂志,2012,28(7):652-656.

10 阚和平,刘正军,谭永法,等.胰腺癌ras p21蛋白表达与AgNORs计数及组织学分级的关系.现代消化及介入诊疗,2008,13(3):187-189.

11 Gaitanarou E,Seretis E,Xinopoulos D,at al.Immunohistochemical localization of glutathione S-transferase-pi in human colorectal polyps.World J Gastroenterol,2008,14(26):4179-4184.

12 盛晓玲.P21、P53、HSP70在食道癌及癌前病变中的表达及意义.临床医学工程,2015,22(2):166-167.