东方百合鳞片外植体灭菌效果对比

郭标　韦鹏霄　岑秀芬

摘 要 以东方百合品种“凝望星空”鳞茎为外植体材料，比较了不同灭菌处理及不同鳞片部位对外植体灭菌和诱导出芽的效应。试验结果表明，在灭菌剂HgCl2的不同浓度及不同灭菌时间的比较试验中，以0.19%HgCl2 灭菌20 min的效果最好；两种灭菌剂的适宜组合为0.19%HgCl2 20 min +12% NaClO 5 min，外植体的菌污染率、死亡率和诱导出芽率分别为30%、16.67%和53.33%；在鳞片的不同部位比较试验中，以中层鳞片的菌污染率最低（23.33%）、芽诱导率最高（56.67%）。

关键词 东方百合； 鳞片培养；外植体灭菌；菌污染；芽诱导

中图分类号：S682.29 文献标志码：A 文章编号：1673-890X（2015）09-120-02

1 材料与方法

1.1 试验材料

供试验材料为东方百合品种“凝望星空”的鳞茎。采用百合生长健壮的鳞茎，除去最外层与泥土接触部分的鳞片，选取洁白无病斑的鳞片用自来水冲洗干净，再用饱和的洗衣粉或洗洁精溶液浸泡15～20 min，冲洗干净后置于超净工作台内进行表面消毒灭菌。灭菌过程中不停地摇晃灭菌溶液，然后用无菌水冲洗4～5遍，再用灭菌过的滤纸吸干外植体表面的水分备用。在超净工作台上，用剪刀把灭菌过的百合鳞片剪切成0.5～1.0 cm2小块，然后将鳞片块腹面朝上接种于外植体诱导培养基上，每瓶接种鳞片块30个，每个处理接30瓶，设3次重复。

接种材料置于室温（25±1） ℃、光照强度1 500 lx左右、光照时间12 h/d的条件下进行培养。培养25 d后，统计鳞片外植体的菌污染率和未污染鳞片的芽诱导率。用DPS统计分析软件对试验数据进行显著性及多重比较分析。

1.2 试验设计

（1）灭菌剂HgCl2的不同浓度比较试验。HgCl2的浓度分别为0.1%、0.13%、0.15%、0.17%、0.19%，共设5 个处理。（2）0.19% HgCl2的不同灭菌时间比较试验。灭菌时间分别为20、23、26、29 min，共设4个处理。（3）不同灭菌组合的比较试验。①0.19%HgCl2（20min）+12% NaClO（5 min和10 min）；②0.19%HgCl2（20 min）+15% NaClO（5 min和10 min）；③75%酒精（30 s和60 s）+0.19%HgCl2（20 min）。共设6个处理。（4）不同部位鳞片外植体的比较试验。鳞片部位分为外层、中层和内层，共设3个处理。

2 结果与分析

2.1 不同HgCl2浓度对东方百合鳞片外植体灭菌效果的影响

从表1可知，同一种灭菌剂（HgCl2）不同浓度对东方百合鳞片外植体的灭菌效果均不同。随着HgCl2浓度（0.1%～0.22%）的提高，鳞片外植体的污染率呈下降趋势，死亡率呈上升趋势，而鳞片外植体诱导出芽率则呈上升后下降的趋势。在HgCl2的浓度为0.1%时，鳞片外植体的菌污染率最高，达到100%；鳞片外植体的诱导出芽率最低，为0.0。当HgCl2的浓度为0.19%时，鳞片外植体的菌污染率为46.67%，芽诱导率达最高，为33.33%。在不同HgCl2浓度处理之间，鳞片外植体菌污染率、鳞片外植体出芽率的差异均达到极显著水平。试验结果表明，单一灭菌剂HgCl2在浓度为0.19%时，可以有效降低东方百合鳞片外植体的菌污染率和提高鳞片外植体出芽率。

2.2 0.19%HgCl2不同灭菌时间对东方百合鳞片外植体灭菌效果的影响

由表2得知，同一HgCl2浓度（0.19%）的不同灭菌时间，对东方百合鳞片外植体灭菌效果也不同。在0.19%HgCl2的不同灭菌时间（20、23、26、29 min）处理范围内，随着灭菌时间的延长，鳞片外植体的菌污染率呈下降趋势；而外植体的死亡率则呈上升趋势；由于外植体的死亡率增大，致使外植体的诱导出芽率降低。不同灭菌时间处理之间，其外植体的菌污染率、死亡率及芽诱导率的差异均达到极显著水平。试验结果表明，0.19%HgCl2对百合鳞片外植体的适宜灭菌时间为20 min。

不同灭菌组合对东方百合鳞片外植体灭菌效果的影响

从表3可以看出，不同灭菌组合对东方百合鳞片外植体灭菌效果的影响不同。在不同灭菌组合的6个处理中，外植体菌污染率最高的为75%酒精+0.19%HgCl2组合，其次为0.19%HgCl2+12% NaClO组合处理，最低的为0.19%HgCl2 +15% NaClO组合；外植体死亡率最高的为0.19%HgCl2（20min） +15% NaClO（10 min）组合处理，其次为75%酒精+0.19%HgCl2组合，最低的为0.19%HgCl2（20 min）+12% NaClO（5 min）组合处理；外植体诱导出芽率最高的为0.19%H Cl2+12% NaClO组合，其次为0.19%HgCl2+15% NaClO组合，最低的为75%酒精+0.19%HgCl2组合。综合比较上述3项指标，以0.19%HgCl2+12% NaClO组合的效果最佳，其次为0.19%HgCl2+15% NaClO组合，最差为75%酒精+0.19%HgCl2组合；最佳组合处理为0.19%HgCl2 （20min）+12% NaClO（5min），最差组合处理为75%酒精60 s+0.19%HgCl2（20 min）。

2.4 不同鳞片部位对东方百合鳞片外植体灭菌效果的影响

如表4所示，同一灭菌处理对东方百合不同部位的鳞片外植体灭菌效果不同。百合鳞片外植体的污染率高低顺序为：外层鳞片（40%）>中层鳞片（23.33%）>内层鳞片（16.67%）；外植体的死亡率高低顺序为：内层鳞片（36.67%）>中层鳞片（20%）>外层鳞片（10%）；外植体诱导出芽率的高低顺序为：中层鳞片（56.67%）>外层鳞片（50%）>内层鳞片（46.66%）。百合鳞片3个部位在各指标的差异均达到极显著水平。试验结果表明，东方百合球茎的中层鳞片最适宜用于外植体灭菌和芽诱导。

3 讨论与结论

本研究试验结果表明，在不同灭菌组合的比较试验中，与单一的灭菌剂处理比较，虽然较适宜的灭菌组合都能不同程度地提高百合鳞片外植体的灭菌效果，但最适宜的灭菌组合是由适宜的灭菌剂各类、浓度及灭菌时间的最佳组合，即不但明显地降低外植体的菌污染率，而且还能最大程度地提高外植体的诱导出芽率[1-2]。

在相同的外植体灭菌处理下，东方百合不同鳞片部位的灭菌和诱导出芽效果差异很大。以中层鳞片的综合效果最好，外植体的菌污染率和死亡率较低，诱导出芽率最高；外层鳞片由于带菌较多，外植体的菌污染率最高，诱导出芽率最低；内层鳞片由于过于细嫩，虽然外植体的菌污染率最低，但死亡率最高，诱导出芽率最低。因此，对东方百合鳞片进行离体培养时，外植体最适宜的部位为中层鳞片。

参考文献

[1]邹永梅，黄雪方.不同消毒剂对万寿菊外植体灭菌效果的影响[J].江苏教育学院学报：自然科学，2011，27（4）：25-27.

[2]刘丽娟，李红梅，刘雪莲.不同处理方法对外植体消毒效果比较研究[J].北方园艺，2009（10）：86-87.

（责任编辑：刘昀）