褥疮冰蜜湿敷剂中组方药的抗菌实验研究

饶军英，韩志，金必成，张耀勇，周燕

(1.贵阳中医学院第二附属医院 骨一科，贵州 贵阳 550003；2.贵州电力职工医院 外科，贵州 贵阳 550002)



褥疮冰蜜湿敷剂中组方药的抗菌实验研究

饶军英1，韩志1，金必成2，张耀勇1，周燕1

(1.贵阳中医学院第二附属医院 骨一科，贵州 贵阳 550003；2.贵州电力职工医院 外科，贵州 贵阳 550002)

目的 探讨褥疮冰蜜湿敷剂中冰片、蜂蜜、庆大霉素注射液不同组方的抗菌效果。方法 用金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus，S. aureus)、大肠埃希菌(Escherichiacoli，E. coli)、铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa，P. aeruginosa)分别制作兔三期感染褥疮模型，以凡士林为对照组，分别用蜂蜜+冰片、蜂蜜+庆大霉素，冰片+庆大霉素，冰片+庆大霉素+蜂蜜制成换药纱布治疗褥疮，取治疗前后组织做菌种鉴定及菌落计数观察。结果 治疗后蜂蜜+冰片、蜂蜜+庆大霉素、冰片+庆大霉素与冰片+庆大霉素+蜂蜜组S. aureus、E.coli、P.aeruginosa菌落计数均显著低于治疗前(P<0.05)。治疗后4个组方组S. aureus、E.coli、P.aeruginosa菌落计数均显著低于凡士林组(P<0.05)。治疗后，冰片+庆大霉素+蜂蜜(原方)组S. aureus、E.coli、P.aeruginosa菌落计数显著低于蜂蜜+冰片、蜂蜜+庆大霉素、冰片+庆大霉素组(P<0.05)。结论 湿敷剂中冰片+庆大霉素+蜂蜜(原方)抗菌作用最优。

褥疮冰蜜湿敷剂；组方；褥疮；抗菌

本研究旨在对蜂蜜+冰片、蜂蜜+庆大霉素，冰片+庆大霉素，冰片+庆大霉素+蜂蜜4个组方进行抗菌实验研究，分别用金黄色葡萄球菌(S.aureus)、大肠埃希菌(E.coli)、铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)3个菌种构建大白兔三期感染褥疮模型。通过治疗前后对炎性组织中细菌的形态特征做菌种鉴定(identification of bacteria)，用琼脂培养基和菌落计数器统计其菌落计数(colony-forming units，CFU)，比较4个组方的抗菌作用。

1 材料与方法

1.1 动物与分组 日本大耳兔，90只，雄性，15～20周龄，体质量2.8～3 kg，购自贵阳医学院试验动物中心，动物合格证号：SCXK(黔)2012-0001。适应性饲养7d后，随机分为5组，凡士林组、蜂蜜+冰片、蜂蜜+庆大霉素、冰片+庆大霉素、冰片+庆大霉素+蜂蜜组；每组18只大白兔，每组分为3个亚组，分别使用金黄色葡萄球菌组，大肠埃希菌组，铜绿假单胞菌组制作三期感染褥疮动物模型，每个亚组6只大白兔。

1.2 药物 蜂蜜300 g(湖北省定州市北方科技养蜂厂)，冰片50g，硫酸庆大霉素注射液40 mL(共160万U，8万U/2 mL/支，光正制药有限公司提供)，生理盐水160 mL(用于湿润纱布，帮助冰片粘附，稀释庆大霉素；本院药剂科提供研为细粉的冰片、凡士林纱布。

1.3 菌种 金黄色葡萄球菌ATCC25923、铜绿假单胞菌ATCC27853、大肠埃希菌ATCC25922标准菌株(上海坤肯生物化工有限公司)。

1.4 仪器 Scan300全自动菌落计数仪(上海智理科学仪器有限公司)，FYL-YS-100L 37 ℃恒温箱(Olympus)，BX51光学显微镜(苏州易微光学有限公司)，XW-80A旋涡混合器(上海医科大学仪器厂)，JB5374-19电子天平(常熟市双杰测试仪器厂)。

1.5 方法

1.5.1 菌液制备：分别将金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌标准菌株加入1 mL肉汤中，混匀，接种血平板，37°恒温孵育箱培养24 h，观察菌落生长情况，菌落用生理盐水调成0.5麦氏单位，配制菌液，放置4 ℃～7 ℃保温桶中2 h内接种。

1.5.2 湿敷剂纱布制备：高温将5个搪瓷容器消毒，分别装：凡士林纱布(对照组)，蜂蜜300 g+冰片50 g+生理盐水100 mL，冰片50 g+庆大霉素40 mL+生理盐水160 mL，蜂蜜300g+庆大霉素40 mL+生理盐水160 mL，蜂蜜300 g+冰片50 g+庆大霉素40 mL+生理盐水160 mL。除对照组，其余均加入相同重量的消毒纱布50 g，充分混匀，制成不同组方含药纱布，含冰片组加生理盐水为了润湿纱布，以增加冰片的粘附性，含庆大霉素组加生理盐水，为了等量稀释作用，配制完毕置常温备用。

1.5.3 造模方法：采用改良付小兵全层皮肤缺损法[4]制成创伤感染性动物三期褥疮模型，用电子天平称12枚2～3 g无菌棉球分别植于6只实验用大白兔两侧臀部皮下，3副5 mL消毒空针分别抽吸以上配制的菌液4 mL从伤口处浸湿棉球，缝合皮肤，种植前常规脱毛，消毒，观察5～8 d，待局部红肿全层皮肤破溃，溃疡形成后取出棉球，若皮下脂肪组织外露，可见脓性分泌物，三期感染褥疮即可形成。相同方法在5组动物模型中进行。

需要与诱因统合而成动机。对工科新教师而言，培训的需要有两个来源：其一，来自于新教师内心深处成为一名好教师的渴求；其二，来源于学生、学校、社会对其成为一名好教师的期待。基于此，激发工科新教师对培训的强烈需要，其基本策略有如下几点。

1.5.4 炎性标本制作：在三期感染褥疮生成但未治疗的伤口内取3个感染褥疮标本，电子天平称取每个标本重1 g，作为第一次标本。隔日换药1次，用生理盐水冲洗伤口(禁用消毒药水)，单层上述制备的湿敷剂纱布及6层消毒干纱布覆盖创面，换药3次后的第2天，分别为每个创面取3个1 g检测标本作为第二次标本。

1.6 指标检测

1.6.1 细菌鉴定：将所取2组标本1 g放入盛有5 mL生理盐水的无菌器皿中，旋涡混合器将标本和生理盐水充分混匀，取1 mL加肉汤2 mL增菌，接种血平板，37 ℃恒温孵育箱培养24 h，肉眼观察菌落形态，挑起菌落涂片，行革兰氏染色，100倍油镜下观察细菌形态，用菌落计数仪确定是否为已种植的标准菌株，确定细菌是否种植成功。

1.6.2 菌落计数：同时取上述混匀后的含菌溶液用定量接种环取10 μL溶液接种血平板，37 ℃恒温孵育箱培养24 h后计数，读取血平板上菌落数，若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则将所取标本1 g放入盛有10 mL或20 mL生理盐水的无菌器皿中增加稀释倍数，旋涡混合器充分混匀，若连续2个稀释度的平板菌落数在30 CFU～300 CFU时，确定此2个菌落数的平均值。用公式N=∑C/(n1+0.1n2)d计算出每毫升标本的菌落总数，N-样品中菌落数(单位：CFU)，ΣC-平板(含适宜范围菌落数的平板)菌落数之和，n1-第一稀释度(低稀释倍数)平板个数，n2-第二稀释度(高稀释倍数)平板个数，d-稀释因子(第一稀释度)，若细菌种植不成功，则此例标本不纳入统计。

2 结果

与治疗前比较，治疗后蜂蜜+冰片、蜂蜜+庆大霉素、冰片+庆大霉素与冰片+庆大霉素+蜂蜜组S. aureus、E.coli、P.aeruginosa菌落计数均显著降低(P<0.05)。与凡士林组比较，治疗后4个组方组S. aureus、E.coli、P.aeruginosa菌落计数均显著降低(P<0.05)。治疗后，冰片+庆大霉素+蜂蜜(原方)组S. aureus、E.coli、P.aeruginosa菌落计数显著低于蜂蜜+冰片、蜂蜜+庆大霉素、冰片+庆大霉素组(P<0.05)。见表1。

表1 不同组方治疗前后标本菌落计数Tab.1 Comparison of colony count pre-treatment and post-treatment of each ±s，CFU/mL，n=12)

#P<0.05，与治疗前比较，compared with pre-treatment；*P<0.05，与凡士林组比较，compared with vaseline group；△P<0.05，与冰片+庆大霉素+蜂蜜组比较，compared with borneol+ gentamicin+honey

3 讨论

褥疮即为压疮，又称压力性溃疡，由于局部组织长期受压，发生持续缺血、缺氧、营养不良而致组织溃烂坏死，根据美国全国压疮顾问小组2007年最新临床分类，分为以下四期：第一期压疮：淤血红润期——“红、肿、热、痛或麻木，持续30 min不退”在骨隆突处的皮肤完整伴有压之不褪色的局限性红斑。第二期压疮：炎性浸润期——“紫红、硬结、疼痛、水疱”，真皮部分缺失，表现为一个浅的开放性溃疡，无组织坏死，也可能表现为一个完整的或破裂的血清性水疱。第三期：压疮浅度溃疡期——表皮破损、溃疡形成，全层皮肤组织缺失，可见皮下脂肪暴露，但骨头、肌腱、肌肉未外露，伤口内有坏死组织。第四期：压疮坏死溃疡期——真皮下组织坏死，感染扩散至肌肉层、骨面，常有全层组织缺失，伴有骨、肌腱或肌肉外露，常有潜行隧道。本实验用大白兔三期感染褥疮作为动物模型，对湿敷剂的抗菌作用进行了组方药的抗菌作用研究，为湿敷剂的临床应用提供了抗菌实验依据，由此可见，湿敷剂可以广泛用于临床开放性损伤及感染伤口的常规换药敷料，能有效缩短疗程，减少全身抗生素的应用。

冰片：天然冰片又称天然右旋龙脑，是为数不多的具有明确化学结构的药物之一。在长期的临床用药经验中，冰片常作为一种佐使药物使用发挥促透作用[4]；能使皮肤角质细胞疏松、细胞间隙增大、毛囊口孔径加宽等，有促进药物吸收的功效[5]，冰片在中药方剂中常作为佐使药和引药，与药物归经有关。冰片具有促进血脑屏障的生理性开放作用，部分原因可能与抑制P-gp的功能有关。体外研究表明，冰片对狗肾细胞系(medin-darby canine kidney，MDCK)细胞膜上P-gp的活性具有抑制作用，冰片与丹酚酸B联合应用可以显著抑制血脑屏障脑微血管内皮细胞MDR1 mRNA的表达，进而可能降低P-gp的功能性表达[6-7]，冰片本身极易通过血脑屏障进入脑内，还可促进BBB的生理性开放，使顺铂、庆大霉素、川芎嗪等药物易于透过血脑屏障进入脑内[8]。长期以来对冰片的应用显示其具有许多的药理活性及作用：镇痛、抗炎、抗菌等[9]。

蜂蜜：蜂蜜是工蜂将采集的植物花蜜或分泌物经过充分酿造而贮存在蜂巢内的甜味物质，它是一种粘度高、透明或半透明的液体。蜂蜜不仅具有很高的营养价值，而且还具有多种生物学活性，如抗氧化、解毒、抗菌、消炎、滋润、防腐、保护创面、促进细胞再生等[10]。有研究发现[11]，蜂蜜对60多种细菌以及7种真菌有抑菌作用，其中对炭疽杆菌、短小芽孢杆菌、白喉状杆菌、大肠杆菌、肺炎杆菌等均有明显的杀菌作用；蜂蜜对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌有明显的抑菌作用[12]，蜂蜜除含65%～80%的葡萄糖及果糖外，还含有丰富的酶、维生素和矿物质，大于60 ℃会破坏酶等营养成分，故临床配制的湿敷剂禁止高温灭菌消毒。单味蜂蜜对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌无抗菌作用；其高渗透性，能使细菌脱水死亡，天然蜂蜜为酸性，不利于细菌生长，从而起抗菌作用[13]。

庆大霉素：主要用于大肠杆菌、痢疾杆菌、克雷伯肺炎杆菌、变形杆菌、铜绿假单胞菌等革兰阴性菌引起的系统或局部感染(对中枢感染无效)[14]。

治疗后蜂蜜+冰片、蜂蜜+庆大霉素抗菌效果显著优于冰片+庆大霉素与冰片+庆大霉素+蜂蜜组S. aureus、E.coli、P.aeruginosa菌落计数均显著降低(P<0.05)。与凡士林组比较，治疗后4个组方组S. aureus、E.coli、P.aeruginosa菌落计数均显著降低(P<0.05)。治疗后，冰片+庆大霉素+蜂蜜(原方)组S. aureus、E.coli、P.aeruginosa菌落计数显著低于蜂蜜+冰片、蜂蜜+庆大霉素、冰片+庆大霉素组(P<0.05)。

本研究结果显示，治疗后冰片+庆大霉素+蜂蜜抗菌效果显著优于冰片+庆大霉素，说明蜂蜜能通过其高渗透压及酸性环境，降低细菌活性，达到抑菌的作用，从而提高冰片及庆大霉素的抗菌作用(P<0.05)。治疗后冰片+庆大霉素+蜂蜜抗菌效果显著优于蜂蜜+庆大霉素，说明在组方中的冰片促进药物吸收，故增强了组方的抗菌作用。

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(编校：王俨俨)

Experimental study of antimicrobial formulas in wet honey ice bedsores

RAO Jun-ying1, HAN Zhi1, JIN Bi-cheng2, ZHANG Yao-yong1, ZHOU Yan1

(1.Department of Orthopedics, The Second Affiliated Hospital of Guiyang College of Traditional Chinese Medicine, Guiyang 550003, China; 2. Department of Surgery, Guizhou Electric Power Worker’s Hospital, Guiyang 550002, China)

ObjectiveTo study antibacterial effect of formulas, borneol, honey, gentamicin in wet honey ice bedsores. MethodsThe third-stage infective bedsore model in rabbit were estabished withStaphylococcusaureus(S.aureus),Escherichiacoli(E.coli), andPseudomonasaeruginosa(P.aeruginosa). The rabbits with bedsore were respectively compressed with gauze of honey+borneol, honey+gentamicin,borneol+gentamicin,borneol+gentamicin+honey, vaseline as control group. The strain identification and colony counts were observed before and after treatment. ResultsThe colony count ofS. aureus,E.coli andP.aeruginosa in honey+borneol, honey+gentamicin, borneol+gentamicin, borneol+gentamicin+honey post-treatment was significantly higher than that of pre-treatment, respectively (P<0.05). The colony count of three strains in above four formulas post-treatment was significantly lower than that in vaseline group, respectively (P<0.05). The colony count of three strains in borneol+gentamicin+honey (original formula) post-treatment was significantly lower than that in the other formulas, respectively (P<0.05). ConclusionThe antibacterial effect of borneol+gentamicin+honey (original formula) is the best.

wet honey ice bedsores; formulas; bedsore; colony count; rabbit

贵州省中医药管理局中医药、民族医药科学技术科研项目(QZYY2012-19)

饶军英，女，本科，副主任医师，硕士研究生导师，研究方向：骨科临床及中药在骨科临床的应用研究，E-mail：raojunying1964@163.com。

R47

A

1005-1678(2015)08-0052-03