痰瘀同治方对多囊卵巢综合征模型大鼠胰岛素抵抗的实验研究*

孙亚京，黄益麒，潘旭鸣，黄 平△

（1.浙江中医药大学第三临床医学院，浙江 杭州530053；2.浙江中医药大学第一临床医学院，浙江 杭州530053）

多囊卵巢综合征（PoIycystic ovary syndrome，PCOS）是一种育龄期和青春期妇女常见的排卵障碍性疾病，患者以高雄激素血症，胰岛素抵抗为主要特征，临床表现为月经稀发、闭经、肥胖、多毛和不孕等。而胰岛素抵抗既是影响其发病的重要因素，还是PCOS 患者主要病理生理改变[1-3]。目前，中医学者普遍认为“痰瘀互结”是PCOS 伴胰岛素抵抗的主要病机。根据丹溪的“痰瘀理论”，本研究拟观察其对PCOS 大鼠胰岛素抵抗等代谢紊乱的作用。

1 材料

1.1 动物

选用21 日龄清洁级雌性SD 大鼠60 只，购买自浙江中医药大学动物实验研究中心。动物许可证号为：SCXK（浙）2008-0037。

1.2 药物

吡格列酮购买自江苏恒瑞医药股份有限公司；痰瘀同治方由二陈汤和失笑散组成，均由杭州市胡庆余堂提供，经由浙江中医药大学鉴定为正品。二陈汤和失笑散根据全国统编五版教材《方剂学》的组成和用量（二陈汤：橘红30g，半夏30g，白茯苓18g，甘草9g；失笑散：蒲黄12g，五灵脂12g），研磨成粉，均匀混合。

1.3 试剂

注射用硫酸普拉睾酮钠购于江苏联环药业股份有限公司（批号：20070701）；血清胰岛素（insulin）、睾酮（T）、雌二醇（E2）、孕酮（P）、促卵泡刺激素（FSH）和黄体生成素（LH）放免试剂盒均由北方生物技术研究所提供（批号：E080721、E081124、E080507、E080708、E080721、E080624）；血糖试剂盒购于北京北化康泰试剂有限公司（批号：20080516）.

1.4 仪器

AU400 型OLYMPUS 全自动生化分析仪（日本）；AG204 电子分析天平（瑞士METTLER）；贝克曼库尔特UniCel DxI 800 全自动化学发光免疫分析仪（美国贝克曼库尔特有限公司）；全自动放射免疫γ 计数器（上海上立检测仪器厂）。

2 方法

2.1 SD 大鼠伴IR 的POS 模型建立[4]

将60 只清洁级SD 大鼠动物先普食适应性喂养1d 后，按照随机分组原则分成2 组，造模组45 只和正常组15 只。从第25 日起至第55 日，造模组大鼠每日颈背部皮下注射硫酸普拉睾酮钠0.9mg/kg[5-7]，正常组大鼠则同样位置处注射等量生理盐水。正常组给予普通饲料，造模组则喂以高脂饲料，均喂养100 d。从喂养第90 天起，每日早晨大鼠称量体重，测量空腹血糖，行阴道涂片10 d，观察细胞涂片的周期变化情况。喂养90 d 后，尾静脉采血测干预前的空腹血糖（FBG）和空腹胰岛素（Fins），并根据相关文献[8]中提及的方法计算胰岛素敏感指数：ISI=ln [1/（FBG×Fins）]。造模组中选择ISI 小于正常组ISI 均值减1.96 倍标准差，且阴道涂片无周期变化者作为造模成功的大鼠。这批PCOS 大鼠模型的临床表现上具有无排卵，体重增加，空腹血糖水平明显增加，胰岛素敏感异常等，与PCOS 患者临床表现相似。

2.2 给药途径和方法

将造模成功的大鼠随机将其分为对照组、治疗组和模型组。从第91 天起，用相应药物干预3 周，治疗组每天灌服痰瘀同治方30g/kg，对照组每天灌服吡格列酮（溶解于等量生理盐水）15mg，模型组和正常组灌服等容量生理盐水。对照组、治疗组和模型组在治疗期间均喂以高脂饲料，正常组喂以普通饲料。末次给药后禁食12h，断尾采血测干预后FBG 和Fins，并计算ISI。断尾采血结束后，大鼠以相应饲料喂养7 d，并于第七天禁食12h 后，用6%水合氯醛腹腔注射麻醉，摘取双侧卵巢用4%多聚甲醛固定，并断头取血并分离血清，用于检测各项性激素。

2.3 卵巢排卵情况比较

4%多聚甲醛固定双侧卵巢，切片后用HE 染色，以黄体的形成判定为排卵，光镜下观察排卵，计算各组大鼠排卵率（排卵率=排卵大鼠数目/大鼠总数×100%）、平均排卵数（平均排卵数=黄体总数/大鼠总数）和囊性扩张卵泡率（囊性扩张卵泡率=囊性扩张卵泡数/卵泡总数×100%）。

2.4 血脂、空腹血糖及空腹胰岛素的检测

生化分析仪检测大鼠的TG、TC、LDL、HDL。血糖用葡萄糖氧化酶法测定，胰岛素用放射免疫法测定，均严格按照试剂盒说明书进行。

2.5 性激素检测

血清T、E2、P、FSH 和LH 均采用放射免疫法测定，均严格按照试剂盒说明书进行。

2.6 统计学处理

采用统计软件SPSS17.0 进行统计分析，所有数据以（x±s）表示，组间差异采取单因素方差分析，多个组间比较采用LSD 分析，均以P＜0.05 为差异具有统计学意义，P＜0.01 为差异具有显著统计学意义。

3 结果

3.1 各组排卵情况的比较

与对照组比较，低中高剂量治疗组平均排卵数及排卵率显著增加（P＜0.01），但仍明显低于正常组（P＜0.05），囊性扩张卵泡率无明显改变（P>0.05）。与正常组比较，模型组平均排卵数及排卵率均显著降低（P＜0.01），囊性扩张卵泡率显著增加（P＜0.01）。结果见表1。

表1 各组大鼠排卵情况比较

3.2 各组FBG，Fins 及ISI 的比较

与对照组比较，低中高剂量治疗组FBG 无明显变化（P>0.05），但Fins 显著降低（P＜0.01），ISI 显著升高（P＜0.01）；与正常组比较，模型组FBG 和Fins均升高（P＜0.05），ISI 则显著降低（P＜0.01）。结果见表2。

表2 各组大鼠FBG，Fins 及ISI 比较

3.3 各组血脂的比较

与对照组比较，低中高剂量治疗组TG、TC 和LDL 水平均显著降低（P＜0.01，P＜0.05，P＜0.01），HDL 水平显著增高（P＜0.05）；与正常组比较，模型组血清TG、TC 和LDL 浓度均显著升高（P＜0.01），HDL 显著降低（P＜0.01）。结果见表3。

3.4 各组血清性激素的比较

与对照组比较，低中高剂量治疗组血清T 和E2浓度均降低，FSH 浓度升高（P＜0.05），LH 水平无明显改变（P>0.05）；与正常组比较，模型组血清T，E2和LH 浓度均显著升高（P＜0.01），FSH 浓度显著降低（P＜0.01）。结果见表4。

表3 各组大鼠血清脂质比较

表4 各组大鼠血清性激素比较

4 讨论

PCOS 的病因尚不清楚，涉及的病理机制非常复杂。一般认为与下丘脑-垂体-卵巢轴功能失常、肾上腺功能紊乱、遗传、代谢等因素有关。但目前发病机制尚不明确，其内分泌特征包括：雄激素过多、雌酮过多、黄体生成激素、卵泡刺激素（LH/FSH）比值增大、胰岛素过多等，与以下因素有关：①下丘脑-垂体-卵巢轴功能紊乱；②胰岛素抵抗；③胰岛素样生长因子-1 的激活；④肾上腺来源雄激素过多等[9-11]。

《内经》对“痰瘀”相关的理论早有记载，“痰”和“瘀”皆为阴邪，痰自津来，瘀本乎血，津血同源，阴精阳气失其常度，则津灼为痰，血滞为瘀，说明痰瘀实为同源。基于痰瘀同治方的理论，伴胰岛素抵抗的多囊卵巢综合征及其导致的糖、脂代谢紊乱属于中医“痰浊”和“瘀邪”范畴[12-15]。而痰瘀同治方由二陈汤和失笑散构成，二陈汤中半夏辛温性燥，善能燥湿化痰，且又和胃降逆，为君药。橘红为臣，既可理气行滞，佐以茯苓健脾渗湿，渗湿以助化痰之力，健脾以杜生痰之源，又以甘草调和诸药；失笑散中五灵脂苦咸甘温，入肝经血分，功擅通利血脉，散瘀止痛；蒲黄甘平，行血消瘀，炒用并能止血，二者相须为用，为化瘀散结止痛的常用组合。两方结合，化痰去瘀，健胃运脾，使脾胃运化正常，痰瘀去，脉道通，血行流利，胞宫得养，则疾病可愈。

实验显示：模型组大鼠出现卵巢排卵率下降，糖、脂质代谢紊乱和胰岛素抵抗，表明伴胰岛素抵抗的PCOS 建模成功。成模大鼠经痰瘀同治方干预后，平均排卵数及排卵率显著增加；血脂中TG、TC和LDL 显著降低，LDL 明显升高，血清T 和Fins 浓度显著降低，FSH 浓度及ISI 明显升高，且与正常组之间无明显差异。这一结果证实了痰瘀同治方对IR的PCOS 大鼠具有改善排卵障碍、增加胰岛素敏感性和降低性激素水平的作用。该结果为痰瘀同治方在临床上治疗伴胰岛素抵抗的多囊卵巢综合征提供了实验依据。

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