离心法和虹吸法制备冷沉淀凝血因子的比较

王玉红河南省安阳市中心血站,河南安阳　455000

离心法和虹吸法制备冷沉淀凝血因子的比较

王玉红
河南省安阳市中心血站,河南安阳455000

目的 以新鲜冰冻血浆(FFP)使用两种方法制备冷沉淀结果对凝血因子Ⅷ因子、Fbg(纤维蛋白原)含量的比较。方法 用离心法和虹吸法各30袋、200 mL FFP制备的冷沉淀结果进行检测,对主要成分Ⅷ因子含量、纤维蛋白原Fbg含量两组数据进行比较。结果 离心法和虹吸法制备的冷沉淀Ⅷ因子含量、纤维蛋白原含量,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.001)。结论 用虹吸法制备的冷沉淀质量指标均优于离心法。水浴虹吸法步骤精简,人为因素影响小,所需仪器少操作简单。因此虹吸法制备冷沉淀将逐步取代离心方法,过程更规范,产品质量更高。

Ⅷ因子;纤维蛋白原 (Fbg);冷沉淀

随着医学的不断发展，冷沉淀因子制剂愈来愈受到重视，临床用量逐年在提升。该制品在治疗儿童及成人甲型血友病、血管型血友病、纤维蛋白原缺乏症以及Ⅷ因子缺乏症等方面获得了明显的疗效。冷沉淀凝血因子是指新鲜冰冻血浆在(4±2)℃融化后获得的血浆冷沉淀蛋白部分，而冷上清为在冷沉淀制备期间去除的血浆上清。冷沉淀富含Ⅷ因子、纤维蛋白原(Fg)和其他一些凝血因子,其中的Ⅷ因子是非常不稳定的一种凝血因子［1］，而且由于冷沉淀的制备受到采血、分离环境和保存多个环节影响，随着时间延长或者温度升高，Ⅷ因子活性下降明显，体外半衰期较短容易失活，因此选择比较可靠的制备方法很重要。

1　资料与方法

1.1设备材料

虹吸法CT－4T.6C型水浴式低温融化箱，称量仪，热合机SE—250。离心法需求仪器：CR-7大容量低温离心机，4℃冰箱，TERUMO/TSCD无菌接口机，称量仪，热合机。

1.2方法

1.2.1虹吸法 将新鲜冰冻血浆置于4T. 6·C型低温恒温循环水浴槽中，空联袋悬于箱外，两袋之间产生一定的落差，冰冻血浆融化时由于虹吸的作用，融化的血浆流入空袋中，剩余的(45±5)mL有白色结晶颗粒的部分成分即为冷沉淀。热合后低温保存备用［2］。

1.2.2离心法 将新鲜冰冻血浆放在4℃冰箱中慢慢融化14～16 h，待血浆袋中慢融化至尚存小冰块时取出，用低温离心机离心，离心10 min，2500 r/min,温度2℃。用转移袋经无菌操作方式分出上层冷上清血浆，留下20~30 mL血浆于冷沉淀中，热合，低温保存备用［2］。

1.2.3制作冷沉淀是血站的一项常规的项目 其主要成分是凝血因子VIII和纤维蛋白原。国家对于血站制作冷沉淀这个项目是有着严格的标准，国家标准要求一个单位的冷沉淀，凝血因子VIII的含量为≥80 IU，纤维蛋白原的含量≥150 g[3]。

1.2.4统计方法 通过SPSS 19.0统计学软件对数据进行分析处理，计量资料以均数±标准差的形式表示，采用t检验，P<0.05时，差异有统计学意义。

2　结果

两种方法制备的冷沉淀Ⅷ因子和纤维蛋白原的含量比较见表1。

表1　离心法与虹吸法制备冷沉淀凝血因子结果比较 (n=30)(±s)

表1　离心法与虹吸法制备冷沉淀凝血因子结果比较 (n=30)(±s)

离心法　虹吸法　t　PⅧ因子含量　81.45±2.71　103.42±14.74　18.47　＜0.05 Fbg 含量　150.56±3.63　193.37±4.53　4.72　＜0.001

3　讨论

冷沉淀制品质量的好坏对临床疗效的取得至关重要，因此，选择合适的制备方法是非常关键的 ，根据近几年对两种方法进行实际操作比对和分析，虹吸法比离心法效果有显著优势。通过两种方法质量指标比较，发现离心法制备Ⅷ因子含量低于虹吸法(P＜0.05)；纤维蛋白原Fbg 含量明显低于虹吸法(P＜0.001)。进一步分析，离心法制备冷沉淀是首先制备出速冻的新鲜冰冻血浆(FFP),然后将新鲜冰冻血浆(FFP)放到2～6℃的冰箱里过夜,冷沉淀结晶后再通过离心分层,然后将血浆排出后剩下的就是结晶的冷沉淀。采用此办法它的缺点主要有:冰箱内的温度不稳定，难以保证整个过程处于2～6℃的温度范围。温度的波动，使的凝血因子活性降低，并且得出率下降。由于需要将血浆放在冰箱内过夜，时间很长,容易发生蛋白析出，同样会降低凝血因子得出率,并且影响它的活性。虹吸法制备冷沉淀是保证水温恒定在6℃，而且在融化过程中要保证水和血浆要充分接触。CT-4T.6C水浴式低温融化箱使用独特循环水流既可以保证温度均匀还可以加快溶解速度。由于冷沉淀具有在2～6℃下结晶，析出的特性，因此虹吸法正是利用它的这个重要特性，从新鲜冰冻血浆中来提取冷沉淀。也正是由于这个特性，所以对于析出冷沉淀来讲，恒定温度就成为了一个很关键的因素；另外，冷沉淀特别是凝血因子VIII还有个不稳定的特性，因此在提取冷沉淀的过程中，时间越块也就越好。由于水箱内温度均匀，并且水流不停循环，水箱前后摇摆，使水流对血袋产生温和的按摩和挤压，使血袋快速而均匀的融化，融化时间只需1个小时。温度处于低温恒定、融化时间大幅度缩短，虹吸法制备的冷沉淀使凝血因子VIII及纤维蛋白原获得率比离心法增加显著。

冷沉淀凝血因子中纤维蛋白原含量和Ⅷ因子的含量是直接影响产品质量和治疗效果的关键因素，与制备过程密切相关，尤其是融化时的温度及融化时间。在制备过程中为了保证质量应注意以下几点：要控制各环节影响因素，把握好水浴温度和溶化速度这两个关键点①抓住冷沉淀制备过程中融化时间特别重要，避免时间过长，导致Ⅷ因子活性降低，应在两小时内完成［4］。②新鲜浆放入水浴箱时确保温度在要求恒定温度6℃，当水温恒定在6℃时，冷沉淀的得出率是最高的。③由于冷沉淀的制备受到多个环节影响，而且凝血因子中的Ⅷ因子是不稳定的因子，随着时间延长或者温度升高，Ⅷ因子活性下降明显，体外半衰期较短容易失活，为此要切实保证冷沉淀因子的质量确保临床输入的效果和安全性，必须密切关注制备过程中的关键控制点。

离心方法制备冷沉淀的过程中，温度不容易控制，新冰浆的融化时间长，从而导致Ⅷ因子、 Fbg含量的差异明显较低。而使用虹吸法，不仅便于温度的监控，而且确保Ⅷ因子、Fbg的容量和含量，人为因素影响小，在制备时间上大大缩短,因此浴虹吸法制备冷沉淀是一种很好的方法。

[1] 杨江存，理芒会，于青，等.新鲜冰冻血浆融化后不同放置时间凝血因子的变化[J].中国输血杂志,2005,18(2)：211.

[2] 中华人民共和国卫生部.血站技术操作规程[J].卫医政发(2012)1号附：7.

[3] 中华人民共和国国家标准GB18469-2012[J]. 全血及成分血质量要求[D].8.1-8.12.

[4] 徐利强，李建华，周忠英.冷沉淀凝血因子制备工艺改良[J].中国生化药物杂志,2011,32(2)：145-146.

Comparison of Centrifugation and Siphon Methods to Prepare Cryoprecipitate Blood Coagulation Factor

WANG Yuhong
Blood center of Anyang City, Henan Province ,Anyang 455000,China

Objective By fresh frozen plasma (FFP) using centrifugation and siphon methods to prepare cryoprecipitate results of blood coagulation factor (VIII factor), compared with the Fbg (fibrinogen) content.Methods To detect the cold precipitation results of centrifugation and siphon methods respectively 30 bags, 200ml FFP preparation results,and to compare two groups of data of the main component factor VIII and fibrinogen content.Results The contents of factor VIII and fibrinogen have significant difference of cryoprecipitate prepared by using centrifugation and siphon methods and the difference is statistically significant (P<0.05,P<0.001).Conclusion The quality index of cryoprecipitate prepared by siphon method is better than the centrifugation method. Water bath siphon method is simple-stepped, with small impact of human factors, less equipment required and simple operation. Therefore, the siphon preparation of cryoprecipitate will gradually replace the centrifugation method and its process is more standardized and the product quality is higher.

Factor VIII;Fibrinogen (Fbg);Cryoprecipitate

R457.1

A

1672-5654(2015)02(b)-0005-02

王玉红(1969-)，女，河南安阳人，主管技师，主要从事成分输血管理。

2014-12-17)