聚集沉淀涂片与直接涂片抗酸染色法检测抗酸杆菌的应用价值比较

贺赛红

【摘要】目的：探讨聚集沉淀涂片与直接涂片抗酸染色法检测抗酸杆菌的应用价值。方法：采用聚集沉淀涂片法和直接涂片抗酸染色法对96份确诊为肺结核患者的痰标本进行检验。结果：聚集沉淀涂片与直接涂片抗酸染色法检测抗酸杆菌的阳性率分别为54.17%、29.17%，聚集沉淀涂片法检测的阳性率明显高于直接涂片法。结论：聚集沉淀涂片法操作较为简便，可提高抗酸杆菌阳性的检出率，弥补直接涂片法阳性检出敏感率低的缺点，便于在临床实验室普及和推广。

【关键词】聚集沉淀涂片；直接涂片抗酸染色法；抗酸杆菌

【中图分类号】R722.12【文献标识码】B【文章编号】1005-0019（2015）01-0156-01

抗酸杆菌-结核分枝杆菌是引起肺结核的病原菌，随着医学检验技术的不断发展，针对结核分枝杆菌检测的新方法陆续被应用，新方法的应用都有各自的优势和劣势。如利用仪器BACT/ALERTD法培养检测，所需时间较长。聚合酶链反应（PCR）法、噬菌体裂解法、PCR-斑点杂交法等方法，虽然检测快速，灵敏度高，但成本太高，有时还需要辅助特殊仪器和设备，因此无法在基层实验室普及和应用。免疫学检测方法虽然操作简单、快速，特异性高，但其只能作为一种辅助诊断方法[1]。当前痰标本涂片，染色，显微镜检查结核分枝杆菌仍然基层实验室采用的主要检验方法。为提高涂片的阳性检测率，我们将痰标本先液化浓缩处理后涂片抗酸染色检查抗酸杆菌，取得理想效果，现报告如下：

1材料和方法

1.1病例来源

2011年2月～2014年8月间来我疾控中心就诊的96例肺结核患者，其中男58例，女38例，年龄16～78岁，平均年龄（52.67±10.24）岁。

1.2标本采集

98例临床确诊为肺结核病的患者，采用WHO推荐的国际通用螺旋盖痰瓶，或可密封塑料盒、蜡纸盒采集痰标本（参考规格：直径4cm，高度2cm），每份痰量在3～5ml。需取即时痰（就诊时患者深呼吸后咳出的痰液）、夜间痰（送检前一天患者晚间咳出的痰液）、晨痰（患者晨起立即用清水漱口后咳出的痰液）。样本采集运送及储存均严格按照相应操作规程。

1.3方法

1.3.1直接涂片法检查前对新的玻片用95%的乙醇擦拭脱脂，经干燥、清洁、检查无油污、无划痕后作为合格的玻片备用，用记号笔在玻片背面一端1/3处注明实验室序号及标本序号。用折断的专用竹签茬端挑取痰标本中干酪样、脓样或可疑部分约0.05～0.1ml，于玻片正面右侧2/3处，均匀涂抹成1cm×2cm的卵圆形痰膜，待其自然干燥后，抗酸染色，镜检。注意痰涂片的制备和固定过程，应在生物安全柜中进行，以免对操作人员造成生物危害，污染工作环境。

1.3.2聚集沉淀涂片方法首先，对标本进行液化处理，將待检标本放在50ml有盖的离心管中，加等体积的4%NaOH或H2SO4，用旋转振荡器混匀打散痰液。然后进行离心沉淀，以3000转/min离心沉淀15min，取出，将悬浮液倒入含有消毒液的缸内。最后，取沉淀物。在载玻片上涂片（1cm×2cm），待自然干燥，抗酸染色，镜检。

1.4染色参考《痰涂片镜检质量保证手册》中抗酸染色法（萋-尼氏抗酸染色），染色液由青岛高科园海博生物技术有限公司提供。

1.5镜检报告镜检结果报告参照《痰涂片镜检质量保证手册》镜检结果分级报告标准：抗酸杆菌阴性（-）：连续观察300个不同视野未发现抗酸杆菌；报告抗酸杆菌菌数：1～8条/300视野；抗酸杆菌阳性（1+）：3～9条/100视野；抗酸杆菌阳性（2+）：1～9条抗酸杆菌/10视野；抗酸杆菌阳性（3+）：1～9条抗酸杆菌/每视野；抗酸杆菌阳性（4+）：≥10条抗酸杆菌/每视野。

2结果

对96份确诊肺结核患者的痰标本均采用直接涂片法和聚集沉淀涂片法进行检验，检验结果见表1。直接涂片法检出28例阳性，阳性率为29.17%。聚集涂片法检出阳性52例，阳性率为54.17%。聚集沉淀涂片法检测的阳性率明显高于直接涂片法。

3讨论

结核病是临床常见的一种慢性和缓发的传染病，其中以肺结核最为常见，约占结核病的80%左右，严重威胁人类健康。早期诊断肺结核，以采取科学有效的治疗方法，对于提高患者治愈率有重要的意义。近年来，结核病细菌学检查一直是发现主要传染源的途径和手段，为结核病的正确诊断、治疗和疗效评价提供了重要的依据。近50多年来，我国一直沿用并不断改进结核分枝杆菌的细菌学涂片，细菌培养，药敏实验和菌型鉴定方法，结核病诊断水平不断提高。而且在细菌学检测的基础上，逐步引进免疫学和分子生物学检测技术等对结核病进行联合检测，大大提高了结核菌的阳性检出率。免疫学和分子生物学检测技术的应用，大大提高了检测速度和灵敏度，但其操作程序较为复杂，技术要求高，检测成本高，而且检测特异性及结果解释等还有待进一步验证。因此痰标本涂片，染色，显微镜检查结核分枝杆菌这种常用诊断方法，仍然是最为普及和经济的诊断方法。直接涂片法检测结核分枝杆菌，一般痰液中的含菌量在105/ml以上，才能得到阳性结果，如果痰液中的含菌量在105/ml以下，阳性率检出率低。而聚集沉淀涂片法是聚集分散在整个标本内的结核分枝杆菌（MTB），将痰液浓缩到沉淀中，可提高涂片选取标本内的MTB含量，抗酸杆菌阳性检出率有所提高。本组研究资料中，聚集沉淀涂片与直接涂片抗酸染色法检测抗酸杆菌的阳性率分别为54.17%、29.17%，聚集沉淀涂片法比直接涂片法阳性检测率有了较大的提高。综上所述，聚集沉淀涂片检测抗酸杆菌，有利于提高检测的灵敏度，阳性检测率也得以提高，而且这种方法操作简便、快速，设备投入少，成本低廉，可值得推广。

参考文献

[1]刘春玉.实验室直接涂片抗酸染色法与聚集沉淀涂片检测抗酸杆菌的应用比较[J].中国民族民间医药.2012，21（13）：57.