两面针药材提取物体外抑菌作用研究

马建凤　刘华钢　朱丹　冯看

【摘要】 目的：探索两面针药材的体外抑菌作用。方法：采用纸片琼脂扩散法，观察两面针药材提取物对临床常见感染病菌的抑制作用。结果：两面针提取物对9种临床常见感染细菌（金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、伤寒沙门氏菌、肺炎克雷伯氏菌、甲型溶血性链球菌、乙型溶血性链球菌、肺炎链球菌）均有不同程度的体外抑制作用。结论：两面针药材提取物在体外对9种临床常见感染细菌有抑制作用。

【关键词】 两面针；琼脂扩散法；体外抑菌作用

【Abstract】：Objective To study on the antibscterial action of extracts of Zanthoxylum nitidum（Roxb.）DC.in vitro.Methods To observe the antibscterial action of extracts of Zanthoxylum nitidum（Roxb.）DC.On common clinical bacterials with disc agar diffusion method.Results The extracts of Zanthoxylum nitidum（Roxb.）DC.showed strong inhibitory effects on common clinical pathogens such as Staphylococcus aureus， Escherichia coli， Bacillus aeruginosus， Bacillus subtilis ，Salmonella typhi，， Klebsiella pneumoniae and Hemolytic streptococcuses.Conclusion The extracts of Zanthoxylum nitidum（Roxb.）DC.has strong inhibition on bacteria in vistro.The results provide a basis for clinical application of Zanthoxylum nitidum（Roxb.）DC.

【Key words】：Zanthoxylum nitidum（Roxb.）DC.； disc agar diffusion method；bacteriostatic action in vitro.

【中图分类号】R28 【文献标识码】B【文章编号】1004-4949（2015）02-0099-01

基金项目：国家自然科学基金项目“两面针生物活性与化学特征相关指纹图谱的研究”（30760302）；广西壮族自治区科技厅自然科学基金项目（0832127）

兩面针是广西特色药材之一，其植物来源为芸香科植物两面针 Zanthoxylum nitidum（Roxb.）DC.的根，广泛应用于中医处方、中成药及精细化工产品中，具有驱风化湿、消肿止痛、行气之功效[1，2]。现代药理研究表明两面针具有良好的抑菌、抗炎、镇痛、抗肿瘤、抗氧化等作用[3～5]。为阐明两面针的抗炎抑菌作用，本文采集广西南宁，崇左，百色，玉林，钦州等22个产地的两面针药材，对两面针药材提取物的体外抑菌作用进行了较为系统的研究。

1 材料和方法

主要仪器和试剂：M-H琼脂[6] ，购自北京陆桥技术有限责任公司；氯化钠，二甲基亚砜（DMSO）等有机试剂均为国产分析纯；无菌绵羊全血，广西医科大学实验动物中心提供。实验菌种均购自中国药品生物制品检验所。两面针药材，采自广西崇左等22个产地。

1.1样品配置

取药材，洗净泥沙，切薄片，阴干，粉碎，过40目筛，称取药粉6g，加氯仿40mL回流提取，滤过，回收氯仿，残渣用乙醇定容到10mL量瓶中。

提取物用直径为 0.22μm 的微孔滤膜过滤除菌，选用新华层析滤纸，用打孔机制成直径6mm圆片。高压灭菌烘干后，加药液浸泡过夜，置恒温箱中烘干，4℃ 保存[6]。

1.2 直接菌落法制备菌悬液：取各菌37℃18～24h 纯培养物，用无菌生理盐水校正到浓度相当于0.5麦氏标准比浊标准，无菌生理盐水1∶10稀释备用。

1.3 体外抑菌研究

采用纸片琼脂扩散法进行抑菌试验。用无菌棉签将菌液分别均匀涂布于M-H琼脂平板表面，含药虑纸片紧贴于琼脂表面，接种好的平皿置室温待菌液被琼脂吸收后把琼脂平皿倒置放入35℃±2℃培养箱孵育16～20h（链球菌20～24 h）观察结果。每个药物抑菌试验重复3次，抑菌结果为3次试验平均值。抑制菌指数判断：如抑菌圈直径等于6mm，说明对该菌种无抑制作用；抑菌圈直径越大，抑菌作用越强。

2 结果；

3 讨论；

所选广西各产地两面针药材提取物对9种细菌均有不同程度的抑制作用，对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、伤寒沙门氏菌、 肺炎克雷伯氏菌抑制作用较强，而对大肠埃希氏菌 和链球菌的抑制作用较差，对铜绿假单胞菌抑制作用最弱。综合比较22个产地中，广西崇左和玉林产的两面针药材抑菌活性较高。但各产地药材对9种细菌的抑菌活性强度不尽相同。两面针药材抑菌作用的活性成分和体内试验有待进一步研究。

参考文献

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典一部.北京：化学工业出版社，2005，116～117.

[2] 中华本草.1999年版四部，1999：3821.

[3] 刘华钢，黄秋洁，赖茂祥.中药两面针的研究概况. 时珍国医国药. 2007，18（1）：222～223.

[4] 姚荣成，胡疆.两面针化学成分及其药理活性研究概况. 药学实践杂志.2004，22（5）：264～267.

[5] 秦三海，刘华钢，王博龙，等.氯化两面针碱体外诱导肺癌SPC-A-1、舌癌Tca8113两种肿瘤细胞株凋亡的研究.中国药理学通报.2007，23（2）： 279～280.

[6] 徐叔云，卞如濂，陈修.药理学实验方法学[M].第3版，北京：人民卫生出版社.2002，1647-1660.