HPLC法测定磺胺甲恶唑钠有关物质

杨 颖 杜碧莹

（广州市药品检验所，广东 广州 510160）

HPLC法测定磺胺甲恶唑钠有关物质

杨 颖 杜碧莹

（广州市药品检验所，广东 广州 510160）

目的 建立高效液相色谱法，测定磺胺甲恶唑钠有关物质。方法 色谱柱为Zorbax C8（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为甲醇-磷酸二氢钾溶液（取磷酸二氢钾13.6 g，加水至1000 mL，用2%氢氧化钾溶液调pH值至5.3）（35∶65）；检测波长为210 nm。结果 磺胺甲恶唑钠与各杂质在该色谱条件下能有效分离，有关物质检测限0.97 ng。其中杂质F在0.4～5 μg/mL内线性关系良好，r=0.9999 （n =5），定量限2.0 ng。结论 本方法准确，灵敏度高，可用于测定磺胺甲恶唑钠有关物质。

高效液相色谱法；磺胺甲恶唑钠；有关物质

磺胺甲恶唑钠为广谱抗菌药，用于治疗畜禽、水产类，尿路感染、呼吸道感染、皮肤化脓性感染。原企业标准中磺胺甲恶唑钠的有关物质检查采用TLC法，但TLC法存在着诸如薄层板背景干扰大，灵明度不高等缺点，不能有效检出全部有关物质，不能真实反映该企业样品的质量状况。曾有文献［1］报道用HPLC法测定复方磺胺嘧啶中磺胺甲恶唑钠的含量。但目前暂未报道磺胺甲恶唑钠有关物质控制方法。本文建立了

HPLC 法测定磺胺甲恶唑钠的有关物质，方法简便、准确、灵敏度高。

1 仪器与试药

1.1 仪器：日本Shimadzu 高效液相色谱仪LC-10Atvp（二极管阵列检测器）。

1.2 试药。杂质A：N-（5-甲基-3-异恶唑基）-4-乙酰氨基苯磺酰胺；杂质F：N-（3-甲基-5-异恶唑基）-4-氨基苯磺酰胺。均为欧洲药典委员会颁发的对照品。样品为国外某进口药品生产厂产品，批号为3010、3009、3008。甲醇为色谱纯。水为纯化水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件及系统适用性：色谱柱为ZORBAX C8（250 mm×4.6 mm， 5 μm），流动相为甲醇-磷酸二氢钾溶液（取磷酸二氢钾13.6 g，加水至1000 mL，用2%氢氧化钾溶液调pH值至5.3）（35∶65）；流速0.7 mL/min，柱温为30 ℃，检测波长为210 nm。取本品和杂质A对照品各1 mg，置10 mL量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，量取20 μL，注入液相色谱仪，磺胺甲恶唑钠峰的保留时间约10 min，磺胺甲恶唑钠峰与杂质A峰的分离度应＞3.5。色谱图见图1。

2.2 测定方法：取本品，用流动相溶解（45 ℃超声振摇10 min）并稀释制成每1 mL中含1 mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，用流动相稀释制成每1 mL中含1 µg的溶液，作为对照溶液（1）；另取杂质F对照品适量，精密称定，用流动相溶解并稀释制成每1 mL中含1 µg的溶液，作为对照溶液（2）。取供试品溶液、对照溶液（1）、（2）各20 µL，注入液相色谱仪，记录色谱图。色谱图见图2。

图1 系统适用性HPLC图

图2 供试液HPLC图

2.3 有关物质测定结果，见表1。

表1 样品有关物质测定结果

3 方法学验证

3.1 线性试验：取本品（批号：3008）、杂质F对照品适量，用流动相分别制成每1 mL中含0.4～5 μg浓度的溶液，依法测定，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，计算回归方程如下：磺胺甲恶唑钠：Y=86549.5X-1318.11 r=0.9999 （n=5）；杂质F：Y=74068.7X+ 6396.62 r=0.9999 （n=5）。

3.2 方法的耐用性试验：取本品细粉适量，分别通过1 mol/L 盐酸溶液、1 mol/L 氢氧化钠溶液、30%过氧化氢溶液放置48 h、254 nm光照4 h和加热的方式进行破坏，试验表明，本品遇光易变质，尤其氧化易分解产生降解产物，而设定的色谱条件对杂质有良好的分离。

3.3 进样的精密度试验：取对照溶液连续进样6次，杂质F峰面积变化的RSD（%）为1.4，表明精密度良好。

3.4 检测限：按信噪比（S/N）为3ı1计算，有关物质检测限0.97 ng，杂质F定量限为2.0 ng。

3.5 供试品溶液的稳定性试验：在供试品溶液（批号：3008）制备后第0、1、2、4、20、66 h分别测定，供试品溶液在4 h内稳定，随着放置时间延长至66 h，杂质D（对氨基苯磺酸）与杂质F量略有增加。

4 讨 论

4.1 原注册标准方法为薄层色谱法，影响杂质斑点判定的主要原因是展开剂中的硝基甲烷，硝基甲烷在展开过程中渐变黄色，展开后，黄色附着于薄层板上，直接影响杂质斑点的判定。

从分离效果、灵敏度、专属性比较，本文所建立的方法灵敏，检测结果准确且重复性好，综合破坏性试验结果，本法能可更好地分离和检测磺胺甲恶唑钠的有关物质及贮藏过程的降解产物，故可作为检查有关物质的色谱条件。

4.2 随着供试液放置时间延长，杂质D与杂质F量略有增加，因此本品的有关物质检测应在24 h内进行。

4.3 限度的确定：参照英国药典［2］“磺胺甲恶唑”有关物质检查项下的检测方法及限度要求，结合“磺胺甲恶唑钠”生产工艺及企业标准综合评估，我们确定磺胺甲恶唑钠的杂质包括已知杂质（杂质A、B、C、D、E、F）和未知杂质，杂质F用对照品比较法计算，不得过0.1%；其他杂质用主成分自身对照法计算，不得过0.1%；杂质总量不得过0.3%。结果表明，本方法更准确的反映产品的杂质实际情况，能更好的控制产品的质量。

［1］ 武晋孝， 李淑琴， 柴桂珍，等.高效液相色谱法测定复方磺胺嘧啶各组分含量［J］.中国兽药杂志，2002，4（4）:30-31.

［2］ British Pharmacopoeia Commission.British Pharmacopoeia［S］. The Stationery Office，2013:2127-2129.

Determination of Related Substances of Sodium Sulfamethoxazole by HPLC

YANG Ying， DU Bi-ying
（Guangzhou Institute for Drug Control， Guangzhou 510160， China）

［Abstrat］Objective To establish a method of HPLC to determinate related substances of Sodium Sulfamethoxazole. Methods The analytical column was Zorbax C8（250 mm×4.6 mm，5 μm）； The mobile phase was methanol-potassium dihydrogen phosphate solution（consisting 1.36% potassium dihydrogen phosphate， adjust the pH value to 5.3 by 2% potassium hydroxide）； the detective wavelength was 210 nm. Results Good resolution of Sodium Sulfamethoxazole and releated substances was obtained， and the detection limit was 0.97 ng. There was a good linear relationship for impurity F in the concentration range of 0.4～5 μg/mL ， r=0.9999 （n=5）and the limit of quantification was 2.0 ng. Conclusions The method is accurate， sensitive and suitable for determinaton of related substances of Sodium Sulfamethoxazole.

HPLC； Sodium Sulfamethoxazole； Related substances

R927

B

1671-8194（2015）13-0014-02