HPLC法测定仙桃草中原儿茶酸的含量

刘华本*　李晓维　潘 旖　阮月华

（浙江佐力药业股份有限公司，浙江 德清 313200）

HPLC法测定仙桃草中原儿茶酸的含量

刘华本*李晓维潘 旖阮月华

（浙江佐力药业股份有限公司，浙江 德清 313200）

目的 建立以高效液相色谱法测定仙桃草中原儿茶酸含量的方法，并对原儿茶酸含量分布情况进行探究。方法色谱柱为Phenomenex-C18（150 mm×4.60 mm，5 μm）、Kromasil-C18（150 mm×4.60 mm，5 μm），流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（10∶90），检测波长为294 nm。结果原儿茶酸量在0.038～1.035 μg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系（r=0.999）；平均回收率为98.7%，RSD：1.4%。结论本法简便、准确、灵敏，可用于仙桃草药材的质量控制。

仙桃草；原儿茶酸；HPLC

仙桃草最常见的有两种，一是仙桃草为玄参科婆婆属植物仙桃草Veronica peregrina L.的带虫瘿的全草，学名蚊母草，另一种为同科同属的水苦荬V.undulata Wall［1］。本文研究对象为前者，其性味甘、苦、温，《中华本草》记载主要功效为化瘀止血，清热消肿；用于活血，止血，消肿，止痛。主要分布于东北、华东、华中、西南各地。其主要化学成分为原儿茶酸、木犀草素、香草酸等［2］，有人对其木犀草素的含量进行了研究［3］。现在以其为原料生产的产品主要有仙桃草膏、仙桃草片等。本品在《中国药典》1977年版一部及《浙江省中药炮制规范》［4］有收载，《中国药典》其后各版未再收入，本品进一步研究和使用受到限制。仙桃草在《救荒本草》、《植物名实图考》、《本草求原》等古籍中早有记载，民间偏方使用较广，现代研究甚少。原收载只对其性状及理化鉴别方法进行描述，质量控制方法简单，药材质量难以保证。为了对其质量进行很好的控制，我们对其原儿茶酸（C7H6O4）含量测定方法进行了研究，初步建立用HPLC方法测定仙桃草原儿茶酸含量，方法简便、准确、灵敏，可用于仙桃草的质量控制.

1　仪器与材料

戴安UltiMate3000、P680液相色谱仪（美国热电），Agilent 1260Infinity液相色谱仪（安捷伦公司），美国菲罗门公司C18（150 mm ×4.60 mm，5 μm），瑞典Kromasil C18（150 mm×4.60 mm，5 μm），原儿茶酸对照品（中国食品药品检定研究院）批号110809-201205（纯度99.9%），仙桃草对照药材（浙江省食品药品检验研究院鉴定）批号050311，乙腈为色谱纯，磷酸，乙醇均为分析纯。

（批号20120301），由安徽和济堂中药饮片有限公司提供，为玄参科婆婆属植物仙桃草Veronica peregrina L.的带虫瘿的全草，为安徽省亳州地区野外生长品种。

2　方法与结果

2.1分析方法验证

2.1.1色谱条件［5］：美国菲罗门公司（Phenomenex）C18（150 mm× 4.60 mm，5 μm）、瑞典Kromasil C18（150 mm×4.60 mm，5 μm）色谱柱，流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（10∶90），检测波长为294 nm，体积流量为1 mL/min，柱温为常温，进样量10 μL。

2.1.2供试品溶液制备：取本品适量，粉碎，使能通过三号筛，精密称取粉末1 g，置具塞锥形瓶中，精密加入20%乙醇25 mL，称定重量，加热回流2 h，放冷，再称定重量，用20%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

2.1.3对照品溶液的制备：称取减压干燥24 h的原儿茶酸（C7H6O4）对照品适量，精密称定，加20%乙醇制成每1 mL约含80 μg的溶液，即得。

2.1.4系统适用性试验：取对照品溶液、供试品溶液各10 μL，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，原儿茶酸保留时间为5.2 min，理论塔板数不低于6000。HPLC图谱见图1、2。

2.1.5线性范围：取含344.843 μg/mL原儿酸对照品溶液，精密量取对照品溶液1.25、2.5、5、10、20、30 mL，分别置于100 mL量瓶中，加20%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得不同浓度的对照品溶液，分别精密量取10 μL注入高效液相色谱仪，测定，记录色谱图。以峰面积为纵坐标（Y），对照品学溶质量（X）为横坐标，进行线性回归，得到回归方程：Y=31.685X+0.7433，得到原儿茶酸线性范围0.038～1.035 μg，r=0.9999。

2.1.6加样回收率试验：精密称取已知含量（0.132%）的样品9份（批号20120301），每份0.5 g，分成3组，每组3份，每组分别精密添加0.8 mg/mL的原儿茶酸对照品溶液0.8、1、1.2 mL，按“2.1.2”项下方法制备的供试品溶液，进样测定，计算其回收率和RSD，结果见表1。

2.1.7精密度试验：从重复性、中间精密度、重现性三个层次考察本法的精密度。

2.1.7.1重复性试验：相同条件下，精密量取“2.1.2”项下方法制备供试品溶液6份（批号20120301），重复进样，测定各次峰面积，计算样品原儿茶酸含量分别为0.133%、0.134%、0.133%、0.132%、0.132%、0.133%，RSD为0.57%，表明本法重复性良好。

2.1.7.2中间精密度试验：精密量取“2.1.2”项下方法制备的同一供试品溶液6份（批号20120301），不同日期（时间间隔期3 d）、不同分析员（2人）、不同设备进行试验（3台不同型号的仪器），结果见表2。

2.1.7.3重现性试验：精密量取“2.1.2”项下方法制备的同一供试品溶液6份（批号20120301），不同实验室（质量控制实验室和研发中心实验室），不同分析员（2人）分别进行试验，结果为：1号分析员质量控制实验室测试结果分别为0.134%、0.136%、0.131%；2号分析员研发中心实验室测试结果分别为：0.133%、0.135%、0.132%.RSD%为1.41。

2.1.8耐用性试验：从溶液的稳定性、样品的提取时间、流动相的组成（如有机相的±5%）、不同品牌色谱柱、柱温（如±5 ℃）、流速等进行研究分析，试验内容如下：

2.1.8.1溶液的稳定性试验：溶液在室温条件下，分别于0、1、3、5、8、12、24 h精密吸取10 μL供试品溶液（批号20120301），进样测定，结果RSD为0.86%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

图1　原儿茶酸对照品色谱图

图2　供试品溶液色谱图

表1　仙桃草中原儿茶酸加样加收试验

表2　中间精密度试验

2.1.8.2其他因素：对不同流动相的组成、不同品牌色谱柱、不同柱温及流速进行试验，结果表明流动比例在±5%调整对结果影响不明显，用菲罗门公司、Kromasil及月旭色谱柱结果无明显变化，柱温在10～30 ℃，流速在0.8～1.2 mL/min对结果无影响。因此，仙桃草中的原儿茶酸测定条件较宽，有较好的耐用性。

3　讨　论

在供试品制备过程中，由于中药成分的复杂性与提取的多样性，曾对加热回流时间进行比较，回流分别为1、2、3 h，结果证明回流2 h，样品提取完全，比较对经济合算，所以本实验采取了加热回流2 h的提取方法。

通过实验研究，建立了仙桃草的原儿茶酸含量质量控制方法，而且经方法学验证该方法稳定可靠中，耐用性较强，可为仙桃草药材质量定量控制提供依据。同时对原儿茶酸含量在药材中的分布情况进行了初步研究，全草各部位均含有原儿茶酸，叶含原儿茶酸相对偏低，全草原儿茶酸含量为叶的2～3倍。

［1］杨成梓，凌伟坚.两种仙桃草的本草考证［J］.中药材，2003，26（11）: 818-819.

［2］都述虎，金继曙.仙桃草主要化学成分体外促凝血作用［J］.中草药，1996，27（7）:416-417.

［3］宋光伟，邢茂.HPLC法测定仙桃草中木犀草素的含量［J］.中国药房，2009，20（15）:1166-1167.

［4］戚雁飞，诸葛陇.浙江省中药炮制规范［M］.浙江:浙江科学技术出版社，2005.

［5］国家食品药品监督管理局.局颁标准.仙桃草片［S］.2009.

R282.710.3

B

1671-8194（2015）22-0054-02