HPLC法测定紫草中紫草素的含量

杨　沁　陈梦婷　刘　虹　魏艳丽　张向娣（嘉兴学院医学院，浙江嘉兴　314033）

HPLC法测定紫草中紫草素的含量

杨沁*陈梦婷刘虹魏艳丽张向娣
（嘉兴学院医学院，浙江嘉兴314033）

建立高效液相法对新疆紫草中左旋紫草素的含量测定方法。色谱条件为Dikma diamonsil C18色谱柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），流动相为0.05%三氟乙酸水溶液-乙腈梯度洗脱，流速为1.0 mL/min，检测波长为516 nm，柱温30℃。左旋紫草素进样量在0.32 mg/mL～0.00768 mg/mL（R= 0.9999）的范围内，呈良好线性关系，平均回收率为97.78%，RSD=1.08%。检测方法简便、准确。

高效液相色谱法紫草素含量测定

紫草为紫草科紫草属的多年生草本植物，主要分布于我国新疆、内蒙、四川和云南等地。紫草在我国具有悠久的药用历史，其主要有效成分是以左旋紫草素为代表的萘醌类化合物，左旋紫草素的含量也是目前中国药典中紫草含量测定的指标。本文选择紫草素作为指标成分，建立了紫草中左旋紫草素的HPLC测定方法。

一、仪器与试药

Agilent 1200高效液相色谱仪，四元泵（美国Agilent公司）；电子分析天平（北京赛多利斯公司），超声波清洗器（宁波金达超声波仪器厂）；MILLI-Q超纯水仪（MILLIPORE公司）；新疆紫草购自成都荷花池中药材专业市场，经鉴定为为紫草科植物新疆紫草Arnebia euchroma（Royle）Johnst.的干燥根；左旋紫草素对照品购自中国食品药品检定所（批号：110769-200405）；乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。

二、方法与结果

2.1色谱条件 Dikma diamonsil C18色谱柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；柱温30℃；流动相为0.05%三氟乙酸水溶液-乙腈；流速为1.0 mL/min；梯度洗脱，0～25 min，B相线性由40%改变至90%；25～30 min，B相线性维持在90%，检测波长为516 nm［1］，进样量为20 μL。

2.2方法学考察

2.2.1对照品溶液制备 精密称取左旋紫草素对照品6.4 mg，置10 mL量瓶中，无水乙醇溶解，制成0.64 mg/mL的贮备液。精密移取5 mL贮备液，加无水乙醇稀释至刻度，定容至10 mL量瓶中，得左旋紫草素浓度为0.32 mg/mL的对照品溶液。分别按照上述方法精密移取适量对照品溶液，用无水乙醇进行稀释分别制得0.16 mg/mL、0.064 mg/mL、0.0384 mg/mL、0.01536 mg/mL和0.00768 mg/mL系列浓度的对照品溶液。

2.2.2供试品溶液制备同一批次的新疆紫草干燥至恒重，适当粉碎后过筛，精密称取4 g紫草粉末，置于锥形瓶中，加入48 mL无水乙醇超声提取2次。合并两次滤液，旋蒸发仪低温浓缩至干。加无水乙醇溶解至刻度，定容于50 mL，摇匀。按照2.1色谱条件进行含量测定。

2.2.3线性关系考察对照品溶液经0.45 μm微孔滤膜过滤后，按上述色谱条件分别精密吸取20 μL进样，峰面积数据利用Excel表格绘制标准曲线（图3），得回归方程为y=19896x-5.1787（R=0.9999），其中（y）为峰面积、横坐标（x）为进样量。结果表明，进样量在0.32 mg/mL～0.00768 mg/mL的范围内，峰面积与进样量呈良好线性关系。

图1　紫草对照品HPLC

图2　紫草提取物HPLC（*：紫草素）

图3　线性曲线

2.2.4稳定性试验取同一供试品溶液分别在

0，2，4，6，8，12，24 h进行测定，记录峰面积，结果显示左旋紫草素RSD=0.43%（n=7），表明供试品溶液在24h内稳定，有关物质符合要求。

2.2.5精密度试验分别精密吸取对照品溶液（0.064 mg/mL），每次20 μL，按照确定的色谱条件连续重复进样6次，测定左旋紫草素的峰面积，并计算RSD=0.26%，由此可知仪器的精密度良好。

2.2.6加样回收试验精密称取已知含量的同一批次紫草药材6份，分别精密加入0.64 mg/mL左旋紫草对照品溶液1 mL，按2.2.2项制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件进行实验，结果显示左旋紫草素的平均回收率为97.78%，RSD=1.08%（见表1）。

表1　左旋紫草素加样回收试验结果（n=6）

三、讨论

林雄等［2］和伍毅［3］分别采用甲醇-水-磷酸（78：22：0.3，v/v）和甲醇：磷酸（85：15）作为流动相测定了紫草油中左旋紫草素的含量。本实验考察了不同比例的甲醇-磷酸-水系统和乙腈-三氟醋酸-水系统，最终以0.05%三氟乙酸水-乙腈系统洗脱效果最优，能较好的测定左旋紫草素的含量，测方法简便、准确。

［1］周化更，刘晓华，富志军.新疆紫草中紫草素的提取方法研究［J］.海峡药学，2015，7：011.

［2］林雄，潘旭东，黄燕，等.HPLC测定紫草油中左旋紫草素的含量［J］.海峡药学，2011，23（7）：83-85.

［3］伍毅.HPLC法测定紫草油中左旋紫草素的含量［J］.中药新药与临床药理，2005，16（1）：66-68

杨沁（1995.05-），女，嘉兴学院医学院2013年本科生

嘉兴学院重点SRT项目基金资助（851714070）