SD大鼠实验性牙周炎唾液中NO含量的表达

陈晓波 葛学军

SD大鼠实验性牙周炎唾液中NO含量的表达

陈晓波 葛学军

目的 研究SD大鼠实验性牙周炎唾液一氧化氮(NO)的含量变化。方法 取30只健康的清洁级雄性SD大鼠作为实验对象，分别于基线，牙周手术后2w，4w，6w，收集腮腺唾液，并观察各个阶段大鼠牙周临床表现。用一氧化氮还原法分别测定基线，2w，4w，6w，唾液中 NO 含量。结果 基线，2w，4w，6w 时唾液 NO 的含量分别为 6．532±3．261μmol/L，10．356±5．674μmol/L，17．145±6．901μmol/L，25．605±8．079μmol/L。牙周炎大鼠唾液NO的含量与牙周炎的进展程度呈正相关。结论 实验性牙周炎大鼠2w，4w，6w，唾液NO的含量显著高于健康大鼠，且与牙周炎的发展程度有关。

SD大鼠；牙周炎；一氧化氮；唾液

牙周病是一种常见的重要的口腔疾病，它可引起的牙齿松动，牙齿过早脱落，从而对个人和社区卫生服务水平造成巨大的社会经济负担[1]。

一氧化氮（nitric oxide，NO）是一种极不稳定的生物自由基，分子小，结构简单，常温下为气体，微溶于水，具有脂溶性，可快速透过生物膜扩散，生物半衰期只有3－5s，其生成依赖于一氧化化氮合成酶（nitric oxide synthase，NOS）并在心、脑血管调节、神经、免疫调节等方面有着十分重要的生物学作用。

1 材料和方法

1.1 实验对象和标本采集 本实验采用自身对照法，取健康清洁级雄性SD大鼠20只，平均体重为200±17.86g，且牙列完整，咬合关系正常，无龋损，无牙周组织疾病。适应性饲养一周后，用采用微型Lashley吸盘法收集大鼠腮腺唾液，隔天10%水合氯醛0.3ml/100g行腹腔注射麻醉大鼠，用0.2mm正畸结扎丝对上颌第一磨牙进行牙周结扎术。牙周手术后大鼠喂食正常鼠料及饮水。分别于2w，4w，6w时观察大鼠牙周情况，并收集腮腺唾液。将收集好的唾液置于2ml离心管内4℃离心(4000 r/min，10分钟)，取上清。

1.2 标本检测 试剂盒选用南京康成公司一氧化氮试剂盒，按照其说明书进行试剂的配制及样本的检测。测得的数据经过公式运算得到样本中NO的含量。

2 结果

2.1 SD大鼠牙周炎实验动物模型的建立 零时，牙龈色粉，质韧，菲薄且紧贴于牙面，探诊无出血。牙周结扎手术2w后，结扎丝完好未脱落，牙龈点彩不明显，牙龈水肿，轻度充血，探针有少量出血，牙齿无松动。牙周结扎手术4w后，结扎丝完好未脱落，牙龈质地松软，龈乳头圆钝肿胀，龈沟加深，探诊出血，牙齿Ⅰ度松动。牙周结扎手术6w后，结扎丝完好未脱落，牙龈呈暗红色，质地松软边缘圆钝，可探及1.0mm的牙周袋，探诊易出血，牙齿Ⅱ度松动。

2.2 统计学结果

2.2.1 手术后2w、4w、6w时唾液中NO含量（表1）。

2.2.2 统计学结果分析

表1 基线、2w、4w、6w时唾液中NO含量

表2 基线、2w、4w、6w各组之间两两比较

用单因素方差分析对统计学结果进行处理。统计结果显示牙周手术后2w、4w、6w时唾液中NO含量与零时相比P＜0.05，有统计学差异，具有统计学意义。且牙周手术后2w、4w、6w时唾液中NO含量两两比较，均得出结论P＜0.05，有统计学差异，具有统计学意义。

3 讨论

本研究的牙周炎实验动物模型是用单纯结扎丝结扎大鼠双测上颌第一磨牙。Achong等人的研究表明采用结扎法能成功诱导动物牙周病的发生[2]。国内学者李霞[3]等人报道正畸结扎丝法可成功建立大鼠牙周炎实验动物模型，能够模拟临床牙周炎发生发展的自然进程。

生物体内NO通过两个生理途径合成：NOS依赖途径和NOS独立途径。NOS独立通路是还原了NO的主要氧化产物，硝酸盐和亚硝酸盐[4]，因此可以用硝酸盐还原酶法间接测定NO含量的方法。

有实验表明，NOS基因缺失的小鼠更易发生感染[5]，这说明NO是机体抗微生物防御体系中的一个重要因子，因此可推测当患牙周炎时，唾液NO分泌会增加。本研究结扎后2w、4w、6w组大鼠唾液中NO含量明显高于基线牙周结扎手术前。

Reher等人研究显示，牙周疾病及其严重程度与唾液中亚硝酸盐浓度密切相关[6]。本实验的研究结果同样显示随着牙周病的发展，SD大鼠唾液中NO的含量明显增加，各组之间比较P＜0.05，具有统计学意义。因此可得出结论，唾液中NO的含量与牙周病的进程密切相关，且随着疾病的发展，唾液中NO的含量明显增加。

牙周病是口腔重要的疾病之一，是导致失牙的重要原因，因此牙周炎的研究及治疗有着重要的临床意义。

[1]Poorsattar Bejeh Mir K,Poorsattar Bejeh Mir A．Should medical clinicians be involved in orodental screening of diabetic patients．East Mediterr Health[J]．2012,18:1262．

[2]Ron Achong,Ichiro Nishimura,Hema Ramaehandran,et a1．Membrane type(MT)1 matrix metalloproteinase(MMP)and MMP-2 expression in ligature-induced periodontitis in the rat．[J]Periedontol,2003,74(4):494～500

[3]李霞,程珏,孙克勤,任娟,王翔宇等．不同方法构建大鼠实验性牙周炎模型的研究 [J]．Chinese Remedies&Clinics,September 2007,Vol 7,No．9 682-684．

[4]Benjamin N,O’Driscoll F,Dougall H,et al．Stomach NO synthesis[abstract]．Nature 1994,368(6471):502．

[5]MacMicking JD,Nathan C,Hom G,et al．Al tered res ponses to bacteri al inf eci on and endo toric shock in mi ce lacking ind ucibl e ni t ric oxide s ynthase．Cell,1995,81(4):641～650．

[6]Reher VG,Zenobio EG,Costa FO,Reher P,Soares RV．Nitric oxide levels in saliva increase with severity of chronic periodontitis．J Oral Sci 2007,49:271-6．

作者单位：030001山西医科大学

R541．4

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