全自动尿中有形成分分析仪检测胸腹水常规细胞计数与手工法的比较

郑卫东　陈娟　潘云军

[摘 要] 目的：探讨Sysmex UF-1000i全自动尿中有形成分分析仪检测胸腹水细胞的可靠性。方法：使用UF-1000i和显微镜手工计数两种方法，分别检测253例胸腹水患者样本（125例胸水，128例腹水）中的红细胞数（RBC）和白细胞数（WBC），进行批内精密度试验，并对检测结果进行统计学分析。结果：125例胸水患者样本两种检测方法结果比较，RBC、WBC数值差异均有统计学意义（z=-3.969，P=0.000；z=-2.597，P=0.009）；128例腹水患者样本两种检测方法结果比较，RBC、WBC数值差异也均有统计学意义（z=-2.186，P=0.029；z=-3.780，P=0.000）；批内精密度试验UF1000i检测各浓度RBC、WBC的CV值≤2.0%， 手工法的CV值9.8%～21.2%，手工法样本中RBC或WBC浓度越高，CV值越大。结论：两种方法检测胸腹水细胞结果存在差异，UF-1000i检测胸腹水细胞具有快速、准确、重复性好等优势。

[关键词] 全自动尿中有形成分分析仪；胸水；腹水；红细胞数；白细胞数

中图分类号：R446.1 文献标识码：B 文章编号：2095-5200（2015）06-048-03

DOI：10.11876/mimt201506019

胸腹水常规检验，是临床实验室常见检测项目，对于鉴别渗出液和漏出液具有重要参考价值。胸腹水细胞计数“金标准”， 至今仍是在显微镜下，用改良牛鲍计数板进行细胞计数[1]。但该法存在操作繁琐、计数误差大、重复性差、人为影响因素较大等诸多弊端[2]。因此，寻找切实可行替代方法一直是实验室工作者和各仪器厂家努力方向。本研究用Sysmex UF-1000i全自动尿中有形成分分析仪（以下简称UF-1000i）和显微镜手工计数法，同时检测患者胸腹水中红细胞数（RBC）和白细胞数（WBC），分析UF-1000i检测胸腹水细胞计数的可靠性。

1 资料与方法

1.1 样本来源

2013年1～12月125例胸水患者样本来自本院呼吸内科、肿瘤科、感染性疾病科等，患者年龄20～94岁。128例腹水患者样本主要来自本院感染性疾病科、消化内科、肿瘤科等，患者年龄24～74岁。患者胸腹水原因诊断不全或待查，但不影响本研究检测结果统计分析。

1.2 仪器和试剂

Sysmex UF-1000i全自动尿中有形成分分析仪，配套试剂和质量控制品；改良牛鲍计数板；日本OLYMPUS CX-1光学显微镜。

1.3 检测方法

1.3.1 显微镜计数法 所有样本由两位有丰富经验检验师采用双盲法，严格按照《全国临床检验操作规程》第三版[3]要求操作，每份样本RBC和WBC均计数两次，结果取均值。对于血性样本，视具体情况用0.85%医用生理盐水适当稀释，结果乘以稀释倍数；对于有凝块样本，充分混匀后取没有凝块样本充池计数。所有样本送检后均在1h内完成检测。

1.3.2 UF-1000i仪器法 用原厂质控品UFⅡ CONTROL-L和UFⅡCONTROL-H 进行质控操作，各项指标在控后，充分混匀样本，手动进样方式检测，所有样本送检后均在1h内完成检测。UF-1000i RBC和WBC线性范围均为：（1～5000个/μL），因此，RBC或WBC任何一项超过5000个/μL样本，用0.85%医用生理盐水适当稀释，使其结果控制在线性范围内，结果乘以稀释倍数。

1.3.3 批内精密度试验 以UF-1000i计数RBC和WBC为参考依据，依据仪器线性范围， 随机选择高浓度RBC或WBC标本（>5000×106/L），中浓度RBC或WBC标本（150×106/L～5000×106/L，低浓度RBC或WBC标本（<150×106/L）。每份分别使用仪器法和手工镜检法连续计数11次，各剔除1个最差结果， 分别统计每组10个结果标准差（s）和变异系数（CV）[4]。

1.4 统计学方法

采用SPSS19.0统计学软件，用两配对样本Wilcoxon符号平均秩检验法对数据进行分析，P<0.05为有统计学意义。

2 结果

125例胸水患者样本两种检测方法结果，RBC、WBC差异均有统计学意义（z=-3.969，P=0.000；z= -2.597，P=0.009），结果见表1；128例腹水患者样本两种检测方法结果比较RBC、WBC差异也均有统计学意义（z=-2.186，P=0.029；z=-3.780，P=0.000）。

3 讨论

3.1 手工法用于胸腹水细胞计数可靠性评价

胸腹水常规检验对于判断积液性质和病因具有重要意义。全国临床检验操作规程第三版推荐显微镜手工计数法。但由于该法存在前文中诸多缺陷，显然做为“金标准”已经无法满足循证医学要求准确、可靠、重复性好等基本原则。笔者参考何银华等[4]方法，进行批内精密度试验，结果表明，手工法CV值均显著高于仪器法，且样本中RBC或WBC浓度越高，CV值越大。原因与手工法固有缺陷，如充池不均、计数池内细胞过多不易准确计数等有关，因此手工法细胞计数重复性较差。

3.2 血细胞分析仪用于胸腹水细胞计数可靠性评价

目前，医学检验专业本科教材《临床检验基础第四版》[5]，推荐胸腹水细胞计数首选血液分析仪法，认为该法快速、准确，但血液分析仪RBC和WBC和胸腹水报告单位不一致（血液分析仪为RBC×1012/L，胸腹水为RBC×106/L，相差10万倍；血液分析仪为WBC×109/L，胸腹水为WBC×106/L，相差1千倍），结果需要换算，容易导致换算错误。笔者曾尝试用Sysmex XE-2100血液分析仪进行胸腹水细胞计数，结果表明：血性标本且没有任何凝块样本可以检出RBC和WBC，并可对WBC进行分类，但样本中低浓度或微量RBC、WBC无法检出，容易堵孔需反复冲洗排堵影响血液标本检测。Sysmex XE-2100血液分析仪线性范围：WBC 0.00～44万个/μL；RBC：0.00～800万个/μL，其线性范围远高于UF-1000i（0-5000个/μL），理论上应很容易检出胸腹水中RBC和WBC。但实际上多数血液分析仪对样本、抗凝剂、本底均有较高要求，抗干扰能力差。由于各种病因导致胸腹水成分多样、复杂，干扰血液分析仪因素众多，仪器主要针对血液标本特点设计，因此目前并不适宜胸腹水常规细胞计数。随着技术进步，高端血液分析仪已实现了胸腹水等体液标本自动化检测[6-7]，其主要针对胸腹水等体液特性，增加了“手工进样+体液”检测模式。王晗等[8]用SYSMEX XT-4000i全自动血细胞分析仪检测胸腹水细胞与手工法比较，认为仪器检测胸腹水细胞具有准确、快速特点，可以替代大部分手工法检测。但高端血球分析仪价格昂贵，检测成本较高，国内也仅在大型三级医院使用，其在临床普及尚需相当长时间。

3.3 UF-1000i用于胸腹水细胞计数可靠性评价

Sysmex UF-1000i全自动尿中有形成分分析仪主要用于检测尿液中RBC、WBC、细菌、上皮细胞、管型等主要指标，已基本在二级和三级医院普及。其原理为：利用流式细胞术和电阻抗原理用红色半导体激光束照射经过核酸荧光染色后，在鞘流贯流分析池中形成鞘流样本，并通过对各粒子产生前向散射光、侧向散射光以及侧向荧光信号转换成光电信号进行分析，从而对各个粒子进行识别[9]，全自动尿液有形成分分析仪对红细胞和白细胞检测结果较准确[10]， 具有重复性好、线性宽优点[11]。用UF-1000i对胸腹水常规进行细胞计数，国内不少学者已做过有益尝试，但其结论几乎均报告UF-1000i与显微镜计数法无统计学意义[2，12-14]。本研究125例胸水患者样本，128例腹水患者样本中RBC、WBC差异均有统计学意义，从表1、表2中可以看出两种方法检测结果中位数、四分位数均存在较大差异；表3批内精密度试验表明，仪器法重复性明显优于手工法。显微镜手工计数方法中多个步骤均可导致计数结果不精确性和不准确性。因此该“金标准”检测结果，不能作为否定UF-1000i计数准确性依据。但仪器法存在线性检测范围窄、凝块易堵塞仪器通道等缺陷，必要时可用手工法复检确认，相互验证，至少目前仪器法尚未普及前，手工法仍有其存在必要。

尿液中RBC、WBC与胸腹水中RBC、WBC在形态、大小等方面均极为相似，且尿液中结晶干扰RBC[15-16]、小圆上皮细胞干扰WBC[17]等影响检测结果准确性因素在胸腹水中均不存在。因此，UF-1000i更可对胸腹水常规中RBC和WBC进行精确定量，且RBC和WBC检测结果为（个/μL）， 无需换算直接报告， 同时WBC准确定量也可以极大提高白细胞染色分类几率（WBC>150×106/L均需分类），能够更好地发现胸腹水中有意义细胞，为临床提供更有诊断价值信息。

综上所述，用UF-1000i对胸腹水中细胞进行计数，方法简单、准确、重复性好，虽然亦存在胸腹水中凝块易堵塞仪器、检测成本甚至高于收费标准等不利因素，但在目前没有更好方法情况下，可以替代大部分手工法检测。

参 考 文 献

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