高效液相色谱法测定复方仙灵脾膏中淫羊藿苷的含量

何培根　刘菁

[摘 要] 目的：建立测定复方仙灵脾膏中淫羊藿苷含量的液相色谱法。方法：采用FORTIS-C18柱（4.6mm×250mm，5μm），以乙腈：0.05%磷酸二氢钾溶液（21：79）为流动相，流速1.0mL·min-1，柱温30℃，检测波长270nm。结果：淫羊藿苷在0.034～0.680mg/mL浓度范围内有良好线性关系（r=0.9998），平均加样回收率为98.2%，RSD为0.97%。结论：本方法灵敏度高、准确、重复性好、专属性强，可作为控制复方仙灵脾膏质量的重要方法。

[关键词] 淫羊藿苷；复方仙灵脾膏；离子对色谱法

中图分类号：O657 文献标识码：A 文章编号：2095-5200（2015）02-070-03

DOI：10.11876/mimt201502026

复方仙灵脾膏为原卫生部颁药品标准中药成方制剂第15册（WS3-B-2942-98）收载复方仙灵脾酒，由于高血压患者不宜服用药酒，特别是有些服用其他药物患者不能同时饮酒。我院中医科临床结合患者需求将复方仙灵脾酒改变剂型为复方仙灵脾膏。本方由淫羊藿150g、枸杞子200g、丹参150g组成。具有补肝肾，强筋骨，祛风湿。用于腰膝酸软，四肢麻痹，神疲健忘[1]。原复方仙灵脾酒标准中只有鉴别和检查项，缺乏对制剂中药材定量控制，无法对制剂原料药材进行品质管控，无法控制成品内在质量。为更好控制本制剂质量，笔者以方中淫羊藿为控制药材，以其主要药效成分淫羊藿苷（Icariin）作为定量分析指标，建立了复方仙灵脾膏定量分析方法，为该制剂质量标准提升提供依据。现代药理研究发现，淫羊藿具有免疫调节与延缓衰老作用，具有促进骨髓细胞DNA合成、防治骨质疏松作用[2]。其主要成分有黄酮类化合物、木脂素、生物碱、挥发油等.其中黄酮类化合物淫羊藿苷为其主要药理活性物质及其质量控制指标成分[3]。中国药典也将其作为含淫羊藿制剂主要质量评价标定物[4]。

本文采用HPLC法对不同批次复方仙灵脾膏中淫羊藿苷含量进行分析，结果表明：本法灵敏度高、重复性好， 结果准确。

1 仪器与试剂

Dionex-U3000液相色谱仪（Dionex公司，Dionex Chemeleon色谱工作站）；Mettler Toledo MS104S型电子天平（d=0.01mg，瑞士Mettler Toledo）公司；SK40-360超声波清洗机（神科电子超声有限公司）；淫羊藿苷对照品（供含量测定用，中国食品药品检定研究院，批110737-200415）；乙腈（天津大茂，色谱纯）；水为双蒸水；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液制备

取经五氧化二磷减压干燥器中干燥至恒重淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含0.68mg溶液即得。

2.2 供试品制备

取本品5.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加硅藻土3g，拌匀，精密加入50%乙醇50mL，超声处理（功率250W，频率40kHz）30min，离心处理10min（10000r/min），精密吸取上清液25mL，水浴蒸干，残渣用50%乙醇完全转移至5mL量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，即得。按上述方法制得不含淫羊藿阴性对照溶液。

2.3 色谱条件

采用以乙腈：0.05%磷酸二氢钾溶液（21：79）为流动相[5-6]，流速1.0mL/min，柱温30℃，检测波长270nm，在此色谱条件下，淫羊藿苷色谱峰理论板数不小于3000，分离度大于1.5。其色谱图见图1。

2.4 标准曲线与线性范围

精密吸取淫羊藿苷对照品溶液0.5mL、1.0mL、2.0mL、5.0mL、8.0mL、10.0mL分别置10mL量瓶中，加甲醇稀释，并定容至刻度，摇匀，得到浓度分别为0.034 mg/mL、0.068 mg/mL、0.136 mg/mL、0.340 mg/mL、0.544 mg/mL、0.680mg/mL淫羊藿苷对照品溶液。分别精密吸取10μL注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以浓度（X）对峰面积（Y）进行线性回归，得到回归方程为：Y=116.2294X-2.6741，r=0.9998；结果表明淫羊藿苷在0.034～0.680mg/mL浓度范围内线性关系良好。

2.5 精密度试验

取淫羊藿苷对照品溶液，按照上述色谱条件，进样分析，重复进样6次，结果淫羊藿苷色谱峰保留时间稳定，计算6次峰面积RSD为1.32%。

2.6 稳定性试验

取复方仙灵脾膏供试品溶液，室温下分别在0h、3h、6h、12h、24h进样测定，记录淫羊藿苷色谱峰面积，计算其RSD为1.48%，表明处理后复方仙灵脾膏供试品溶液室温下24h内稳定。

2.7 重复性试验

取同一批复方仙灵脾膏样品（批号20131206）6份，精密称定，按上述方法制备供试品溶液，依法测定，结果淫羊藿苷平均含量为0.62mg/g，RSD为1.65%。

2.8 加样回收率试验

称取重复性实验已测定含量复方仙灵脾膏样品（批号20131206）9份，每份2.5g，精密称定，分别加入淫羊藿对照品溶液（浓度0.68mg/mL）1.0mL、2.0mL、3.0mL（3种不同水平，各3份），按上述方法同法制备供试品溶液，进样10μL。按外标两点法对数方程计算淫羊藿苷含量，结果见表1。

2.9 样品测定

按上述色谱条件对5批样品进行含量测定，结果见表2。

3 讨论

复方仙灵脾膏中，枸杞子用量为200g为最大。中国药典对枸杞子质量控制为测定总多糖和用薄层色谱扫描法测定甜菜碱含量。对于本复方制剂而言，煎膏剂中含有大量蔗糖辅料，测定多糖无法控制药材具体投放量。而薄层色谱法进行含量测定操作繁琐，且误差较大，无法严格控制原料与工艺稳定性，因而笔者选择淫羊藿中淫羊藿苷作为本方定量控制指标。

实验过程中对供试品制备方法和色谱条件进行了优化。采用硅藻土拌，主要是由于煎膏黏性太大，超声无法完全分散溶质。

笔者还对原料淫羊藿药材进行测定，结果其淫羊藿苷含量为0.64%。经计算，复方仙灵脾膏在制备过程中，其淫羊藿苷提取率为70.53%，说明复方仙灵脾膏制备工艺合理，能充分保证有效成分提取率。今后将进一步提高制备工艺水平，保证制剂质量进一步提高和制备工艺稳定性。

参 考 文 献

[1] 卫生部药典委员会.WS3-B-2942-98中华人民共和国卫生部药品标准[S].北京：人民卫生出版社，1998.

[2] 曾庆岳，王云山.淫羊藿药理作用研究进展[J].医药导报，2012，31（4）：462-465.

[3] 李梨，周岐新，石京山.淫羊藿苷药理作用研究进展[J].中国药房，2005，16（12）：952-954.

[4] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典：一部[S]. 北京：化学工业出版社，2010：306.

[5] 邓祖磊，崔田.HPLC法测定金刚片中淫羊藿苷含量[J].中国药房，2012，23（48）：4585-4586.

[6] 赵明宏，韩镌竹，王常丽，等.高效液相色谱法同时测定复方仙灵脾颗粒中淫羊藿苷和丹参酮ⅡA含量[J].解放军药学学报，2011，27（1）：63-65.