探讨时间分辨免疫技术在乙型肝炎五项测定中的应用效果

白艳丽

（沈阳市第一人民医院检验科，辽宁 沈阳 110041）

探讨时间分辨免疫技术在乙型肝炎五项测定中的应用效果

白艳丽

（沈阳市第一人民医院检验科，辽宁 沈阳 110041）

目的探讨时间分辨免疫技术在乙型肝炎五项测定中的应用效果。方法选取我院2012年8月至2014年8月432例乙型肝炎患者的血清标本进行TRFIA法检测，并与ELISA法检测的结果对比分析。结果TRFIA法检测乙型肝炎五项指标，质控血清五项指标的变异系数（CV%）均在20%范围内，标准品C和E的五项指标均值与靶值的比值均在0.90～1.10。ELISA法和TRFIA法分别检测血清样品的乙型肝炎五项指标经统计学分析，差异不显著（P＞0.05），除HBsAb外其他四项指标阳性符合率均较高。结论TRFIA法在能保证高重复性和准确性的同时，其灵敏度明显高于ELISA法。

时间分辨免疫技术；乙型肝炎五项测定；乙型肝炎病毒

我国为乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染高发区，临床上为了有效预防和治疗HBV感染，早期、准确的检测HBV病毒血清标志物能为其提供重要的依据。HBV病毒血清标志物检测主要包括乙型肝炎的五项指标，即乙型肝炎表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎表面抗体（HBsAb）、e抗原（HBeAg）、e抗体（HBeAb）和核心抗原（HBcAb）[1]。临床上用于检测HBV病毒血清标志物的免疫技术有很多，发展也比较快。时间分辨荧光免疫技术（time resolved fluoro immune assay，TRFIA）是近十年发展最快的一种高灵敏度的定量检测方法[2]。为了探讨TRFIA在乙型肝炎五项测定中的应用效果，本文选取了我院2012年8月至2014年8月432例乙型肝炎患者的血清标本进行检测，并与酶免疫吸附试验（enzyme linked immune sorbent assay，ELISA）检测的结果对比，现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 标本来源：血清标本来自我院在2012年8月至2014年8月接受的432例乙型肝炎患者，男性275例，女性157例，年龄为15～65岁，平均年龄（36.8年龄男性）岁。空腹静脉采血，保存在促凝分离胶密封试管内，37 ℃放置待凝固后离心收集血清，-20 ℃保存。

1.2 仪器和试剂：使用北京普朗新技术公司酶免仪进行ELISA法检测，相应试剂由成都奥克生物技术公司提供，质量均达标。使用上海新波生物技术有限公司生产的Anytest 2000型时间分辨荧光检测仪进行TRFIA法检测，相应试剂成都奥克生物技术公司提供，质量均达标。乙型肝炎两对半质控血清由卫生部临床检验中心提供，质量达标。

1.3 检测方法

1.3.1 TRFIA法检测乙型肝炎五项的重复性实验：采用TRFIA法检测乙型肝炎两对半质控血清五项指标，连续测定20 d，每天1次，分别求得五项指标的均值（），标准差（S），变异系数（CV%）。变异系数在20%内为重复性良好。

1.3.2 TRFIA法检测乙型肝炎五项的准确性实验：采用TRFIA法检测标准品C和E的五项指标，各重复3次，将平均值与靶值对比，比值在0.90～1.10为准确性好。

1.3.3 ELISA法和TRFIA法分别检测血清样品的乙型肝炎五项实验：由固定检测技师严格按照说明书分别采用ELISA法和TRFIA法进行检测。

1.3.4 统计学方法：采用SPSS 19.0统计学软件进行统计学分析，行卡方分析，P＜0.05具有统计学意义。

2 结 果

表3 ELISA法和TRFIA法分别检测血清样品的乙型肝炎五项指标

2.1 TRFIA法检测乙型肝炎五项指标的重复性实验结果：质控血清五项指标的变异系数（CV%）均在20%范围内，见表1。

表1 TRFIA法检测乙型肝炎五项的重复性

2.2 TRFIA法检测乙型肝炎五项指标的准确性实验结果：标准品C和E的五项指标均值与靶值的比值均在0.90～1.10，见表2。

表2 TRFIA法检测乙型肝炎五项的准确性

2.3 ELISA法和TRFIA法分别检测血清样品的乙型肝炎五项指标实验结果：两种方法分别检测血清样品的乙型肝炎五项指标经统计学分析，差异不显著（P＞0.05），除HBsAb外其他四项指标阳性符合率均较高。

3 讨 论

ELISA法在临床上用于检测乙型肝炎血清五项指标具有操作简单快捷、成本低廉和适于大批量样品检测等优势，使其成为目前应用较多的一种方法。但是由于其灵敏度受到多种外界因素的影响，时常出现假阳性或者假阴性，致使出现误诊或者漏诊[3]。该方法也只能用于定性而不能定量，制约了其应用范围。TRFIA法是一种新型的标记免疫检测方法，采用镧系稀土元素及其螯合物作为标志物[4]，利用时间分辨荧光分析仪进行信号检测，排除了非特异性荧光的干扰，提高了检测的特异性，保证了被检测物质的稳定性，因此具备了灵敏度高、抗干扰能力强和稳定性好等优点。

本文中，质控血清五项指标的变异系数（CV%）均在20%范围内，标准品C和E的五项指标均值与靶值的比值均在0.90～1.10，说明TRFIA法检测乙型肝炎五项指标的重复性和准确性均能带到要求。ELISA法和TRFIA法分别检测血清样品的乙型肝炎五项指标，实验结果经统计学分析差异不显著（P＞0.05），两种方法阳性符合率除了HBsAb外，其他四项指标均在95%以上。HBsAb的阳性符合率为77.78%，可能是血清样品中HBsAb为阳性的比例较少造成。TRFIA法检测血清样品乙型肝炎五项指标阳性比例均高于ELISA法检测的阳性比例。可见，TRFIA法在能保证高重复性和准确性的同时，其灵敏度明显高于ELISA法。

综上所述，ELISA法和TRFIA法对乙型肝炎五项指标的检测均有较高的特异性和灵敏度。ELISA法方便快捷，成本低廉，但其稳定性差，易出现假阳性或者假阴性，适合普通检测使用。TRFIA法特异性好，灵敏度高，能够精确定量，比ELISA法更适合用于临床上精确的检测。

[1]朱天礼,张葵.时间分辨荧光免疫技术在乙肝病毒标志物检测中的应用[J].临床输血与检验,2008,10(1):23-26.

[2]徐艳霞,谢金玲.时间分辨荧光免疫技术在乙肝两对半测定中的应用[J].临床合理用药,2010,3(22):39-42.

[3]田玉峰,王家安.乙肝五项时间分辨免疫荧光分析与PCR-HBV定量的关系[J].中外医疗,2008,34(34):18-20.

[4]赵治凤,贾秋龙.乙肝五项指标两种常用检测方法的比较分析[J].医学检验,2012,19(8):78-80.

R512.6+2

B

1671-8194（2015）01-0085-02