HPLC法测定板蓝根颗粒中RS-告伊春的含量

朱文灯 张 倩 吴 翠 霍艳萍 凌 娅*

（江苏康缘药业股份有限公司，江苏 连云港 222047）

HPLC法测定板蓝根颗粒中RS-告伊春的含量

朱文灯 张 倩 吴 翠 霍艳萍 凌 娅*

（江苏康缘药业股份有限公司，江苏 连云港 222047）

目的建立板蓝根颗粒中RS-告伊春含量测定方法。方法采用高效液相色谱法，Kromasil C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为乙腈-0.01%磷酸（6∶94），流速1.0 mL/min，柱温30 ℃，检测波长为245 nm。结果RS-告伊春在1.94～30.98 μg/mL范围内，呈良好的线性关系（r=0.9997），定量限为7.12 ng/mL，回收率为96.1%，RSD为1.6%(n=9)。结论本方法快速、准确。方法的稳定性、重复性良好，可作为板蓝根颗粒质量分析控制方法。

板蓝根颗粒；RS-告伊春；高效液相色谱

板蓝根颗粒由板蓝根提取精制而成，具有清热解毒，凉血利咽的功效，用于肺胃热盛所致的咽喉肿痛、口咽干燥[1]。板蓝根颗粒是《中国药典》2010年版一部收载品种[2]，仅收载了理化鉴别和检查项。现代药理研究表明：RS-告依春具有明显的抗流感病毒作用[3]，为加强本品内在质量控制，增加板蓝根颗粒中RS-告伊春的含量测定，同时对方法中供试品制备的提取溶剂、提取方法、提取时间、提取溶剂用量均进行了考察[4-5]，制定了本品中的RS-告伊春含量测定方法。

1 仪器与试药

1.1 仪器：Agilent 1200高效液相色谱仪，紫外检测器，所用软件为ChemStation色谱工作站。Milli-Q Advantage A10超纯水机，Satorius ME5电子分析天平，KQ-250DV超声波清洗仪，电热恒温水浴锅。

1.2 试药：板蓝根颗粒（江苏康缘药业股份有限公司，规格为3克/袋，批号120301、120302、120303、120801、120802、121001、121101、121102）；RS-告伊春对照品，购自中国食品药品检定研究院（供含量测定用，批号为111753-201304）；乙腈（色谱纯，美国天地公司）；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。

2 色谱条件

色谱柱：Kromasil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-0.01%磷酸（6∶94）；流速：1.0 mL/min；检测波长：245 nm；柱温：30 ℃；进样量：10 μL。理论板数按RS-告伊春峰计算不低于4000。见图1。

3 提取方法的考察

采用正交试验法优化提取方法，考察提取溶剂A、提取时间B、提取方法C及溶剂用量D，4个因素对提取结果的影响。因素水平见表1。L9（34）正交表设计及结果见表2。

从极差R值可以看出，影响提取的因素：提取溶剂A＞提取方法C＞溶剂用量D＞提取时间B；各因素的最有水平组合为A1C2D2B2。对上述结果进行方差分析见表3，从方差分析结果可以看出，影响因素提取溶剂A最具有显著性，影响因素顺序为：提取溶剂A＞提取方法C＞溶剂用量D＞提取时间B；各因素最优水平组合为A1C2D2B2，与直观分析结果一致。最终确定提取方案为：50 mL的水，超声处理60 min。

4 溶液的制备

4.1 对照品溶液的制备：取RS-告伊春对照品约10 mg，精密称定，加甲醇制成每1 mL含10 μg的溶液，即得。

4.2 供试品溶液的制备：取装量差异项下的本品，研细，取约5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水50 mL，称定重量，超声处理（功率250 W，频率40 kHz）60 min，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

5 线性关系考察

精密称取RS-告伊春对照品适量，制得一定浓度的标准品储备液（浓度为30.98 μg/mL）。将储备液分别稀释成浓度为1.94 μg/mL、3.87 μg/mL、7.74 μg/mL、15.49 μg/mL、30.98 μg/mL的溶液，分别进样10 μL，以进样质量浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y）绘制标准曲线，得回归方程为Y=63.873X-0.5311，r=0.9997结果表明RS-告伊春在1.94～30.98 μg/mL范围内呈良好线性关系。按信噪比（S/N）为10∶1计算，RS-告伊春的定量限为7.12 ng/mL。

6 精密度试验

精密吸取RS-告伊春对照品溶液10 μL，重复进样6次，以峰面积计算RSD值为0.41%，结果表明该方法精密度良好。

7 重复性试验

图1 RS-告伊春对照品（A）、板蓝根颗粒样品（B）HPLC色谱图

表1 正交试验因素水平表

表3 方差分析结果

表4 回收率试验结果（n=9）

取同一供试品（批号为120301），按4.2制备供试品溶液，平行制备6份，测定，结果RS-告伊春的平均含量为0.62mg/袋，RSD=1.5%，结果表明该方法重复性良好。

8 中间精密度试验

取同一供试品（批号为120301），按4.2制备供试品溶液，由两位分析人员于不同时间分别制备6份供试品并分别使用两台仪器测定，计算RSD值为1.6%，结果表明该方法中间精密度良好。

9 稳定性试验

取同一供试品（批号为120301），按4.2制备供试品溶液，分别在第0、1、2、4、6、8、12、16 h进行测定，计算峰面积RSD为0.3%，结果表明供试品溶液在16 h内稳定性良好。

10 回收率试验

取已知含量的样品（批号120301，RS-告伊春含量：0.62毫克/袋）9份，每份5 g，分别按80%、100%和120%加入对照品，按4.2制备供试品溶液，分别精密吸取10 µL，注入液相色谱仪，测定，计算加样回收率，见表4。试验结果表明，平均回收率为96.1%，RSD为1.6%。

11 样品测定

取8批样品，按4.2制备供试品溶液，分别精密吸取供试品溶液、对照品溶液各10 μL，注入高效液相色谱仪，测定，计算，结果见表5。

表2 L9（34）正交表设计及结果

表5 样品测定结果（n=2）

12 讨 论

12.1 色谱条件耐用性考察：本文对不同品牌色谱柱、不同柱温和不同流动相比例进行了考察，结果表明本文采用的色谱条件耐用性良好。

12.2 测定波长的选择及色谱峰纯度验证：根据RS-告伊春的全波长紫外吸收光谱，选择245 nm作为RS-告伊春测定波长，经试验在此波长下，供试品色谱中RS-告伊春与其他杂质峰达到很好的分离。

12.3 板蓝根颗粒质量标准中尚无对RS-告伊春素含量测定的方法，本实验建立的方法操作简单、快速，结果准确、可靠，可作为板蓝根颗粒质量控制依据。

[1]崔田,张祖亮.高效液相色谱法测定板蓝根颗粒中表告依春含量[J].中国药业,2012,21(8):50-51.

[2]国家药典委员会.中国药典(一部)[S].2010年版.北京:中国医药科技出版社,2010.

[3]安益强,贾晓斌,陈彦,等.HPLC-DAD法测定板蓝根药材及其制剂中主要抗病毒生物碱含量[J].中成药,2009,31(5):733-736.

[4]莫迎.不同提取方法对板蓝根中(R,S)-告依春的影响[J].中医药导报,2011,17(6):89-91.

[5]王瑞,杨海英,杨琪伟,等.板蓝根的质量标准研究[J].中草药,2010, 41(3):478-450.

Determination of RS-Goitrin in Isatidis Radix Granula by HPLC

ZHU Wen-deng, ZHANG Qian, WU Cui, HUO Yan-Ping, LING Ya*
(Jiangsu Kangyuan Pharmaceutical Co., Ltd., Lianyungang 222047, China)

ObjectiveTo establish the determination method of RS-Goitrin in isatidis radix granula.MethodsUsing high performance liquid chromatography (HPLC) method, Kromasil C18chromatographic column (250 mm×4.6 mm, 5μm), mobile phase of acetonitrile-0.01% phosphoric acid (6∶94), the velocity 1.0 mL/min, column temperature 30 ℃, detection wavelength of 250 nm.ResultsPuerarin in sample quantity is 1.94～30.98 μg/mL range, show a good linear relationship (r=0.9997). Quantitative limit of 7.12 ng/mL, the recovery was 96.1%, RSD was 1.6% (n=9).ConclusionThis method is rapid and accurate. The stability of the method, good repeatability, and can be used for isatidis radix granula quality control are analyzed.

Isatidis radix granula; RS-Goitrin; High performance liquid chromatography (HPLC)

R282.710.3

B

1671-8194（2015）06-0051-02